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[发明专利]一种黄瓜核糖体的提取方法及其应用-CN202310874177.3在审
发明人：段莉;曾斌;张行 -专利权人：深圳市第二人民医院（深圳市转化医学研究院）;中国科学院深圳先进技术研究院
申请日： 2023-07-17 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种核糖体的提取方法，属于核糖体提取技术领域。在本发明中，将黄瓜块与PBS溶液混合打浆，经第一离心、第二离心、第三离心、超速离心和第四离心，制备得到了80S黄瓜核糖体。提取得到的80S黄瓜核糖体比较完整、得率高，从500g的黄瓜中可以提取备约2400OD26080S的核糖体，解决了核糖体提取困难、收率低的问题，为蛋白结构解析和功能分析奠定了基础。
一种黄瓜核糖体提取方法及其应用

[发明专利]一种铁甲草胚性愈伤组织诱导及悬浮细胞培养方法-CN202310866060.0在审
发明人：杨亚利;翟明;罗海华;张鲁斌;仝盼盼;戴芊芊 -专利权人：嘉应学院
申请日： 2023-07-13 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种铁甲草胚性愈伤组织诱导及悬浮细胞培养方法。本发明以无菌培养的铁甲草幼苗嫩叶为外植体，将其诱导产生易碎胚性愈伤组织，优化影响细胞悬浮系培养的不同营养条件和培养条件，从而建立铁甲草悬浮细胞系的培养方法，利用该方法获得能够长期继代培养并能形成均一化的单细胞和小细胞团的培养体系。通过HPLC测定，在同等质量下，铁甲草悬浮细胞的大黄素含量是原药材的12.22倍。铁甲草悬浮细胞系在大黄素的生产方面具有一定的潜力，具有较好的应用前景。
一种铁甲草胚性愈伤组织诱导悬浮细胞培养方法

[发明专利]一种快速高密度培养沙漠蔷薇悬浮细胞高产绿原酸的方法-CN202210927324.4有效
发明人：周爱梅;张齐;肖巧学;黄卓琼 -专利权人：肽源（广州）生物科技有限公司
申请日： 2022-08-03 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于植物组织培养类的化妆品原料领域，公开了一种快速高密度培养沙漠蔷薇悬浮细胞高产绿原酸的方法。该方法包括无菌叶片的获得、愈伤组织诱导、愈伤组织的继代增殖、悬浮细胞的培养和筛选，规模性放大培养，高产绿原酸诱导。该方法以沙漠蔷薇植株新鲜幼嫩叶片为外植体，可快速诱导细胞脱分化形成愈伤组织，愈伤组织经过固体继代及液体震荡培养，筛选获得可进行高密度悬浮培养细胞系，其可以在一个培养周期内，约5～7天沙漠蔷薇悬浮细胞鲜重就达到600‑800g/L；本发明悬浮细胞生长速度快、可耐受高转速、可实现高密度培养，使得该技术具有耗时短、成本低，获得的悬浮细胞密度高等特点。
一种快速高密度培养沙漠蔷薇悬浮细胞高产绿原酸方法

[发明专利]一种植物干细胞系及其建立方法和应用-CN202310731023.9有效
发明人：张杰;吴红升 -专利权人：苏州普朗特尔皮肤细胞科技有限公司
申请日： 2023-06-20 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及植物干细胞系及其建立方法和应用，其中，建立植物干细胞系的方法包括（a）、干细胞培育；（b）、干细胞筛选；（c）、干细胞继代培育：每代培育结束后、下次继代培育之前，都进行上述干细胞筛选步骤（b），以获得来自于一个克隆的植物干细胞团块；（d）、干细胞筛选；（e）、干细胞建系：每代培育结束后、下次继代培育之前，都进行上述干细胞筛选步骤（d），直至获得一个或多个植物干细胞系；（f）、干细胞系驯化获得性状稳定、分裂稳定、分裂快速的一个或多个植物干细胞系。
一种植物细胞系及其建立方法应用

[发明专利]一种适用于酶解艾草叶片组织的酶解液、艾草叶片组织原生质体的制备方法及其应用-CN202111263878.0有效
发明人：范黎明;朱燕敏;王佳琦;殷昊;李想;佟思雨;刘宇华;肖云平 -专利权人：上海欧易生物医学科技有限公司
申请日： 2021-10-27 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于酶解艾草叶片组织的酶解液，所述酶解液包括酶解液A和YF缓冲液，所述酶解液A中含有2％(m/v)纤维素酶R‑10、0.4％(m/v)离析酶R‑10、0.1～1％(m/v)果胶酶、1～3％(m/v)半纤维素酶、0.45～0.55mol/L甘露醇、20mM MES、20mM KCl、10mM CaCl2、0.1％(v/v)BSA，溶解于超纯水中；所述YF溶液中含有20mM MES、20mM KCl、0.1％(v/v)BSA、0.5mol/L甘露醇、1～3％(m/v)聚乙烯吡咯烷酮PVP‑40，溶于超纯水中。本发明还公开了上述酶解液在制备艾草叶片组织原生质体中的应用，所述制备方法包括配置酶解液、样本预处理、酶解、过滤、离心、洗涤原生质体沉淀、镜检原生质体活性。本发明还公开了上述制备方法制备获得的艾草叶片组织原生质体在单细胞转录组测序中的应用。
一种适用于艾草叶片组织酶解液原生质体制备方法及其应用

[发明专利]雪莲细胞的快速悬浮培养和遗传转化方法-CN202211631251.0有效
发明人：付春祥;吴振映;徐悦;孔秀雅;刘雨辰;许润海 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2022-12-19 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种雪莲细胞的快速悬浮培养和遗传转化方法的方法，属于植物基因工程技术领域，所述方法步骤如下：选取雪莲种子，加赤霉素浸泡过夜；消毒，然后置于MS0培养基上培养，得到的雪莲的无菌苗，将无菌苗剪碎置于愈伤诱导培养基诱导出愈伤，将愈伤切碎；置于3/4MS愈伤诱导水培培养基中，获得悬浮愈伤系，将悬浮愈伤系浸泡到制备好的侵染液，然后转移到筛选培养基3/4MS培养基诱导愈伤1个月；将新长出的愈伤转移到分化筛选培养基3/4MS诱导再生芽3‑4个月，再转移到MS0生根培养基生根2‑3周；本发明首次将雪莲的遗传转化体系提高到85％以上，本发明在雪莲的遗传转化过程中全程使用GFP荧光蛋白进行实时监控，为基因工程改造雪莲，创制高产优质雪莲细胞系，推动雪莲的资源利用奠定基础。
雪莲细胞快速悬浮培养遗传转化方法

[发明专利]一种玉米根系原生质体制备与转化方法-CN202310870062.7在审
发明人：傅竞也;燕杰;王强;王丽平;陈懿瑶;裴文争;马奔;何林倩;朱丽 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2023-07-14 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本申请公开了一种玉米根系原生质体制备与转化方法，包括以下步骤：(1)选取Mo17种子，获取玉米根系；(2)将玉米根系切成圆柱体，用甘露醇进行高渗处理；(3)配制酶解液，将玉米根系放入酶解液中，在23‑28℃，50‑60rpm条件下避光酶解4‑8小时；酶解液是按照以下方法配制的：按照终浓度为1‑2％(m/v)纤维素酶、0.5‑0.8％(m/v)离析酶、0.4‑0.8M甘露醇溶液、10mM MES补足ddH2O至10mL；55℃水浴10min，每隔2min颠倒摇匀一次，然后加入终浓度为10mM CaCl2、0.1％(v/v)BSA，用0.45mm滤膜过滤灭菌备用；(4)收集玉米根系原生质体；(5)原生质体活性鉴定。本发明能够在较短时间内获得大量且活性较好的玉米根系原生质体细胞，可以快速完成外源基因的转化。
一种玉米根系原生质体制备转化方法

[发明专利]一种枇杷外泌体的制备方法-CN202311102692.6在审
发明人：李惠华;吴美芳;张永安;王伟;叶秋萍;施建羽;陈菲 -专利权人：福建省亚热带植物研究所
申请日： 2023-08-30 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种枇杷外泌体的制备方法，步骤一，配备枇杷外泌体培养基；步骤二，在培养基中培养枇杷悬浮细胞；步骤三，在枇杷悬浮细胞对数生长期分离外泌体；或在枇杷悬浮细胞平台期后期，加热至33‑37℃，处理2‑4d后分离外泌体。区别于以往植物外泌体提取材料，多采用种植材料收获的鲜样，外泌体提取结果容易受季节及环境影响。本发明采用悬浮培养细胞提取，可人工调控、周年生产。以植物悬浮培养方式获取枇杷外泌体，在第一种方式中，在对数生长期收获以节约时间成本，与平台期收获在外泌体外观和颗粒数上没有显著性差异；在第二种方式中，在收获期前一时间进行适度高温处理，可以显著增加外泌体的颗粒数，同时外泌体的形态无明显差异。
一种枇杷外泌体制备方法

[发明专利]一种用于治疗心血管的三七干粉外泌体提取方法及应用-CN202310978367.X在审
发明人：蒋立虹;邵瑞飞;滕兆伟;姚梦瑜;曹宇;刘劼;赵婕;程雪梅;罗建丽;陈锐;李昆林;杨童硕 -专利权人：云南省第一人民医院;昆明理工大学
申请日： 2023-08-04 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于生物与新医药技术领域，公开了一种用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法及应用，包括：从市面购买得到三七成品纯干粉，将三七干粉过筛，加入适量PBS，放入匀浆机中制成糊状匀浆，过滤；加入蛋白酶抑制剂，并用1mol/L Tris‑HCl调节pH至7，依次500g、1000g、15000g离心20min，取上清后，再100000g离心1h；取沉淀，用20mmol/L Tris‑HCl重悬沉淀，并充分涡旋；保存在‑80℃或更低温度下备用检测。本发明第一次成功提取一种三七干粉外泌体，通过多种实验，发现三七干粉外泌体可以增强HUVECs的增殖能力，抑制其凋亡，促进其迁移，具有治疗心血管疾病的潜力。
一种用于治疗心血管三七干粉外泌体提取方法应用

[发明专利]藏红花器官来源的原生质体分离方法及其应用-CN202310670968.4在审
发明人：李丽琴;席晓圆;宋佳;李静;钱晓东;周桂芬 -专利权人：湖州市中心医院
申请日： 2023-06-07 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本申请属于植物细胞分离技术领域，特别是藏红花器官来源的原生质体分离方法及其应用，将藏红花叶片和/或花瓣剪成1mm左右的细丝；后将制备的细丝浸没于酶解液中，酶解液包括1～2wt%Celulose R‑10，0.2～0.5wt%Macerozyme，20 mmol/L MES，0.1wt％BSA，0.4～1.0 mol/L Mannitol，10 mmol/L CaCl2，20 mmol/L KCl，酶解液的pH为5.5～5.8，酶解条件为压强30 KPa下抽真空30 min，并于50 rpm，28℃的避光条件下裂解植物组织3～4 h；后加入W5溶液终止酶解反应，W5溶液包括154 mmol/L NaCl，125 mmol/L CaCl2，5 mmol/L KCl，2 mmol/L MES；W5溶液的pH为5.5～5.8；终止反应后的溶液离心，弃上清，加入预冷的W5溶液重悬原生质体，冰浴并使原生质体自然沉降，除去上清即可。本申请取材方便，分离高效、快速，每克鲜重组织可获得105个活性优异的细胞。
藏红花器官来源原生质体分离方法及其应用

[发明专利]一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法-CN201911370375.6有效
发明人：孙鑫博;张冬梅;边秀举;王亭亭;张迈;朱俊飞;王丽宏;李会彬 -专利权人：河北农业大学
申请日： 2019-12-26 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法，属于原生质体制备领域，该方法包括以下步骤：(1)取匍匐翦股颖无菌苗，剪取其幼嫩的叶片和叶鞘组织，用双面刀将其切成不超过1mm的小段，及时将小段放置于0.6M的甘露醇溶液中，获得匍匐翦股颖样品；(2)将匍匐翦股颖样品加入到酶解液中，先真空30min，然后取出在室温条件下酶解3‑4h；(3)酶解完成后，离心过滤重悬洗涤，即获得匍匐翦股颖原生质体。本发明提供的制备方法能够获得大量形态正常，杂质少，无破损的匍匐翦股颖原生质体，能够满足后续的实验要求。
一种匍匐翦股颖原生质体制备方法

[发明专利]三角草外泌体提取方法及用途-CN202211084583.1有效
发明人：刘琳娜;王蕾;程鹏;李燕林;王宏;徐娟;陈冠;黄清秀;李昕;安海文;袁玲;杨文钦;江茜;康利;李锦山;林芬娜;甘沛敏;阮绍伟;潘钰榕 -专利权人：中山市中医院;天津市医药科学研究所（天津市医药与健康研究中心）
申请日： 2022-09-06 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种三角草外泌体提取方法及用途，利用密度梯度离心法提取三角草外泌体活性成分，因外泌体不具备细胞核结构，在宿主体内不能扩增，临床应用具有较高的安全性，可以用于治疗创面修复及制成治疗创面修复的药物，而且，由于外泌体自身具有穿梭特性，并富含miRNA成分，可从植物体“跨界”调控其他生物体，未来有可能能够替代皮肤移植用于创伤愈合，应用前景极其广阔。
三角草外泌体提取方法用途

[发明专利]一种灵芝外泌体及其制备方法和应用-CN202311079193.X在审
发明人：谢丽源;陈影;曹雪莲;唐杰;吴翔;许瀛引;彭卫红 -专利权人：四川省食用菌研究所
申请日： 2023-08-25 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于生物领域，具体涉及一种灵芝外泌体及其制备方法和应用。本发明灵芝外泌体的制备方法包括如下步骤：A、将灵芝液体发酵培养得发酵液；B、发酵液经过多次过滤‑离心‑重悬‑离心，收集得到灵芝外泌体。本发明灵芝外泌体的制备方法实现了菌源性外泌体获取的途经，能够同时保证外泌体的含量、纯度、功效，本发明灵芝外泌体采用透镜电镜形态观察为圆形或者椭圆形的环状结构；采用粒子追踪分析仪分析粒径和浓度表明，平均粒径大小为71.25nm，浓度为3.04×109个/mL。而且本发明制备方法效率高，操作简单，易大规模生产。
一种灵芝外泌体及其制备方法应用

[发明专利]一种甘蔗花粉孢子的提取方法-CN202210445472.2有效
发明人：李素丽;张德梅;韩世健;王瑞 -专利权人：广西大学
申请日： 2022-04-26 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，提供一种甘蔗花粉孢子的提取方法，首先将消毒的甘蔗幼穗的小花对半剪开，在研钵中研磨至幼穗组织破碎；把研磨后的幼穗组织转移至离心管中进行振荡，振荡后使用100目、400目细胞筛过滤；对过滤后的浆液进行三次离心，收集底部的花粉孢子；往另一支空的离心管中加入质量分数为20％的麦芽糖溶液，将花粉孢子重悬在麦芽糖溶液上，加入CPW缓冲液，进行第四次离心，使花粉孢子在离心管中形成两条明显的环形带，即悬浮在上方的活细胞带和沉在底部的死细胞带；收集在界面上形成活细胞带的花粉孢子。本发明能够高效地提取纯度高、活力强的花粉孢子，为提高甘蔗花培成功率打下基础。
一种甘蔗花粉孢子提取方法

[发明专利]芹菜外泌体组合物及其制备方法与应用-CN202210487919.2有效
发明人：王从义;王晓慧;祝贺;刘静;周庆;向科;张述;孙飞 -专利权人：武汉义诺泰克医疗器械有限公司
申请日： 2022-05-06 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供一种芹菜外泌体组合物及其制备方法与应用。所述芹菜外泌体组合物包括芹菜外泌体、以及至少一种可用于溶解或装载芹菜外泌体的辅料。芹菜外泌体组合物制备方法包括如下步骤：S1.取芹菜提取部位并清洗干净，控干后放入破壁机中榨汁；S2.将榨出的芹菜汁过滤，并提取过滤液中的芹菜外泌体；S3.将提取的芹菜外泌体装载于辅料中，低温保存待用。本发明还公开了上述芹菜外泌体组合物在治疗高血压小鼠和高血压患者的应用。本发明提供的芹菜外泌体组合物可以稳定降压，来源绿色，无副作用，且可有效缓解高血压介导心肌肥厚发生，具有重要的临床意义和广阔的市场前景。
芹菜外泌体组合及其制备方法应用

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