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[发明专利]一种检测人鼻粘膜调节性T淋巴细胞的方法-CN201210219643.6有效
发明人：李文秀;白素娟;金姝;闫佩毅;庞权 -专利权人：上海市普陀区人民医院
申请日： 2012-06-29 - 公布日： 2012-10-03 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，本发明公开了一种检测人鼻粘膜调节性T淋巴细胞（Treg）的方法，其包括如下步骤：1）鼻粘膜细胞的获取：将鼻粘膜刮匙的勺状末端伸入鼻腔至下鼻甲的中下端，将所述刮匙轻轻按压在粘膜表面，然后向外移动4-5mm，重复此动作2-3次，取出刮匙，可见勺状末端内有白色粘性物，获得鼻粘膜标本；2）单细胞悬液的制备：将所述鼻粘膜标本置于生理盐水中，轻轻吹打，使细胞分散混匀得到单细胞悬液；3）调节性T淋巴细胞检测：采用流式细胞术分析所述单细胞悬液的T淋巴细胞。
一种检测粘膜调节淋巴细胞方法

[发明专利]一种穿刺组织的消化处理方案-CN202310979254.1在审
发明人：吴声鹏;杨文哲;李强;黄海波 -专利权人：云准医药科技（广州）有限公司
申请日： 2023-08-05 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种穿刺组织的消化处理方案，包括组织的分离和悬浮、组织的酶消化、消化液的过滤和初步离心、去除红细胞、再次离心、清洗细胞团、丢弃上清和重复清洗和鉴定，本发明通过各种消化酶的组合方案，处理成可以达到单细胞文库上机标准的单细胞悬液，高效的单细胞分离、高纯度的细胞悬液、保留细胞活性以及低样本消耗，有效从有限的穿刺样品中分离出足够数量的单个细胞或小块细胞团，满足下游应用需求，温和的分离条件和多重清洗，可以最大限度保留细胞的活性，并且通过分离设备，有效分离消化液中的小块细胞团，同时最大限度保留细胞的活性，并去除多余的基质，获得高纯度准备用于下游应用的细胞悬液和油包细胞。
一种穿刺组织消化处理方案

[发明专利]一种去除有核红细胞的血液单细胞悬液的制备方法-CN202110135545.3在审
发明人：马广伟;郭蕊;汪继超 -专利权人：海南师范大学
申请日： 2021-02-01 - 公布日： 2021-06-11 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明公开一种去除有核红细胞的血液单细胞悬液的制备方法，抽取新鲜的有核红细胞血液至含有50uL EDTA‑K2的无酶无菌离心管中，20℃孵育10min，随后离心弃血浆；向离心管中加入预冷的有核红细胞裂解液，孵育后离心弃上清；向离心管中再加入预冷的有核红细胞裂解液，孵育后离心弃上清；再向离心管中加入无酶无菌PBS，利用细胞计数仪或血球计数板检测细胞浓度，并通过台盼蓝染色计算细胞活率，加入合适体积无酶无菌PBS用于稀释单细胞悬液，使细胞终浓度满足10x Genomics上机操作。本方法能够实现低成本、快速、高效地获得去除有核红细胞的血液单细胞悬液，并保证其它血细胞保持良好活力。
一种去除红细胞血液单细胞制备方法

[发明专利]诱导多能干细胞有饲养层的培养方法及应用-CN202111431208.5在审
发明人：江斌;熊忠贤;熊琼琼 -专利权人：江西中洪博元生物技术有限公司
申请日： 2021-11-29 - 公布日： 2022-03-18 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明提供了诱导多能干细胞有饲养层的培养方法及应用，培养方法包括：1)在培养瓶中加入明胶，摇匀覆盖底面，放于37℃培养箱至少15min，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液，将复苏的MEF饲养层细胞制成单细胞悬液并传代至P3代，加入到培养瓶中；2)将复苏的iPS细胞制成单细胞悬液，转移至铺好MEF饲养层细胞的培养板中，置于37℃，5％CO2培养箱继续培养；3)将传代培养的iPS细胞用0.125％的胰酶消化细胞后，用不含MEF的小鼠胚胎干细胞培养液制成单细胞悬液，接种在0.1％明胶预先包被的培养皿中，37℃孵育50min去除MEF后，将上液移入培养板中培养，以制备EBS拟胚体。
诱导多能干细胞饲养培养方法应用

[发明专利]一种动物组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及制备方法-CN202210970056.4在审
发明人：沈超;熊君;廖聪 -专利权人：元道生命科技(武汉)有限公司
申请日： 2022-08-12 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种动物组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及制备方法，所述试剂盒缓冲液、酶a、酶b和酶c；所述酶a用于对纤维蛋白和黏蛋白进行水解；所述酶b用于对多种组织类型进行深入消化；所述酶c用于对肝脏、骨、本发明能够更高效地从动物多种组织中解离获得对应的单细胞悬液，可重复性高，且得到的单细胞纯度和活力高。
一种动物组织制备单细胞解离试剂盒方法

[发明专利]一种人头皮毛囊单细胞悬液及其制备方法和用途-CN202011575524.5有效
发明人：孙亚梅;顾文;马少华;聂述聆 -专利权人：上海宜治生物科技有限公司
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2022-05-03 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种人头皮毛囊单细胞悬液的制备方法，包括如下步骤：第一步，在低温环境中，通过消化酶溶液预处理新鲜离体头皮组织；第二步，在30‑37℃中进行消化酶溶液消化处理即可有效的解离出毛囊；第三步，将解离到的毛囊进行胰酶‑EDTA消化，即可得人头皮毛囊单细胞悬液。此外，本发明公开了采用上述方法制备得到的人头皮毛囊单细胞悬液及用途。本发明方法解离到的毛囊，耗时短且完整度高，后续分离到的单细胞群数量多、活力高，很好的解决了从离体头皮组织块中分离毛囊不完整、细胞提取时间长、细胞数量活力低的问题，为后续的细胞移植方面的应用奠定了一定的基础
一种人头皮毛单细胞及其制备方法用途

[发明专利]分离牙胚单细胞的方法及应用-CN201811367582.1在审
发明人：裴端卿;蔡景蕾;赵艺帆;王曜峰;陈树彬;陈小明 -专利权人：中国科学院广州生物医药与健康研究院
申请日： 2018-11-16 - 公布日： 2020-05-26 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及单细胞的分离方法，具体涉及一种对牙胚组织单细胞分离的方法。该方法包括依次利用胶原酶、胰蛋白酶和DNA水解酶对牙胚组织进行消化处理，获得牙胚单细胞。本发明所提供的分离单细胞的方法，操作简单，耗时短；对细胞伤害小，细胞能够最大程度维持原始特性；得到的单细胞悬液无黏连，符合单细胞测序要求。
分离牙胚单细胞方法应用

[发明专利]针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及方法-CN201811636608.8在审
发明人：陈岱 -专利权人：上海烈冰生物医药科技有限公司
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2019-04-12 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及方法，所述试剂盒包括BufferE、对细胞裂解产生的DNA进行消化的酶A、用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞的酶B、对多种组织类型进行消化的酶本发明能够更高效地从人胃组织中解离单细胞悬液，可重复性高，且得到的单细胞活力高、表位完整，不会影响后续实验。
单细胞悬液试剂盒解离人胃消化制备液体渗透能力单个细胞可重复性细胞裂解组织类型表位

[发明专利]一种分离纯化大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的方法-CN201410618769.X在审
发明人：张涛;穆祥;胡格;姜代勋;董虹;孙雄;杨重锦 -专利权人：北京农学院
申请日： 2014-11-06 - 公布日： 2015-03-11 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：一种大鼠肠黏膜组织中分离、纯化微血管内皮细胞的方法，其特征在于刮取大乳鼠空肠黏膜组织用酶消化处理为单细胞悬液，采用免疫磁珠分选技术获得纯化的目标细胞。取大乳鼠空肠黏膜组织，用II型胶原酶消化制备单细胞悬液，然后与CD31免疫磁珠孵育结合，利用磁珠分选纯化系统筛选CD31+细胞，DNaseI溶液消化去除CD31+细胞结合的磁珠，获得高纯度的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞本发明的优点是通过酶消化制备单细胞悬液和免疫磁珠分选纯化，可以从大鼠肠黏膜组织中分离提取到高纯度的微血管内皮细胞。
一种分离纯化大鼠黏膜微血管内皮细胞方法

[发明专利]一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法-CN202211581145.6在审
发明人：林传勇;庞美霞;吴声鹏;陈志豪 -专利权人：广州元信生物科技有限公司
申请日： 2022-12-09 - 公布日： 2023-02-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，主要是通过酶I和酶II两次消化处理后，结合过滤、离心清洗以及红细胞裂解等操作获得纯化后的单细胞悬液。本发明优点包括：操作简便，无需特殊仪器设备即可实现，可于短时间内获得高活性的肾脏单细胞悬液，经细胞活性检测发现，经最适酶浓度所分离得到的肾脏单细胞产量高达1.6×106
一种将离体肾脏组织解离单细胞方法

[发明专利]一种用于改善卵巢早衰的干细胞外泌体复合制剂制备系统-CN202210118697.7有效
发明人：芦福建 -专利权人：美亚宜彬生物科技（北京）有限公司
申请日： 2022-02-08 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12M1/38 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于改善卵巢早衰的干细胞外泌体复合制剂制备系统，包括，子宫内膜干细胞外泌体培养装置，用于将第二代到第八代的子宫内膜干细胞培养成子宫内膜干细胞外泌体，脐带间充质干细胞单细胞悬液培养装置，用于将第二代到第六代的脐带间充质干细胞培养成脐带间充质干细胞单细胞悬液；干细胞外泌体复合制剂装置，用于将脐带间充质干细胞单细胞悬液和子宫内膜干细胞外泌体混合形成干细胞外泌体复合制剂；中控单元，其根据子宫内膜干细胞外泌体蛋白含量对各装置参数进行调节，以使生成的子宫内膜干细胞外泌体蛋白含量符合预设标准
一种用于改善卵巢早衰干细胞外泌体复合制剂制备系统

[实用新型]一种单细胞悬液制备装置-CN202121268973.5有效
发明人：雍军;包仁艳 -专利权人：北京极客基因科技有限公司
申请日： 2021-06-08 - 公布日： 2021-12-14 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本实用新型涉及单细胞悬液制备技术领域，具体为一种单细胞悬液制备装置，包括安装板，安装板上固定有两个呈对称分布的制备筒，制备筒内设置有安装环，安装环内固定有细胞过滤膜，制备筒靠近底端位置处设置有搅拌盘，搅拌盘的圆周外壁上固定有分离刀片本实用新型通过两个可以同时运行的制备筒，可以一次性制备两份不同的单细胞悬浮液，同时制备筒内设置可以升降的细胞过滤膜以及搅拌盘，可以将分离和过滤两个步骤同时进行，解决了一般单细胞悬液制备过程中，效率较低，且分离步骤和过滤步骤经常分开进行，容易造成悬浮液被污染的问题。
一种单细胞制备装置

[发明专利]一种用于单细胞测序的牛瘤胃上皮组织解离方法-CN202110668331.2有效
发明人：孙会增;吴家劲;刘潇菡;朱森林;顾凤飞;刘建新 -专利权人：浙江大学
申请日： 2021-06-16 - 公布日： 2023-02-14 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于单细胞测序的牛瘤胃上皮组织解离方法，包括瘤胃组织机械分离、酶消化处理、杂质过滤、细胞清洗、再次过滤、细胞观察和质控、死细胞去除等。本发明可以获得高活性、高细胞数、低污染的瘤胃组织单细胞悬液，保证有效单细胞数的产出和单细胞核酸的质量，为单细胞测序和数据分析奠定基础；本发明解决现有技术中尚未系统完善牛瘤胃单细胞解离技术的问题。
一种用于单细胞瘤胃上皮组织解离方法

[发明专利]间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系建立及肿瘤微环境中间充质干细胞遗传稳定性变化特征-CN201210502308.7无效
发明人：刘永琦;李金田;张月梅;舍雅莉;张毅;李屹;秦洁;王倩 -专利权人：甘肃中医学院
申请日： 2012-11-30 - 公布日： 2013-05-01 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系，是采用具有PET膜的Transwell悬挂式培养小室结合6孔板进行非接触共培养，取对数生长期的细胞用0.25﹪胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，计数、调整细胞密度后接种本发明的有益效果为：本发明提供的间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系，能够观察了肿瘤微环境对MSC遗传稳定性的影响，将为进一步深入探讨肿瘤微环境中MSCs生物学性状变化及其临床应用提供技术支撑及其研究依据
间充质干细胞肿瘤细胞培养体系建立环境中间遗传稳定性变化特征

[发明专利]用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法-CN202310054511.0在审
发明人：郝升;南春旭;李霞;丁悦;杨中正;许秀勤;王邹 -专利权人：武汉生物样本库有限公司
申请日： 2023-02-03 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，涉及OCT包埋冰冻组织的细胞核提取技术领域，本方法先切掉经过OCT包埋剂包埋的冰冻组织表面的OCT包埋剂，切片，剥离切片周围多余的OCT包埋剂；然后在所述切片中加入裂解液，进行研磨、裂解；再加入洗涤液混匀，过细胞筛，离心弃上清；再加入洗涤液重悬、沉淀；最后吸取上层液体过枪头筛若干次，加入核悬液后离心弃上清，再加入核悬液重悬，完成细胞核提取采用本方法提取的OCT包埋剂包埋的动物组织细胞核悬液，最终提取的含细胞核液体中细胞核总量明显增加，杂质明显减少，细胞核的形态完整度非常高，能够满足单细胞测序的要求。
用于单细胞 oct 包埋冰冻组织细胞核提取方法