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[发明专利]噬菌体展示介导的免疫多重定量PCR方法及其重组噬菌体-CN202210918587.9在审
发明人：王建勋;陈汉祎;李申;王伽利;和似琦;雒晨祎;王栋;钱朝晖;胡克平;胡丹丹;祈方昉 -专利权人：北京中医药大学
申请日： 2022-08-01 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明提供噬菌体展示介导的免疫多重定量PCR方法，所述方法包括以下步骤：将捕获抗体包被于孔板的孔底，将包被抗体的孔板加入封闭液封闭，加入重组噬菌体，使得重组噬菌体与所述捕获抗体充分结合，在所述重组噬菌体与所述捕获抗体充分结合后，裂解结合后的所述重组噬菌体，收集洗脱液，作为多重定量PCR反应模板，和进行实时荧光多重定量PCR反应。本发明方法将抗原抗体反应可以转化为DNA检测，并显着提高检测的通量。
噬菌体展示免疫多重定量 pcr 方法及其重组

[发明专利]一种扩增内标及细菌多重PCR的检测方法-CN201510795829.X有效
发明人：高迎春;杨林;魏秀丽;薄永恒 -专利权人：山东省畜产品质量检测中心
申请日： 2015-11-18 - 公布日： 2019-03-19 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明涉及一种扩增内标及细菌多重PCR的检测方法。所述的扩增内标的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该检测方法包括如下步骤：(1)提取待检测样品的基因组DNA，制得DNA溶液；(2)以基因组DNA为模板，PCR扩增体系中加入所述的扩增内标，进行PCR扩增，制得PCR产物；(3)根据经琼脂糖凝胶电泳后的PCR产物，判断是否有假阳性的结果存在。本发明所述扩增内标为多重PCR检测多个目标菌共用，并非现有技术中不同目标菌采用不同扩增内标融合获得，因其总体长度短，合成难度大大降低，且检测效果稳定性和准确度高。
一种扩增细菌多重 pcr 检测方法

[发明专利]水体中三种病原菌多重降落PCR检测试剂盒及检测方法-CN201810578490.1在审
发明人：李冠霖;侯艳娇;邵世和;邵岩 -专利权人：镇江德威乐普能源环保科技有限公司
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种可同时快速检测水样中志贺氏菌（shigella spp）、小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）与副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus）的多重降落PCR检测试剂盒及检测方法。本发明设计了志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌与副溶血性弧菌的特异性引物，并建立了可同时检测这些细菌的多重降落PCR检测试剂盒及检测方法，采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。本发明建立的多重降落PCR检测试剂盒及检测方法快速、简便、特异、灵敏，可用于志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌与副溶血性弧菌感染的快速诊断与流行病学调查。
多重降落PCR 检测试剂副溶血性弧菌小肠结肠炎志贺氏菌检测水样病原菌快速诊断琼脂糖凝胶电泳检测分子诊断技术流行病学调查感染性疾病特异性引物快速检测可用灵敏水体细菌感染

[发明专利]基于多重扩增子测序技术检测精神类药物相关基因的方法-CN202111328453.3在审
发明人：沈杲;许小锋 -专利权人：合肥诺为尔基因科技服务有限公司
申请日： 2021-11-10 - 公布日： 2022-01-28 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了基于多重扩增子测序技术检测精神类药物相关基因的方法，提取待测物种样本的基因组DNA；对基因组DNA进行多重PCR扩增，加入特异性靶向目标区域引物，以基因组DNA为模板，进行第一轮多重PCR反应，得到两端带有通用引物序列的PCR产物；以纯化后的第一轮PCR产物为模板，加入测序标签序列引物，测序标签序列引物的两端分别连接与第一轮PCR通用引物序列相匹配的引物序列，进行第二轮PCR反应；得到被检测到的基因序列
基于多重扩增子测序技术检测精神类药物相关基因方法

[发明专利]一种基于选择性探针的多重PCR方法及其应用-CN200710107080.0无效
发明人：黄庆;府伟灵;王珏;黄君富 -专利权人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
申请日： 2007-05-18 - 公布日： 2007-11-07 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及核酸扩增，具体涉及一种可同时扩增多个核酸片段的基于选择性探针的多重PCR方法及其应用。本发明所述的多重PCR方法包括以下步骤：(1)构建选择性探针；(2)延伸－连接反应；(3)PCR扩增；(4)检测PCR扩增产物。其关键特征是反应体系中使用了选择性探针，并且，PCR扩增产物可存在长度的差异。该方法不但使分析通量大大提高，还可节省待检样本的核酸模板用量。与传统的使用多对引物的多重PCR技术相比，本发明的方法仅使用一对通用引物，但在理论上可至少同时扩增上千个靶核酸序列，具有操作简便、通量大、检测系统兼容性高等显著优点。
一种基于选择性探针多重 pcr 方法及其应用

[发明专利]一种检测尿道病原体感染的多重荧光定量探针法PCR试剂盒-CN202210107234.0有效
发明人：朱苗骏;符屺凡;谭若颖;王海龙;薛竞东;俞仲伟 -专利权人：上海翔琼生物技术有限公司
申请日： 2022-01-28 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种泌尿生殖道感染病原体多重检测试剂盒及其用途。具体地，本发明开发了一种用于检测12种临床常见尿道感染病菌的荧光定量PCR试剂盒。本发明提供的优化的引物和探针具有更优秀的的12组PCR引物和探针的组合具有优异的稳定性，并且在PCR反应过程中不会互相发生干扰，因此能够用于多重荧光定量PCR方法。
一种检测尿道病原体感染多重荧光定量探针 pcr 试剂盒

[发明专利]一种多重PCR扩增方法及试剂盒-CN201110298119.8有效
发明人：孙万平;王伟大;姚利;陈燕;李凯;陈子兴 -专利权人：苏州大学
申请日： 2011-09-29 - 公布日： 2012-02-15 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种多重PCR扩增方法以及用于多重PCR扩增的试剂盒；所述多重PCR扩增方法包括了设计公共引物以及带有公共引物的多重引物的步骤，所述公共引物设计应遵循两条原则：（1）任何优化的扩增条件下，公共引物与待测模板进行扩增时无特异性产物；（2）当带有公共引物的多重引物扩增得到特异性产物时，公共引物对具有扩增所述特异性产物的能力；然后配置多重PCR体系进行扩增。本发明由于公共引物的引入，使反应体系内的序列特异性引物对浓度下降4个以上对数级别，如此低浓度的多重引物在同一个反应体系中出现相互作用的几率将大大降低，不仅可解决不同引物对相互干扰这一多重PCR中的技术瓶颈，亦为加入新的引物对、增加检测基因数量创造前提条件。
一种多重 pcr 扩增方法试剂盒

[发明专利]用于同时检测四种致病弧菌的多重PCR引物组及检测方法和试剂盒-CN201810483056.5在审
发明人：陈鲤群;黄蓝青;林峻;蔡伟文;赵依依 -专利权人：福州大学
申请日： 2018-05-18 - 公布日： 2018-08-10 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于同时检测四种致病弧菌的多重PCR引物组及检测方法和试剂盒，其检测引物组包含检测副溶血性弧菌、创伤弧菌、哈氏弧菌和拟态弧菌的引物对。本发明还建立了一种用于同时检测四种致病弧菌的多重PCR检测方法及试剂盒，利用设计得到的所述引物组，对待测样品中提取的细菌的基因组DNA，在同一反应体系中进行多重PCR反应，通过对反应产物的电泳分析来判定样品中是否含有上述致病弧菌
致病弧菌检测试剂盒多重PCR引物副溶血性弧菌多重PCR反应多重PCR检测基因组DNA 创伤弧菌电泳分析哈氏弧菌检测引物拟态弧菌灵敏度引物组引物判定细菌

[发明专利]预扩增多靶核酸结合荧光定量PCR检测的方法-CN202110734352.X在审
发明人：张奉武;谭若颖;朱苗骏;从青;王欣昶 -专利权人：上海翔琼生物技术有限公司
申请日： 2021-06-30 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明涉及一种预扩增多靶核酸结合荧光定量PCR检测的方法。其中，靶核酸可以是不同类型的核酸或不同类型核酸的混合物，靶核酸数目可以大于5、10、20、50、100、200，预扩增产物通过单重或多重荧光定量PCR多孔检测上述预扩增后的所有的靶核酸的方法在病原体检测、突变检测和药物筛查等领域的应用。所述的多重预扩增多靶核酸结合单重或多重荧光定量PCR检测的方法可以选择性的扩增多靶点，灵敏度高，特异性强，样品用量少。在疾病的检测，诊断，治疗中具有应用价值。
扩增核酸结合荧光定量 pcr 检测方法

[发明专利]一种高密度检测拷贝数变异的方法-CN201210378857.8有效
发明人：陆炯;陈轶群;肖君华 -专利权人：上海翼和应用生物技术有限公司
申请日： 2012-10-08 - 公布日： 2013-02-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速高密度多重竞争性PCR法检测拷贝数变异的方法，包括下列步骤：（1）提供多重竞争性PCR引物，由至少一对通用荧光引物、至少一对位于待测区段和至少一对位于参照区段的嵌合特异引物组成；（2）用限制性内切酶消化样本获得独立的结构相似的样本模板小片段，使得该检测片段能被高密度PCR所检测，且对于高GC序列不敏感；（3）利用PCR法直接制备内对照模板；（4）多重竞争性PCR反应；和（5）数据分析本发明的方法能在一天内快速简便地建立起中通量的适于5～28个基因/反应的拷贝数变异的检测方案，结果准确，适用性广。本发明还提供相应的试剂盒。
一种高密度检测拷贝变异方法

[发明专利]一种呼吸道病原体多重核酸检测试剂盒-CN201910535892.8有效
发明人：蒋析文;黄桃生;李欣钰;郑若楠 -专利权人：广州达安基因股份有限公司
申请日： 2019-06-20 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种呼吸道病原体多重核酸检测试剂盒，具体地，本发明对多重呼吸道病原体PCR扩增体系进行了设计及实验验证，获得了检测多种呼吸道病原体的多重荧光PCR扩增体系，可同时检测9种呼吸道病原体。本发明的试剂盒具有很高的灵敏度和特异性，通过本发明的试剂盒，能够实现对鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰等样本中的多重呼吸道病原体快速检测和分析。
一种呼吸道病原体多重核酸检测试剂盒

[发明专利]一种乳房炎的快速检测方法-CN201510474703.2在审
发明人：郝永清 -专利权人：中创云牧科技咨询(北京)股份有限公司
申请日： 2015-08-06 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳房炎的快速检测方法，包括以下步骤：待检测基因组DNA的提取；设置多重PCR反应体系；将设计好的引物组加入到多重PCR反应体系中进行反应，反应程序为94℃预变性5min；94℃变性45s，57℃退火30s，72℃延伸90s，32个循环；72℃延伸10min，得到多重PCR扩增产物；将上述多重PCR扩增产物进行凝胶电泳，根据待检测样品所出现的电泳条带，判断待检测样品是否为金黄色葡萄球菌、本发明具有良好的敏感性和特异性，可以同时检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌和牛支原体四种奶牛乳房炎常见致病菌，从而快速、有效地防控奶牛乳房炎。
一种乳房快速检测方法

[发明专利]两步法检测葫芦科作物多种病毒的多重RT-PCR方法及其专用引物组-CN201410532939.2在审
发明人：任春梅;程兆榜;周益军 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2014-10-09 - 公布日： 2015-02-18 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种两步法检测葫芦科作物上6种病毒的多重RT-PCR方法及其专用引物，属植物保护领域。该方法包括第一步在一次PCR反应中检测葫芦科作物4种主要病毒(WMV、ZYMV、CMV、CGMMV)，第二步再在一次PCR反应中检测2种次要病毒(TMV和PRSV)。首先人工筛选合成适用于两步多重PCR的特异性引物；分析获得6种病毒单独侵染的病样，提取植株的总RNA；随机引物进行反转录，再分别整合4重和2重PCR的反应体系和条件，建立两步反应能够检测葫芦科作物上6种病毒的多重RT-PCR方法。
步法检测葫芦作物多种病毒多重 rt pcr 方法及其专用引物

[发明专利]甘蔗花叶病和宿根矮化病病原的多重PCR检测方法-CN200710193814.1有效
发明人：杨本鹏;张显勇;张树珍;蔡文伟 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2007-11-23 - 公布日： 2008-05-28 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种甘蔗花叶病和宿根矮化病病原的多重PCR检测方法，其特征是：(1)取甘蔗植株茎基部带鞘叶片为检测样品；(2)设计反转录引物和PCR检测引物对：cpc1、cpc2，RSD引物对F1、F2；对甘蔗花叶病毒和甘蔗宿根矮化病病原的基因片段进行扩增；(3)提取总核酸，将其中的RNA反转录成cDNA；(4)设计该一步法多重RT－PCR的反应体系和扩增程序，将核酸进行扩增；(5)利用凝胶电泳分析扩增结果及特异性，同时利用十倍递进稀释法检测该一步法多重RT－PCR的敏感度。本发明所提供的检测方法通过提取甘蔗的总核酸，在同一个PCR管中完成反转录及PCR反应就可以同时检测出这两种病害的病原，具有操作简单、节省时间、成本低、特异性和敏感性高等优点。
甘蔗花叶病宿根矮化病原多重 pcr 检测方法

[发明专利]一种多重核酸检测系统及其制备方法与应用-CN202111537083.4在审
发明人：陈嘉昌;李楚明;刘向东;唐海辉;王维世;王辉芳;张源明;张乾毅;胡朝晖;柳俊 -专利权人：广州市金圻睿生物科技有限责任公司
申请日： 2021-12-14 - 公布日： 2022-03-04 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明涉及一种多重核酸检测系统，其包括针对目标核酸序列的扩增引物组和检测探针组，该检测系统包括采用LNA修饰的Target探针和通过1～8个连续的G碱基达到荧光淬灭效果的Beacon探针，同时基于上述多重核酸检测系统的提出，发明人结合降落PCR程序，还提出了一种多重核酸检测方法，该方法能够进一步地减少PCR反应中非特异性扩增，提高检测灵敏度。从而克服传统实时荧光定量PCR分型局限性，通过特殊信号和熔解曲线分析实现单管多重分型，实现以更简便的反应体系、更低的检测成本来对样品中的至多20种待测目标核酸序列中的每一个靶基因，均可实现准确定性检测。
一种多重核酸检测系统及其制备方法应用