本发明公开了一种用于检测分析可溶性CD25蛋白含量的酶联免疫试剂盒,试剂盒包括CD25‑5G1和CD25‑2D2两种抗人CD25单克隆抗体:所述的CD25‑5G1单克隆抗体,包括重链和轻链,其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:1;轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2;所述的CD25‑2D2单克隆抗体,包括重链和轻链,其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:3;轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4。本发明的酶联免疫试剂盒能够有效检测可溶性CD25含量。利用该试剂盒检测发现,健康人血清中含有一定基础水平的可溶性CD25蛋白,类风湿关节炎患者、Graves病患者、I型糖尿病患者血清可溶性CD25含量明显升高,与患者的临床分期、身抗体产生及疗效有相关性。