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[发明专利]一种新型高效小鼠胰腺单细胞悬液的制备方法-CN200910073257.9无效
发明人：滕春波;李丹 -专利权人：东北林业大学;滕春波;李丹
申请日： 2009-11-25 - 公布日： 2010-05-12 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型、高效的分离制备小鼠胰腺单细胞悬液的方法，包括小鼠胰腺取材、胰酶冷消化、胰腺单细胞分离与纯化等步骤。本发明的技术关键是利用胰酶在低温低活力状况下浸入胰腺组织，然后再通过短时温消化解离胰腺组织，从而获得高数量、高纯度、高活力、无粘连的胰腺单细胞悬液。与常规胰腺细胞分离方法相比，该发明具有操作稳定、细胞得率高、细胞活性高等特点，避免了常规胰腺分离方法中胰酶长时间温孵育对胰腺细胞造成伤害、细胞大量死亡释放出DNA缠绕造成细胞粘连等缺点，解决了胰腺单细胞分离和分析困难问题，为进一步利用胰腺细胞奠定基础。
一种新型高效小鼠胰腺单细胞制备方法

[发明专利]小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型的建立方法-CN202111657173.7有效
发明人：金华;刘启发;张海燕;戚寒洲;刘家沛 -专利权人：南方医科大学南方医院
申请日： 2021-12-30 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明的建立方法，包括以下步骤：以C57BL/6小鼠作为供鼠，取供鼠的骨髓，用缓冲液冲洗骨髓腔，收集和过滤洗涤液，制成单细胞悬液，去除CD4+T细胞和CD8+T细胞，得到去除T细胞的骨髓细胞悬液；取供鼠的脾脏，研磨后用缓冲液清洗，收集和过滤洗涤液，制成单细胞悬液，得到脾脏细胞悬液；以BALB/c小鼠作为受鼠，对受鼠进行全身电离辐射，将去除T细胞的骨髓细胞悬液和脾脏细胞悬液输入受鼠体内，饲喂一段时间后，得到小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型。
小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型建立方法

[发明专利]子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法-CN202111672015.9有效
发明人：陆敏;卿泉;沈佳 -专利权人：浙江金时代生物技术有限公司
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-12-02 - 主分类号： A61L27/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法及应用，其中先进行人脐带间充质干细胞的获取，其中对从冷藏罐中取出人脐带间充质干细胞进行解冻，并接种于培养瓶中，然后制备单细胞悬液，其中将培养瓶中培育的人脐带间充质干细胞进行传代，然后将UC‑MSCs胰酶消化后制备单细胞悬液，接着进行复合培养，即取单细胞悬液均匀滴加到胶原支架上，从而制得子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞，最后进行后续培养。本发明用人脐带间充质干细胞于胶原支架进行混合培养，通过较为简单的技术将已通过SFDA批准的胶原支架用于子宫内膜修复技术，安全性好，有利于干细胞治疗严重子宫内膜损伤的科学研究。
子宫内膜修复胶原支架复合脐带干细胞制备方法

[发明专利]一种用于同时对外周血胃癌循环肿瘤细胞活性和免疫状态进行检测的方法-CN202310050924.1在审
发明人：沈琳;李一林;李艳艳;冯旭娇 -专利权人：北京市肿瘤防治研究所
申请日： 2023-02-02 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明提供一种用于同时对外周血胃癌循环肿瘤细胞活性和免疫状态进行检测的方法，其特征在于：在外周血胃癌循环肿瘤单细胞悬液中加入坏死细胞荧光染料NCS；NCS染料进行染色后，用清洗液洗涤，加入抗原修复缓冲液进行抗原修复，再加入配置好的血细胞分析用染色液进行免疫荧光染料染色，其中包含PD‑L1抗体和CD45抗体。
一种用于同时对外胃癌循环肿瘤细胞活性免疫状态进行检测方法

[发明专利]一种动物细胞核悬液的制备方法及其应用-CN202011637365.7有效
发明人：周煌凯;高川;陈飞钦;夏昊强;徐毓璇;梁国霞 -专利权人：广州基迪奥生物科技有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种动物细胞核悬液的制备方法及其应用。本发明提供的制备方法包括组织处理破碎、重悬、离心、沉淀、重悬、细胞筛过滤、重悬离心，最后检测核浓度。本发明提供的动物细胞核悬液满足各类高通量单细胞测序平台的细胞悬液质量要求，有利于其进一步的推广应用。
一种动物细胞核制备方法及其应用

[发明专利]一种显著提升斑块消化制备高质量单细胞悬液的方法-CN202010032187.9在审
发明人：朱尚明;吉训明;张永彪;石小峰;成军;裴葆青;谷涌泉;刘会生 -专利权人：北京航空航天大学
申请日： 2020-01-13 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种显著提升单细胞悬液质量的动脉斑块消化的方法，包括胶原蛋白水解酶Ⅰ、胶原蛋白水解酶Ⅱ、胶原蛋白水解酶Ⅳ、胶原蛋白水解酶Ⅺ、氯化钙、脱氧核糖核酸酶I、磷酸缓冲盐溶液、牛血清白蛋白溶液、RPMI1640细胞培养液。本发明主要针对斑块组织进行消化处理而发明，通过几种酶的组合，可将斑块组织消化成为活性比例较高单细胞悬液，在单细胞基础上研究斑块组织的生物学反应，从而避免出现存在许多钙化细胞碎片、组织杂质等影响单细胞测序上机或后续数据分析结果的情况
一种显著提升消化制备质量单细胞方法

[发明专利]一种高效的人阴道壁组织单细胞悬液制备方法-CN202110142541.8有效
发明人：苗娅莉;文继锐;成娟;王领;吴江;杨炎霖;赵志伟 -专利权人：四川大学
申请日： 2021-02-02 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效的人阴道壁组织单细胞悬液制备方法，属于生物技术领域，其步骤包括：组织块清洗、碎解、离心、酶解消化，在消化过程中振荡，过滤、重悬等步骤；采用本发明的方法，可以在较短时间内，得到细胞数量5×105以上、细胞活性达到90％以上，杂质较少的阴道壁组织单细胞悬液；在制备效率方面，整个制备时间可以缩短1‑2h，时间缩短30％以上，是一种高效的制备方法。
一种高效阴道组织单细胞制备方法

[发明专利]一种治疗头颈部肿瘤单克隆抗体的制备方法-CN201310653214.4在审
发明人：李凤娟;赵宝娟;王翔 -专利权人：天津工业大学
申请日： 2013-12-04 - 公布日： 2014-03-12 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：发明涉及的是一种制备治疗头颈部肿瘤单克隆抗体的方法，其特征在于，通过同位素标记，多维液相色谱-质谱联用的方法分析口腔癌前病变细胞样本与口腔粘膜细胞样本找出在癌变细胞中特异表达的头颈部肿瘤标记蛋白，并对这些蛋白进行分离纯化；用分离纯化出来的头颈部肿瘤标记蛋白对6-8周龄的雌性BALB／c小鼠进行免疫，如果抗体滴度在1：10000以上时，可将免疫小鼠脾细胞的单细胞悬液与对数生长期的骨髓瘤细胞融合并筛选，得到分泌头颈部肿瘤标记蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞；向6-8周龄的BALB／c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，注射细胞后10天左右收集腹水，protein G／A柱子纯化腹水，获得治疗头颈部肿瘤的单克隆抗体。
一种治疗颈部肿瘤单克隆抗体制备方法

[发明专利]一种高效人肾脏单细胞悬液制备方法-CN202110533402.8有效
发明人：李亚峰;秦智琦;史淑红;问晓东;李荣山 -专利权人：山西省人民医院;李亚峰
申请日： 2021-05-17 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种高效的人肾脏单细胞悬液制备方法。所述方法在EP管中剪碎肾脏组织样本后，经特定浓度FCMase消化孵育，间歇性混匀后用DMEM培养基重悬纯化，获得的肾脏单细胞形态完整、分散度好、数量多、活率高。
一种高效肾脏单细胞制备方法

[发明专利]一种单细胞BCR免疫组库全长建库测序方法-CN202210080103.8在审
发明人：陈东生;程艳兵;毛勇 -专利权人：武汉菲沙基因信息有限公司
申请日： 2022-01-24 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种单细胞BCR免疫组库全长建库测序方法，涉及单细胞BCR免疫组库领域，其技术方案包括以下步骤：步骤一：引物合成：通过引物公司对需要的引物序列进行合成，其中，3’特异性引物在使用时混合到一起使用，为混合引物，扩增时用混合引物进行扩增；步骤二：单细胞悬液的制备：抽取新鲜的外周血5mL至EDTA抗凝管中，将淋巴细胞分离液和血样在20℃水浴箱中复温20min；步骤三：单细胞油包水的制备与cDNA的合成扩增：将36.3μL主混合添加到冰上的PCR管中；直接以单细胞悬液为起始，为每一个细胞添加单细胞标签后再进行后续的cDNA扩增，可以该标签在后续的建库测序中会一直保留，从而实现将测序数据拆分至单个细胞的效果
一种单细胞 bcr 免疫全长建库测序方法

[发明专利]一种小鼠主动脉细胞单细胞悬液制备的方法-CN201910618214.8在审
发明人：赵艳芳 -专利权人：安徽师范大学
申请日： 2019-07-10 - 公布日： 2021-01-12 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种小鼠主动脉细胞单细胞悬液制备的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：首先，准备好1ml的酶混合液、存活的健康野生小鼠、整个桌面为平整冰面的操作台及若干仪器；然后，用200~500ul的水合氯醛将准备好的所述野生小鼠腹腔注射麻醉致死应用剪碎和混合酶联合消化法制备小鼠血管组织单细胞悬液简便可行，且免疫细胞较多，为血管免疫细胞的研究提供了有效的组织单细胞悬液制备方法。
一种小鼠主动脉细胞单细胞制备方法

[发明专利]一种肿瘤抗原特异性TCR序列的筛选方法-CN202210922411.0在审
发明人：罗微;毛晓帆;官展文;余思菲 -专利权人：佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）
申请日： 2022-08-02 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供了一种肿瘤抗原特异性TCR序列的筛选方法。所述筛选方法包括步骤：获取同源的肿瘤组织和转移淋巴结组织；制备单细胞悬液，进行转录组建库、VDJ建库及测序，从测序结果中选取第一备选TCR序列集合和第二备选TCR序列集合；同时满足第一备选TCR序列集合和第二备选TCR序列集合的即为所述肿瘤抗原特异性TCR序列。所述方法针对每例患者，在其肿瘤抗原未知的情况下，筛选出其肿瘤抗原特异性TCR序列，通过人工合成该肿瘤抗原特异性TCR的片段并插入患者外周血杀伤性T细胞中，使得外周血T细胞具有杀伤肿瘤的能力，经过体外扩增后回输给患者以杀伤肿瘤
一种肿瘤抗原特异性 tcr 序列筛选方法

[发明专利]人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法-CN200410019057.2无效
发明人：叶丽虹;张晓东;秦宵然;朱惠芳;王洪辉 -专利权人：南开大学
申请日： 2004-04-20 - 公布日： 2005-01-12 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法，所述人肝癌转移亚克隆细胞系是用下述方法建立的：将人肝癌细胞H7402单细胞悬液接种于SCID鼠；确认转移部位为肺脏；原代培养；传代培养，当细胞传代到第三代以后，将培养液中的胎牛血清浓度降为10％，细胞生长良好，形态逐渐均一，即建立了一种来源于亲本人肝癌细胞H7402的肝癌转移亚克隆细胞系，并与亲本细胞形成配对关系，为肝癌细胞转移的研究提供新的实验材料；可用于筛选肝癌转移相关基因；可用于筛选肝癌转移相关蛋白；可用于筛选抗肿瘤转移药物；可用于肿瘤转移分子机理的研究；可用于进行肿瘤转移DNA疫苗的研究。
肝癌转移克隆细胞系及其建立方法

[发明专利]一种对肿瘤组织中单个肿瘤细胞高纯度富集的方法-CN202211360607.1在审
发明人：邓亚光;孙长胜;李宴清;覃程陈;何美美 -专利权人：三峡医学检验实验室（湖北）有限公司
申请日： 2022-10-31 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种对肿瘤组织中单个肿瘤细胞高纯度富集的方法，步骤是：A、组织破碎：将细丝状置于六孔板左侧收集槽，用医用剪刀将组织细细剪碎，滴加细胞消化液覆盖组织细胞，常温静置，加入细胞重悬液；B、细胞过筛：取细胞筛放到六孔板右侧收集槽，将左侧收集槽中的样本溶液转入收集槽中过筛；C、样本与磁珠孵育：向组织样本中加入EPCAM磁珠，混匀后于摇床上转动，室温孵育；D、靶细胞分离：将六孔板放入循环肿瘤细胞分离仪中，操作捕获流程收集、洗涤、释放，进行靶细胞富集；E、显微镜观察：将分离后的六孔细胞培养板放置于倒置荧光显微镜下。分选精度高，保证了细胞高活性和高纯度，方法简单，成本低廉，为肿瘤单细胞下游分析提供高质量材料。
一种肿瘤组织单个细胞纯度富集方法

[实用新型]一种单细胞悬液吹打枪头-CN202320349545.8有效
发明人：林爱珍;孙冬梅 -专利权人：湖北省中医院
申请日： 2023-03-01 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： B01L3/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种单细胞悬液吹打枪头，包括枪管和锥形吸头，所述枪管的内壁上设有壁槽，所述壁槽内设有囊包，所述囊包有若干个，以所述枪管的轴线为中心呈环形分布，每个所述囊包内均填充有非牛顿流体。本实用新型可以在对单细胞悬液进行吹打过程中有效减缓细胞与枪头内壁之间的冲击，避免细胞损伤或破裂，提高细胞存活率。
一种单细胞悬液吹打枪

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