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[发明专利]一种用于卵巢组织解离的混合酶液及其试剂盒-CN202311017928.6在审
发明人：徐宁;邢小彤;吴建民;刘安民;吴浩 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2023-08-14 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种用于卵巢组织解离的混合酶液及其试剂盒，主要是通过Ⅰ型胶原酶、中性蛋白酶、DNaseⅠ的混合酶消化液消化处理后，结合过滤、离心清洗以及红细胞裂解等操作获得纯化后的单细胞悬液。所述混合酶消化液为含有Ⅰ型胶原酶、中性蛋白酶、DNaseⅠ。操作简便，无需特殊仪器设备即可实现于短时间内获得高活性的卵巢单细胞悬液。经细胞活性检测发现，经最适酶浓度所分离得到的卵巢单细胞产量高达2.1×106/mL，活率高达82.3％。
一种用于卵巢组织解离混合及其试剂盒

[发明专利]一种适用于小鼠肝脏单细胞测序的低温解离方法-CN202211209695.5在审
发明人：蒋建国;陈志锋;梁洪 -专利权人：杭州联川生物技术股份有限公司
申请日： 2022-09-30 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于小鼠肝脏单细胞测序的低温解离方法，包括收获新鲜的肝脏组织进行处理；后放入到加有地衣芽孢杆菌蛋白酶混合物的培养皿中解离；并在2‑6℃环境下孵育，得到组织匀浆；将组织匀浆过细胞筛，用DMEM或1640培养基冲洗过滤器并停止酶活性，得到细胞悬液；将细胞悬液进行离心，去上清液；并用含胎牛血清的DMEM或1640培养基重悬细胞，然后过细胞筛；收集细胞沉淀，使用DPBS重悬细胞，即可得到解离后的肝脏单细胞本发明提供的一种适用于小鼠肝脏单细胞测序的低温解离方法，解决了传统的“热解离”实验方法造成的肝实质细胞死亡，留存的细胞中有大量的应激基因表达等问题。该方法具有较好的技术表现，方便有效，适于推广应用。
一种适用于小鼠肝脏单细胞低温解离方法

[发明专利]一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法-CN202211600437.X在审
发明人：秦建华;刘海涛;甘忠桥 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2022-12-12 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明提供一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法，包括微流控芯片制备、双水相溶液准备、单细胞悬液准备、微流体操控、单细胞负载微凝胶产生和类器官构建等。本发明以集成常闭气动泵阀的微流控芯片为技术平台，以预先经交联剂孵育的单细胞悬液为化学反应核心，以水包水液滴为成型模板，通过一步法将单分散种子细胞负载于微型水凝胶载体中，并在后续转移步骤中简单地去除不含细胞的空载液滴，实现高效的单细胞原位负载。微凝胶中单细胞可经过正常培养、扩增和自组织形成所需类器官。本发明提高了类器官起点一致性，具备液滴微流控技术高通量特点，实现了高效、高重现性的类器官体外构建，可在类器官相关的基础研究和转化应用等领域发挥巨大作用。
一种基于单细胞芯片器官制备方法

[发明专利]一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法-CN201510098217.5有效
发明人：李秋艳;张佳;李志远;付怡静 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2015-03-05 - 公布日： 2018-05-22 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法。该单细胞培养方法，包括：步骤A：获得成纤维细胞悬液和饲养层细胞；步骤B：将饲养层细胞以微滴形式接种至培养皿，培养至饲养层细胞密度在微滴内100％汇合，获得饲养层细胞微滴；步骤C：将成纤维细胞悬液接种至具有饲养层细胞微滴的培养皿，经细胞培养，获得单细胞克隆。本发明提供的单细胞培养方法获得的克隆细胞基因组完全一致，有利于提高转基因猪的特异性，有利于转基因猪克隆效率的评价，以及特定均一转基因猪品系的建立。
种猪胎儿纤维细胞单细胞培养方法

[发明专利]上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法-CN202110995781.2在审
发明人：余磊;陈洁琳;吴万军;余建辉 -专利权人：深圳明澳生物科技有限公司
申请日： 2021-08-27 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：该上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法通过将上尿路尿路上皮癌组织小块置于含有Ⅱ型胶原酶的抑制剂中进行第一消化处理，得到第一消化物；将第一消化物置于含有抑制剂的胰酶替代物中进行第二消化处理，得到第二消化物；对第二消化物依次进行第一中和处理、过滤处理和离心处理，得到单细胞沉淀；将单细胞沉淀置于预设培养基和基底胶的混合基底中进行重悬处理，得到含有所有细胞的凝胶悬液；将凝胶悬液按照预设方案进行培养，得到上尿路尿路上皮癌类器官。通过本方案可以为化疗药物的使用及上尿路尿路上皮肿瘤的个性化治疗提供可靠的临床数据。
上尿路尿路上皮癌类器官培养方法

[发明专利]一种成品组织工程化骨的制备方法-CN201510290531.3无效
发明人：李德强;李明;刘培来;张元凯;李建民 -专利权人：山东大学齐鲁医院
申请日： 2015-05-29 - 公布日： 2015-09-02 - 主分类号： A61L27/38 文献下载
摘要：本发明涉及一种成品组织工程化骨的制备方法，包括以下步骤：获取骨髓的单个核细胞，扩增培养，得到单细胞悬液，所述细胞悬液的浓度为2.0×10⁶～2.0×10⁷/ml；然后将多孔支架浸润到所述单细胞悬液中，使单细胞悬液充分进入到多孔支架的内部，培养，得到细胞/支架复合体：然后将细胞/支架复合体接种到灌注式生物反应器中，加入培养基静置2～4小时后，对所述细胞/支架复合体进行连续灌注培养
一种成品组织工程制备方法

[发明专利]一种高通量单细胞转录组测序方法及其应用-CN202210550351.4在审
发明人：郭国骥;王永成;陈海德 -专利权人：良渚实验室;浙江大学;杭州跃真生物科技有限公司
申请日： 2022-05-20 - 公布日： 2022-07-22 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供了一种高通量的单细胞转录组测序方法及其应用，所述方法包括将待测的细胞样本制备成单细胞悬液后用固定液固定；和使用反转录引物在固定后的单细胞的RNA上进行原位反转录反应合成cDNA第一条链；其中所述反转录引物中包括标签序列
一种通量单细胞转录组测序方法及其应用

[发明专利]一种健康人免疫功能评估分析方法-CN202011197023.8在审
发明人：贾正虎;尹芝南 -专利权人：暨南大学
申请日： 2020-10-30 - 公布日： 2021-01-26 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种健康人免疫功能评估分析方法，属于生物医学和免疫检验技术领域，包括如下步骤：步骤一，取健康人群的血液样本进行预处理，待测细胞染色并制成单细胞悬液，将单细胞悬液与抗体混合，得到单细胞‑抗体混合液，采用流式细胞术检测单细胞‑抗体混合液中的免疫细胞水平，得出流式图；步骤二，将步骤一的流式图进行若干层圈门统计分析，得出所需细胞比例；步骤三，将步骤二中的细胞比例按照不同年龄、不同性别进行对比分析。用本发明去检测健康人免疫功能，可全面的评估血液里面的各免疫细胞的数量及比例、活性和衰竭程度，有助于了解并界定未患病人群的免疫功能，为人群健康监测提供指导和依据。
一种健康免疫功能评估分析方法

[发明专利]一种制备胰腺炎组织单细胞悬液的试剂盒和方法-CN202110040344.5有效
发明人：陆然;莫显明;黄巧容;李雪;范川文;赵今 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2021-01-12 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备胰腺炎组织单细胞悬液的试剂盒和方法，属于细胞分离制备领域。本发明的方法包括如下步骤：a)胰腺炎机械分离；b)使用含胶原酶、DNase I和Dispase的消化液消化；c)红细胞裂解；优选地，还包括d)Accutase消化液消化。本发明的方法可分离得到急性胰腺炎组织的单细胞，其单细胞率高，细胞活力大于80％，十分适用于单细胞测序文库构建。
一种制备胰腺炎组织单细胞试剂盒方法

[发明专利]一种单细胞标签化方法-CN202010277639.X在审
发明人：温绍昂;刘荣兰 -专利权人：上海高探生物科技有限公司
申请日： 2020-04-08 - 公布日： 2021-10-12 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种单细胞标签化方法，包括以下步骤：S1：细胞悬液进入数字微流控芯片，使每个电极上形成一个可能包裹有细胞的细胞液滴；S2：微球悬液进入数字微流控芯片，使每个电极上形成一个可能包裹有微球的微球液滴；S3：获取细胞液滴内的细胞参数和微球液滴内微球参数；S4：识别判断细胞液滴和微球液滴是否符合预先设定参数，并记录位置信息；S5：移动符合预先设定参数的单个细胞液滴和单个微球液滴混合进行标签化，同时移除不符合预先设定参数的细胞液滴和微球液滴本发明利用数字微流控芯片结合高清图像识别技术实现单细胞标签化的全自动化操作，可精准控制单细胞和微球，将大大提高单细胞标签化的工作效率。
一种单细胞标签方法

[发明专利]一种单细胞转录组测序方法及其应用-CN202210174619.9在审
发明人：王永成;徐子叶;王钰婷 -专利权人：浙江大学
申请日： 2022-02-24 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了单细胞转录组测序方法及其应用，所述方法包括：将待测细胞样本制备成单细胞悬液后用固定液固定；和使用反转录引物在固定后的单个细胞的RNA上进行原位反转录反应合成cDNA第一条链。
一种单细胞转录组测序方法及其应用

[发明专利]一种水牛睾丸单细胞悬浮液的制备方法-CN201811197260.7在审
发明人：卢克焕;李婷婷;陆阳清;杨小淦;梁兴伟 -专利权人：卢克焕;广西大学
申请日： 2018-10-15 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12N5/076 文献下载
摘要：本发明公开了一种水牛睾丸单细胞悬浮液的制备方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：取水牛睾丸消毒后剪去白膜，清洗干净剪成小块；(2)消化：将剪碎后的睾丸转移至培养皿中，加入一级消化液消化至呈单个精细小管后，离心弃去上清液；(3)一级重悬：用PBS重悬沉淀，离心去除上清液，重复两次后得到底层的重悬液；(4)细胞分离：进行二级消化后，放置于显微镜观察用移液器吹成单个细胞,中和后收集至离心管离心，去除上清液得到初级细胞悬浮液；(5)二级重悬：使用培养液进行重悬，使用细胞网过滤后获得水牛睾丸单细胞悬液。本发明提供了一种分离速度快，效果好的水牛精原干细胞悬浮液的制备方法，且该方法操作简便可行，易于实现。
睾丸水牛重悬上清液制备单细胞悬浮液悬浮液消化培养皿培养液单细胞悬液精原干细胞显微镜观察原料预处理初级细胞单个细胞离心去除细胞分离离心管消化液移液器重悬液剪去剪碎取水去除小管小块沉淀过滤清洗精细消毒中和细胞重复

[发明专利]一种贝类精巢生精细胞解离和分离的方法-CN202010492773.1有效
发明人：秦贞奎;王庆;张志峰;刘丹雯 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2020-06-03 - 公布日： 2022-01-25 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：本发明提供了及一种贝类精巢生精细胞解离和分离的方法，属于海洋贝类细胞的分离技术领域。将增殖期贝类精巢破碎，依次用质量浓度0.1％胶原酶Ⅳ溶液消化和质量百分浓度0.25％胰蛋白酶溶液消化，解离精巢获得单细胞悬液；配制体积浓度10％、22％和35％的Percoll溶液，按浓度由大到小的顺序装入同一离心管中，向离心管的顶层加入贝类生精细胞单细胞悬液，离心，分别收集3层细胞。采用两步酶解法可将精巢组织中的生精细胞成功解离为单细胞悬液，细胞存活率可高到96.62％，并可在体外进行正常培养。同时分离出较高纯度的精原细胞和精母细胞，为研究贝类配子发生和繁育机制提供重要的材料，具有较高的指导意义和应用价值。
一种贝类精巢精细解离分离方法

[发明专利]一种人体血管周围脂肪组织单细胞悬液制备方法-CN202011119720.1在审
发明人：刘暴;陈俊冶;李康;王超楠;来志超;邵江 -专利权人：中国医学科学院北京协和医院
申请日： 2020-10-19 - 公布日： 2021-01-15 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种人体血管周围脂肪组织单细胞悬液制备方法，包括：脂肪组织预处理：将采集的脂肪组织清洗至无血液残留，再将脂肪组织切成1‑5mm的脂肪微粒；预消化：脂肪微粒中滴加胶原酶至覆盖住脂肪组织，再剪碎脂肪组织，直至变为酱状；消化：将预消化后的脂肪组织再加入胶原酶，37℃水浴消化20分钟，期间反复改变摇动方向，离心摇动；过滤：将上步获得的消化液过40μm孔径的细胞滤筛，加入相同体积的DPBS后置于冰上；取筛网上未通过的组织块，重复消化和过滤步骤；将最终获取的消化液离心，离心后分层，吸取上清，将底部细胞重悬，再离心，获得人体血管周围脂肪组织单细胞悬液。该方法得到的人体血管周围脂肪组织单细胞悬液的数量多、细胞活率高。
一种人体血管周围脂肪组织单细胞制备方法

[发明专利]一种含组织位置信息的单细胞文库构建方法及测序方法-CN202310135198.3有效
发明人：韩金桓;关荧;职小玲;智敏;桑国芹;石焕焕;焦少灼;李宗文 -专利权人：北京寻因生物科技有限公司
申请日： 2023-02-20 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种含组织位置信息的单细胞文库构建方法及测序方法，包括以下步骤：S10、提供芯片，所述芯片具有多个位点，每一位点上具有已知碱基序列的核酸分子，所述核酸分子含有位置信息；S20、将待测组织的切片与所述芯片接触，以使所述芯片中的具有已知碱基序列的核酸分子与所述待测的组织切片的细胞结合，得到结合组织切片；S30、将结合组织切片解离制备成单细胞悬液；S40、通过高通量单细胞建库测序平台对单细胞悬液构建文库，得转录组文库与空间标签文库；S50、对转录组文库与空间标签文库进行测序，得到含组织位置信息的单细胞文库。本发明可以在单细胞水平上分析遗传信息的同时还可以测到该单细胞的空间位置信息。
一种组织位置信息单细胞文库构建方法