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[发明专利]一种外泌体的分离纯化方法-CN202310898804.7在审
发明人：杨诗逸;翟艳华;崔闯;赵进修;何新军;许可 -专利权人：苏州唯思尔康科技有限公司
申请日： 2023-07-21 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种外泌体的分离纯化方法。该分离纯化方法包括：(1)外泌体供体细胞培养液经过深层过滤和除菌过滤得到外泌体供体细胞培养上清液；(2)采用切向流过滤浓缩外泌体供体细胞培养上清液，得到浓缩液；(3)将浓缩液与全能核酸酶孵育后微滤得到粗提溶液；(4)将粗提溶液依次通过第一层析柱和第二层析柱进行层析分离，得到纯化后的外泌体溶液，其中，第一层析柱为采用具有分子筛功能、离子交换功能和疏水功能中的至少两种功能的多功能填料的填料柱，第二层析柱为阴离子交换膜层析柱。相比已有技术，本发明方法不仅外泌体纯度和质量有进一步提升，而且能够真正适用于工业化水平外泌体分离纯化。
一种外泌体分离纯化方法

[发明专利]一种肾小管上皮原代细胞的提取方法及其应用-CN202310861355.9在审
发明人：成欢;程悦 -专利权人：中国人民解放军西部战区总医院;西南交通大学
申请日： 2023-07-13 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本申请涉及细胞提取和培养技术领域，尤其涉及一种肾小管上皮原代细胞的提取方法及其应用；所述方法包括：破碎肾脏皮质，并机械研磨过滤，后离心，得到第一细胞沉淀；向第一细胞沉淀中加入红细胞裂解液，并混合和静置，后离心，得到第二细胞沉淀；向第二细胞沉淀中加入培养液，并混匀，得到培养基；对培养基孵化至细胞贴壁，后换液和培养，得到肾小管上皮原代细胞；机械研磨过滤采用注射器头于滤网中研磨和过滤的方式进行，注射器头的粗糙度Ra为5μm～10μm，注射器头的转速为15r/min～20r/min；该方法中不需加入特定的细胞分离液进行分离，因此可以降低细胞分离的难度并缩短细胞分离所用的时间。
一种肾小管上皮细胞提取方法及其应用

[发明专利]人肝实质细胞的培养方法、培养人肝实质细胞、培养基及其制造方法、人肝非实质细胞的培养上清的制造方法-CN202280009517.X在审
发明人：增田范生;佐藤俊朗 -专利权人： JSR株式会社;庆应义塾
申请日： 2022-01-14 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：一种人肝实质细胞的培养方法，包含如下步骤：将人肝实质细胞用含有人肝非实质细胞的培养上清、Wnt信号传导促进剂和促细胞分裂生长因子的培养基进行培养。
实质细胞培养方法培养基及其制造人肝非

[发明专利]一种适用于流感病毒大规模培养的无血清全悬浮MDCK细胞系及其制备方法和应用-CN202310792718.8在审
发明人：吴业红;李爽;隋立娜;李臣锋;徐军;迟祥;吕原;尚琼;孙立影 -专利权人：长春生物制品研究所有限责任公司
申请日： 2023-06-30 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：一种适用于流感病毒大规模培养的无血清全悬浮MDCK细胞系及其制备方法和应用，涉及流感疫苗领域，该方法为：在T瓶中逐步增加无血清培养基的比例并降低含血清培养基的比例直至完全将含血清培养基替换为无血清培养基，以传代方式驯化原始MDCK细胞，传代2‑4次后继续降低含血清培养基的比例继续传代并观察细胞状态，重复此逐渐传代并减少含血清培养基比例的步骤最终使MDCK细胞完全适应无血清培养；将MDCK细胞转移至摇瓶中，继续进行悬浮驯化，筛选适应于悬浮培养的细胞。所制备的MDCK细胞系具有较低的成瘤性，无转移瘤，细胞生长稳定，病毒敏感性高，并且适用于生物反应器及流感病毒、细胞基质流感疫苗大规模培养和制备。
一种适用于流感病毒大规模培养血清悬浮 mdck 细胞系及其制备方法应用

[发明专利]一种通过氮气爆破分离单细胞中线粒体的方法-CN202310936164.4在审
发明人：孙爱军;葛均波;黄涯;董震;孙晓垒 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种通过氮气爆破分离单细胞中线粒体的方法，属于生物医药技术领域。包括：将盛放有单细胞/线粒体分离缓冲液的容器和保持低温的冰盒一起放置进氮气爆破箱中，通过氮气加压和减压的方式对单细胞进行爆破处理，得到单细胞破碎后的混悬液，离心去除细胞碎片，然后再次离心收集线粒体。本发明通过使用氮气爆破的方法，在低温下进行单细胞破碎，通过调节氮气加压的阈值和减压速度控制破碎阈值，使之适应不同的单细胞悬液、贴壁细胞或者全血等，这一方法不仅能更好地适应不同的细胞，还能提高线粒体的分离效率，可以更好地保持线粒体的完整性和活性；具备极佳的应用价值。
一种通过氮气爆破分离单细胞线粒体方法

[发明专利]肠肌层细胞分离提取方法及分离提取试剂-CN202310059298.2在审
发明人：刘颂;陈凯;胡琼源;管文贤 -专利权人：南京鼓楼医院
申请日： 2023-01-17 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种肠肌层细胞分离提取方法及分离提取试剂，肠肌层细胞分离提取试剂由粘液层解离液、黏膜层解离液、黏膜下层解离液、肌层消化液以及中和液组合而成，所述粘液层解离液、黏膜层解离液和黏膜下层解离液中分别含有0.1‑1.0wt%胰蛋白酶的缓冲液，胰蛋白酶在粘液层解离液、黏膜层解离液和黏膜下层解离液中浓度呈降阶梯式变化，黏膜下层解离液中还包含有弹性蛋白酶20‑40mU/ml；消化液是包含0.5‑0.75wt%胶原酶I/IV、15‑25U/ml中性蛋白酶以及150‑250U/mlDNaseI的缓冲液。本发明的分离提取试剂及提取方法具有提取肌层细胞活性高和肌层细胞暴露比例大的优点。
肠肌层细胞分离提取方法试剂

[发明专利]一种精准测量NGF蛋白相对细胞活性的方法-CN202310861840.6在审
发明人：宋拓;李巍巍;韩肖雄;卢珊;李海钰 -专利权人：白帆生物科技（上海）有限公司
申请日： 2023-07-14 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及生物制药技术相关领域，具体为一种精准测量NGF蛋白相对细胞活性的方法，本发明通过能科学重复出能测试NGF生物细胞活性的分析测试方法；不需要特定的人源或者鼠源的NGF蛋白，只要具有NGF靶点都能测试；用四参数拟合曲线的方式规定了结合活性的上限和下限，科学的指出结合活性的线性范围，并且符合药典和法规的要求，为生物药物的分析提供了可能；显色温度为25℃，在室温下就可完成反应，不需要另外的加热元件；检测方法的R2≥0.95，样品复孔CV控制在30％以内，精准和重复性很高，符合药物的中国、美国等国家的药物活性测试标准。
一种精准测量 ngf 蛋白相对细胞活性方法

[发明专利]一种快速富集培养食管固有腺类器官的方法及应用-CN202310909089.2在审
发明人：邹旸;张珊;王健;李胜 -专利权人：成都诺医德医学检验实验室有限公司;广州精科生物技术有限公司
申请日： 2023-07-24 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种快速富集培养食管固有腺类器官的方法及应用。本发明方法采用剥离整块食管固有腺组织‑固有腺组织块富集‑固有腺类器官培养的方法组合，在固有腺组织块的富集过程中加入特定的腺体组织富集组合物，在类器官的培养过程中加入特定的腺体类器官生长组合物，最后快速培养得到一种固有腺细胞纯度大于等于98％的人食管固有腺类器官。
一种快速富集培养食管固有器官方法应用

[发明专利]一种磁珠结合高速低温匀浆机分离组织线粒体的方法-CN202310938211.9在审
发明人：孙爱军;葛均波;黄涯;孙晓垒;董震 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种磁珠结合高速低温匀浆机分离组织线粒体的方法，属于生物医药技术领域。包括：在恒温低温环境下，将经过机械剪切和/或胶原酶消化后的组织碎块置于线粒体分离试剂中，在分离试剂中加入磁珠，在高速低温匀浆机中进行研磨，得到组织破碎后的混悬液，离心去除细胞碎片，再离心收集线粒体。本发明创新性地改进了组织线粒体分离程序中最重要的组织破碎部分，使得不同组织能够特异性地在较为恒定的低温环境中，在一定体积阈值之上，分离出完整的线粒体，提高了分离效率。本发明通过使用磁珠法，在高速低温匀浆机中进行组织破碎，能够提高线粒体的分离效率，保证线粒体的完整性和活性，具备极佳的应用价值。
一种结合高速低温匀浆分离组织线粒体方法

[发明专利]工程化迁移体及其制备方法和用途-CN202280007395.0在审
发明人：俞立;王东锔;戴宸;贾漠野;王硕;丁天伦;钟丘实;郑羿 -专利权人：北京迈格松生物科技有限公司
申请日： 2022-11-24 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：提供了一种工程化迁移体及其制备方法和用途，具体涉及一种制备迁移体的方法，所述方法包括使细胞产生相对位移继而产生源自所述细胞的迁移体。还提供了一种所述方法制备的迁移体，体外或离体制备的迁移体以及包含所述迁移体的递送系统。
工程迁移及其制备方法用途

[发明专利]一种组织类器官的制备方法-CN202111007532.4有效
发明人：姚斌;宋薇;李曌;朱冬振;黄沙;付小兵 -专利权人：中国人民解放军总医院
申请日： 2021-08-30 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种组织类器官的制备方法，该制备方法包括以下步骤：步骤1、采用细胞外基质构建生物墨水；步骤2、向步骤1获得的生物墨水中加入细胞悬液，获得含有细胞悬液的生物墨水；步骤3、将步骤2获得的含有细胞悬液的生物墨水置于37℃恒温培养箱中预培养1‑3天，获得预培养生物墨水；步骤4、将预培养生物墨水转移至3D生物打印机进行打印，获得3D打印块；步骤5、将3D打印块在室温下进行交联，再放置于培养箱中培养，即得组织类器官；本发明通过调整生物墨水比例与细胞浓度并进行预培养，形成初步细胞微球并进行打印，为含细胞3D生物打印中，形成功能性及异质性类器官提供了良好的方法。
一种组织器官制备方法

[发明专利]一种HEK293细胞培养基及其应用-CN202310843371.5有效
发明人：程成;林家会;黄思杨;马士棋;陈旭;陈刚 -专利权人：苏州依科赛生物科技股份有限公司
申请日： 2023-07-11 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提出了一种HEK293细胞培养基及其应用，培养基包括基础培养基和添加复合物，所述的基础培养基为DMEM培养基或HE01培养基的任意一种；所述的添加复合物包括：终浓度为2~3mmol/L的钙离子、终浓度为5~7mmol/L的镁离子、终浓度为1.1~1.5mg/L的纤连蛋白、终浓度为1.5~2μg/L TGF‑β1。上述复合物可以替代血清加入基础培养基直接用于HEK293细胞的贴壁传代培养，该复合物化学成分明确，获取和使用方便，价格低廉，适用于工业生产和研究用途。
一种 hek293 细胞培养基及其应用

[发明专利]一种喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的用途-CN202310930525.4在审
发明人：李童斐;韩宁;张磊;李留根;胡珺;李贤玉 -专利权人：湖北医药学院
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的用途，包括喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的方法，具体步骤如下：S1、使用Open‑Babel、AutoDock、PyMOL三种软件分析EGFR与喹诺酮类药物之间能否结合以及结合力的强弱。该喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的用途，实现一种安全有效的组织器官损伤修复策略，且能够有效预防机体损伤修复过程中出现的炎症反应，这为机体损伤的快速修复提供给了一种新方法，为喹诺酮类药物提供了一种新用途并揭示了其作用靶标，创伤、皮肤损伤、体内血管即器官损伤的快速修复是目前临床治疗过程中的难题，本发明发现了喹诺酮类药物可作为一种安全有效的药物促进细胞增殖，有助于机体各种损伤的恢复。
一种喹诺酮类药物作为 egfr 激活剂促进细胞增殖用途

[发明专利]一种利用丁酸供能生长并生成酮体的绵羊瘤胃上皮细胞株-CN202310708250.X在审
发明人：黄赞;秦静;张雅丽;刘军花;毛胜勇 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2023-06-15 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用丁酸供能生长并生成酮体的绵羊瘤胃上皮细胞株，该细胞株为绵羊瘤胃上皮细胞株05B7，于2023年4月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202392。同时公开了该细胞株的构建方法、培养方法与应用。本发明的细胞株可以利用丁酸供能生长、代谢并高表达生酮基因，因此可以应用于绵羊瘤胃上皮对丁酸吸收代谢的相关研究，绵羊瘤胃上皮中酮体生成与代谢的相关研究，并可以此细胞株为模型筛选促进反刍动物瘤胃生长发育、生酮等关键功能的添加剂。
一种利用丁酸生长生成酮体绵羊瘤胃上皮细胞株

[发明专利]通用供体细胞-CN202180094941.4在审
发明人： A·雷扎尼亚;瓦伦汀·斯卢奇 -专利权人：克里斯珀医疗股份公司
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本文提供了与多于一名受试者相容的遗传修饰的细胞，例如通用供体细胞，以及产生所述遗传修饰的细胞的方法。通用供体细胞在编码一种或更多种MHC‑I或MHC‑II人类白细胞抗原或MHC‑I或MHC‑II复合物的组分或转录调节因子的基因内或附近处包含至少一种遗传修饰，其中遗传修饰包括编码致耐受性因子和/或存活因子的多核苷酸的插入。通用供体细胞还可以在编码存活因子的基因内或附近处包含至少一种遗传修饰，其中所述遗传修饰包括编码第二致耐受性因子和/或不同存活因子的多核苷酸的插入。
通用供体细胞

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