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[发明专利]一种海马原代细胞培养体系的建立方法-CN201711050527.5有效
发明人：林强;张博;秦耿;张艳红;张辉贤;李春燕 -专利权人：中国科学院南海海洋研究所
申请日： 2017-10-31 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种海马原代细胞培养体系的建立方法。包括以下步骤：将活体海马进行表面消毒，于无菌条件下取出胚胎或肝脏，胚胎或肝脏经漂洗培养液漂洗后用胰蛋白酶消化，过滤除杂，离心，去掉上清液，细胞沉淀用原代生长培养液重悬，制得单细胞悬液，将单细胞悬液移入添加有原代生长培养液的培养瓶中培养，每2‑3天按半量换液方式更换原代生长培养液。本发明建立了一种稳定的海马原代细胞培养体系，为海马种质资源保存、细胞生物学、免疫学等领域的研究奠定了基础。本发明建立的线纹海马原代细胞培养体系操作简单，重复性强，细胞生长稳定，也可适用于其它海龙科鱼类细胞原代培养体系的构建。
一种海马细胞培养体系建立方法

[发明专利]流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法-CN201710324078.2有效
发明人：彭西;张泽钧;袁施彬;吴邦元 -专利权人：西华师范大学
申请日： 2017-05-09 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法，包括以下步骤：鸡处死后，获取胸腺组织并制取单细胞悬液；取所述单细胞悬液，加入抗鸡的CD3、CD4和CD8单克隆抗体各一头份，旋涡混匀，于4℃避光染色；取染色后的细胞液，用PBS洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；分析检测结果，获得鸡胸腺T淋巴细胞亚群比例。本发明流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法，针对样本处理、检测及分析过程中目标细胞选取、补偿调节及参数选择的问题，建立了一种稳定规范的鸡胸腺T淋巴细胞亚群的检测方法。
细胞检测鸡胸淋巴细胞方法

[发明专利]一种单细胞藻的培养基与使用单细胞藻处理含铅废水的方法-CN201210028547.3有效
发明人：吴早春;罗丽 -专利权人：广州市环境保护工程设计院有限公司
申请日： 2012-02-09 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12N1/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种单细胞藻的培养基，包括碳源、氮源、磷源、无机盐。一种使用单细胞藻处理含铅废水的方法，包括以下步骤：1）将单细胞藻置于培养基中进行封闭培养；2）培养完成后，浓缩，得到单细胞藻的浓缩液；3）将上述浓缩液与0.2-0.7%的琼脂半固体悬液混匀，再加入含铅废水；4）单细胞藻对废水自动处理后，再于其中接入浮游动物，使其采食单细胞藻；5）浮游动物的收集和水的分离。
一种单细胞培养基使用处理废水方法

[发明专利]单细胞转录组建库和测序的方法-CN202310707555.9在审
发明人：蓝勋;袁昊;江梦南;王崴;杜星翰 -专利权人：人科（北京）生物技术有限公司
申请日： 2023-06-14 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提出了单细胞转录组建库方法，该包括：将单细胞悬液/单细胞核悬液进行固定和/或裂解通透，收集细胞/细胞核沉淀；利用多个带有不同特异性barcode1序列的polyT的引物和逆转录酶进行逆转录；利用多个分别带有不同特异性barcode2序列的Tn5转座酶进行RNA‑cDNA杂交链打断；将打断后RNA‑cDNA杂交链进行逆转录补齐，再对细胞进行完全裂解，并利用多个带有不同特异性barcode3序列的引物PCR扩增，构成测序文库本发明可以快速方便地进行单细胞转录组建库，成本低廉，操作步骤简单，不需要依赖特殊设备，数据质量高，适用于细胞和细胞核，方法灵活性高，适于广泛应用。
单细胞转录组建方法

[发明专利]一种侏儒蛤胚胎单细胞悬液的制备方法-CN202310595917.X在审
发明人：秦贞奎;郭晓琳;张志峰;李茜茜 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2023-05-25 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：本发明属于海洋贝类细胞培养技术领域，具体地说是一种侏儒蛤胚胎单细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：S1、获得侏儒蛤胚胎；S2、CPBS解离侏儒蛤原肠胚和担轮幼虫；S3、胰蛋白酶解离侏儒蛤囊胚、原肠胚、担轮幼虫和D形幼虫；S4、细胞收集；S5、胚胎解离程度及细胞活性检测；本发明通过使用适用于原肠胚和担轮幼虫的无钙镁缓冲液(Cell‑PBS，CPBS)处理法，以及适用于多个胚胎时期的胰蛋白酶处理法，实现了侏儒蛤胚胎在较短时间内的解离，同时兼顾了细胞存活率，使用本方法制备的单细胞悬液成功进行了单细胞转录组测序分析。
一种侏儒胚胎单细胞制备方法

[发明专利]一种乳腺癌干细胞的培养方法-CN201510593579.1在审
发明人：樊菁;张凌;王廷;李南林;吕勇刚 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2015-09-11 - 公布日： 2015-11-25 - 主分类号： C12N5/095 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳腺癌干细胞的培养方法，包括如下步骤：将获得单细胞状态的人乳腺癌细胞，加入含完全培养基中，制成细胞悬液；取对数生长期细胞悬液加入适量鲑鱼凝血酶，混合均匀后，等体积加入鲑鱼胶原蛋白原，得混合液；将混合液接种于超低粘附力的BME的96孔板内，36～38℃下保温，使其凝固成软凝胶；在软凝胶上方加入DMEM/F12培养液、1×B-27、上皮生长因子、成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子-1和氢化可的松中培养7天，得乳腺癌干细胞微球。本发明使干细胞的分离更加稳定，实现有效扩增，直接获得乳腺癌干细胞微球，所得微球细胞为ESA⁺CD44⁺/CD24^-/low表型，明显具有肿瘤干细胞的特性
一种乳腺癌干细胞培养方法

[实用新型]一种单细胞在线延长裂解质谱流式分析装置-CN202320970313.4有效
发明人：白玉;秦少杰;缪代禹;张翼 -专利权人：北京大学
申请日： 2023-04-26 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种单细胞在线延长裂解质谱流式分析装置，包括细胞单分散装置、超声装置、非接触式电喷雾喷针和质谱检测器，其中所述细胞单分散装置为分离毛细管，其前段呈螺旋缠绕状，后段的一部分位于超声装置中，细胞悬液样品通过该装置进行延长裂解流式检测，能够实现较高通量、高代谢物覆盖度的单细胞分析。借助延长的单细胞检测窗口，能够实现高分辨率下代谢物一级质荷比信息的采集以及二级结构的鉴定，包括位置异构体的定性定量分析，在细胞鉴定、细胞分型、差异性物质研究、肿瘤诊断和生物标志物挖掘等领域都具有广阔的应用前景
一种单细胞在线延长裂解质谱流式分析装置

[实用新型]一种制备单细胞悬液的恒温震荡仪-CN201822250734.1有效
发明人：陈岱 -专利权人：上海烈冰生物医药科技有限公司
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2019-09-27 - 主分类号： B01F11/00 文献下载
摘要：本实用新型提供一种制备单细胞悬液的恒温震荡仪，包括底座和平台，平台位于底座上方，平台上设有放置样品容器的卡槽，卡槽上连接有可打开和关闭卡槽的加热盖子，在平台和底座之间通过连接摇杆和从动摇杆连接，连接摇杆的上部和从动摇杆的上部可转动地连接在平台的侧面本实用新型的单细胞悬液制备恒温震荡仪结构紧凑合理，成本低；适用于单细胞悬浮液的制备，细胞活性高；操作温和省力，纯机械操作不会造成悬液污染。
摇杆从动摇杆底座制备单细胞悬液恒温震荡仪地连接可转动横杆本实用新型摇摆电机卡槽单细胞悬浮液横杆连接弧形摆动细胞活性样品容器纯机械可打开摆动盖子省力悬液加热侧面污染

[实用新型]一种单细胞悬浮液制备装置-CN201921962658.5有效
发明人：张惠丹;戴敬;孙培亚;赵洪玉 -专利权人：苏州绘真医学检验有限公司
申请日： 2019-11-14 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种单细胞悬浮液制备装置，包括过滤柱、废液收集管道、废液收集桶、单细胞悬浮液释放管道和负压连接管道，所述过滤柱顶端开口、底端与单细胞悬浮液释放管道连接，所述过滤柱内部装有细胞过滤网，所述过滤柱底部一侧设有废液过滤出口该装置简便易操作、全自动一体化，使单细胞悬液制备过程操作简化、得到的单细胞质量较高且稳定。
一种单细胞悬浮液制备装置

[发明专利]基于视网膜组织/类器官-视网膜组织制备单细胞悬液的方法-CN202010890745.5有效
发明人：彭广华;王少军 -专利权人：郑州大学
申请日： 2020-08-29 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于视网膜组织/类器官‑视网膜组织制备单细胞悬液的方法。本发明选用视网膜组织或类器官‑视网膜组织，并筛选出高效两种消化酶及其使用剂量和浓度、使用比例和酶的作用时间等，确保视网膜单细胞悬液内各类细胞的高活性率（存活率≥90%以上，符合细胞建库要求）、低结团率和低死细胞率；本发明方法操作简便、耗时短，可为视网膜单细胞RNA‑Sequence测序和ATCT‑Sequence测序等提供高效的活细胞；进而对测序获得的高通量数据进行系统的生物信息学分析和挖掘，揭示视网膜发育过程中不同细胞群体的转录因子变化规律，揭示细胞命运转变过程中各类细胞转录组的变化规律。
基于视网膜组织器官制备单细胞方法

[发明专利]一种利用牡蛎体腔液中淋巴细胞检测牡蛎倍性的方法-CN201510194867.X有效
发明人：李军;张扬;张跃环;喻子牛 -专利权人：中国科学院南海海洋研究所
申请日： 2015-04-22 - 公布日： 2018-03-16 - 主分类号： C12Q1/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用牡蛎体腔液中淋巴细胞检测牡蛎倍性的方法。它是以牡蛎样品体腔液中淋巴细胞作为检测材料，检测其DNA含量，然后再判定牡蛎样品的倍性组成。本发明不同于以往牡蛎倍性测定操作，此前的检测，均需采用鳃、外套膜、闭壳肌等组织作为样品，不仅仅需要制备单细胞悬液，而且还要将样本杀死，导致样品本身的后续工作很难开展。本发明结合牡蛎具有开管式循环，体腔液中含有大量淋巴细胞的特性，仅仅采用体腔液中的单细胞淋巴作为检测样品，不仅仅省略单细胞悬液制备步骤，而且检测准确率为100％，并可以保证牡蛎样品本身100％存活，不受到任何伤害
一种利用牡蛎体腔淋巴细胞检测方法

[发明专利]一种脂肪干细胞的纯化方法-CN202010502218.2有效
发明人：张印 -专利权人：铜仁市泛特尔生物技术有限公司
申请日： 2020-06-04 - 公布日： 2021-08-27 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种脂肪干细胞的纯化方法，其包括制备单细胞悬液、处理单细胞悬液、培养原代脂肪干细胞和纯化原代脂肪干细胞等步骤，通过吸附柱网格过滤，使得纯化出的原代脂肪干细胞纯度高，活性高，杂质少；在培养脂肪干细胞过程中加入氨基纤维素和聚己内酯处理可使得杂质不易吸附在脂肪干细胞的表面，提高脂肪干细胞的纯度；增加红外光照射，使得纯化出的脂肪干细胞表型不发生改变，形状比较稳定，质量较佳。
一种脂肪干细胞纯化方法

[发明专利]一种用蛋白类荧光探针对细胞进行标记的方法-CN201110137829.2无效
发明人：相艳;武素芳;司江菊 -专利权人：北京航空航天大学
申请日： 2011-05-25 - 公布日： 2012-11-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种用蛋白类荧光探针对细胞进行标记的方法，其特征在于包括：配制氨基酸-壳聚糖多肽类接枝共聚物悬液；将配制好的接枝共聚物悬液分散于DMEM培养液中；用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰蛋白酶把CHL(中国仓鼠肺成纤维细胞)细胞消化为单细胞悬液；孵育所述CHL细胞；弃掉原液；加入分散有接枝共聚物悬液的所述DMEM培养液；继续培养预定的时间。
一种蛋白荧光探针细胞进行标记方法

[发明专利]一种超敏且易用的多重单细胞蛋白质组学分析方法和应用-CN202111247321.8在审
发明人：王慧;李辰;顾蕾;王芹芹;刘宁宁;赵犇鹏 -专利权人：上海交通大学医学院
申请日： 2021-10-26 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种超敏且易用的多重单细胞蛋白质组学分析方法和应用，包括制备单细胞悬液，通过温和、高精度的全自动单细胞分离系统分选单细胞至微孔板，用裂解液和冻融裂解单细胞，对释放的蛋白质进行酶解、稳定同位素亲和标记本发明对单个人源常规细胞的单细胞蛋白质组鉴定及定量深度可达到2000种以上，同时无需昂贵的超声设备、特殊定制的微流控芯片、复杂的液相系统改造等，并兼容多种市售主流液质联用质谱仪，用于单细胞或少量细胞的代谢组
一种多重单细胞蛋白质分析方法应用

[发明专利]一种从骨髓、外周血以及淋巴瘤组织中提取高质量B细胞的方法-CN202110411405.4在审
发明人：王政;张学斌;冯珂珂;姜炜 -专利权人：天津市环湖医院
申请日： 2021-04-16 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明公开了一种从骨髓、外周血以及淋巴瘤组织中提取高质量B细胞的方法，步骤如下：分别取淋巴瘤患者外周血和骨髓，加入羟乙基淀粉，静置留取上清；取与上清等体积的淋巴细胞分离液，将上清加入到淋巴细胞分离液，离心；取离心后的白膜层，洗涤并重悬；取淋巴瘤患者肿瘤组织进行裂解，剪碎组织并孵育；上清转移至含有10％血清的PBS中并反复冲刷组织；再将获得的上清过细胞筛并离心，收集细胞沉淀，洗涤、重悬。本申请通过改变分离纯化骨髓和外周血的实验方法，更高效的提取骨髓和外周血来源的B细胞，减少杂质细胞；通过改变淋巴瘤组织的裂解方法，更温和而有效的提取更多的淋巴瘤细胞，为后续细胞培养和单细胞测序提供必备的细胞基础
一种骨髓外周血以及淋巴瘤组织提取质量细胞方法

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