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[发明专利]一种植物原生质体培养方法-CN201910126107.3在审
发明人：王子迎;徐德聪;吴林生;沈章军 -专利权人：合肥师范学院
申请日： 2019-02-20 - 公布日： 2019-07-09 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种植物原生质体培养方法。本发明在悬浮培养条件下，采用复硝酚钠激活原生质，增强对原生质的刺激强度，从而提高原生质的体外扩增能力，在原生质洗脱前进行高温水浴后并快速冰浴，避免原生质粘联导致收获率低。
原生质体培养种植物悬浮培养条件复硝酚钠高温水浴体外扩增冰浴洗脱放大激活刺激收获

[发明专利]一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法-CN201811516610.1在审
发明人：胡爱生;胡心宇 -专利权人：怀化市共生农业系统工程研究所(普通合伙)
申请日： 2018-12-12 - 公布日： 2019-03-15 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法，包括如下步骤：使用获得植物体作为目标材料，对目标材料造成创伤；获得外源原生质组织液，然后将目标材料浸泡到外源原生质组织液中；取浸泡后成活的目标材料种植，筛选出外源原生质与目标材料杂交成功的材料即为目标材料。本发明通过导入外源原生质可跨越巨大的亲缘关系距离，实现远缘无性杂交育种的目的。
目标材料外源活细胞微创伤组织液浸泡植物体无性杂交育种亲缘关系外部远缘成活创伤杂交筛选种植成功

[发明专利]一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法-CN202110453677.0有效
发明人：宫磊;王天雅;王晓飞;赵雪汝;李长平;徐娟娟;郎曼;丁宝旭;马欣彤;于亚男;曹青禾 -专利权人：东北师范大学
申请日： 2021-04-26 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法。该方法首先对小麦叶片进行原生质体的提取，之后利用蔗糖密度梯度离心法对原生质体进一步纯化，得到近乎完整的原生质体；然后将原生质体破碎，叶绿体完整保留，通过离心进行分离获得完整的叶绿体和细胞质。本发明能有效的对叶绿体和细胞质进行分离，并且交叉污染较少，可进一步对细胞不同组分进行更深层的研究。本发明具有重要的应用价值。
一种小麦原生质体细胞质叶绿体分离方法

[发明专利]一种莴苣原生质体的提取方法-CN201110375704.3无效
发明人：王晓军;王卉;宁慧霞;刘敏;郝秀英;努尔波拉提;徐琴 -专利权人：中国科学院新疆理化技术研究所
申请日： 2011-11-23 - 公布日： 2012-05-02 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种莴苣原生质体的提取方法，该方法由莴苣无菌苗的培养、原生质体的质壁分离、原生质体的酶解以及原生质体的纯化四个步骤完成。该方法以提高莴苣原生质体的活力，简单易于操作，分离材料易于得到，酶解的方法简单，去除细胞壁条件温和，分离的原生质体得率高，活性强，易于莴苣原生质体的培养和植株再生，为原生质体融合奠定了基础。另外原生质体的超低温保存对于有优良性状的种质资源的保存也有极其重要的价值。
一种莴苣原生质体提取方法

[发明专利]辣椒细胞质雄性不育系原生质体分离纯化及愈伤组织形成的方法-CN201110230979.8无效
发明人：王述彬;刁卫平;刘金兵;潘宝贵;戈伟 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2011-08-12 - 公布日： 2012-03-28 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：辣椒细胞质雄性不育系原生质体分离纯化及愈伤组织形成的方法，涉及原生质体来源、分离、纯化及原生质体培养和愈伤组织形成，属于生物技术科学领域。1）利用辣椒细胞质雄性不育系无菌苗真叶为材料分离原生质体；2）切取幼嫩叶片放入含有纤维素酶、果胶酶和离析酶的CPW9酶解溶液中，置于27℃摇床上黑暗处理；3）用300目尼龙筛过滤酶解液，经离心洗涤后收集原生质体；4）将获得的原生质体培养于含有不同浓度激素的液体培养基中，期间定期添加新鲜培养基，直至愈伤组织形成。该发明利用辣椒雄性不育材料进行原生质体分离和培养，对进一步研究原生质体融合以及利用融合技术实现新型辣椒雄性不育系材料的创制具有重要的意义。
辣椒细胞质雄性不育原生质体分离纯化组织形成方法

[发明专利]一种柴胡原生质体的制备及瞬时转化方法-CN202111486799.6在审
发明人：余马;冯亮;陈华;赵军;罗勇;李玉婵;莫传鑫;董凯密;刘晓艳;谢文霖 -专利权人：西南科技大学
申请日： 2021-12-07 - 公布日： 2022-01-28 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种柴胡原生质体的制备及瞬时转化方法，该方法包含：原生质体制备和原生质体瞬时转化；所述原生质体制备，包含：将柴胡下胚轴愈伤组织经酶解液在避光条件下酶解处理，并进行纯化，得到柴胡原生质体；所述原生质体瞬时转化，包含：将所述柴胡原生质体和Crispr/Cas9‑T3T4质粒混合，加入聚乙二醇转化液，室温孵育，待孵育结束后加入W5溶液终止反应，离心收集经过瞬时转化的柴胡原生质体，并重悬于MMG溶液中，室温避光孵育本发明的方法能够实现柴胡下胚轴愈伤原生质体的制备，采用本发明的方法制备的原生质体完整好，浓度可达106个/mL，可有效保证瞬时转化及原生质培养的浓度要求。
一种柴胡原生质体制备瞬时转化方法

[发明专利]一种拟南芥叶肉细胞原生质体及其制备方法和应用-CN201811394334.6有效
发明人：史勇;金维环;陈彦惠;任真真;刘姣姣;王林会 -专利权人：河南农业大学
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种拟南芥叶肉细胞原生质体的制备方法，具体步骤如下：剪取3‑5周的拟南芥叶片用无弹性的纸质胶带或布质胶带固定叶片的上表皮和下表皮；轻轻撕掉叶片下表皮的无弹性的纸质胶带或布质胶带，将剪好的叶片放入含有酶解液的培养皿中；将放有叶片的培养皿置于摇床中培养30‑90min或者直至绝大部分或全部原生质体从叶片上脱离下来为止；将含有原生质体的酶解液转移到圆底离心管中，离心收集原生质体；用预冷的W5溶液清洗原生质体，用W5溶液重悬原生质体并在冰上放置最少本发明将原生质体置于黑暗条件下培养，有效解决了光照培养引起的细胞死亡和凝聚现象，能极大的提高转化效率。
一种拟南芥叶肉细胞原生质体及其制备方法应用

[发明专利]雪莲原生质体的分离和培养方法-CN200910113470.8无效
发明人：王晓军;袁永娴;郝秀英;赵民安;刘敏;徐琴;康喜亮 -专利权人：中国科学院新疆理化技术研究所
申请日： 2009-09-30 - 公布日： 2010-03-17 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及新疆雪莲原生质体的分离和培养方法，该方法由无菌雪莲苗的培养、胚性愈伤组织的诱导及分化、原生质的分离与纯化和原生质体培养四个步骤完成，均适用于新疆雪莲的原生质体的分离和培养。同时本发明具有方法简单易于操作，对设备和培养条件的要求较低；此外，酶解的方法实用，去除细胞壁条件温和，分离原生质体的得率高、活性强易于雪莲原生质体的培养和植株再生，为原生质体培养和融合奠定了基础，也为新疆雪莲种质资源创新和转基因雪莲的研究奠定了基础
雪莲原生质体分离培养方法

[发明专利]一种芋根江蓠原生质体的提取方法-CN201510383349.2有效
发明人：孙利军;辛修锋;孙立平;叶克苁 -专利权人：青岛利邦达海洋科技有限公司
申请日： 2015-07-03 - 公布日： 2018-10-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了芋根江蓠原生质体制备的方法，其主要是研究了不同工具酶分解海藻组织的效果，建立了芋根江蓠原生质体制备方法，游离出体细胞原生质体。本发明的优点是成功获得了芋根江蓠的原生质，可以应用于遗传转化、体细胞杂交、再生植株诱导、体细胞工程育苗等领域。
一种江蓠原生质体提取方法

[发明专利]一种杜梨原生质体的制备方法-CN201710360788.0有效
发明人：唐君;常有宏;蔺经;李晓刚 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-05-19 - 公布日： 2017-07-21 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于细胞生物学及生物技术领域，公开了一种杜梨原生质体的制备方法。本发明通过杜梨材料的前处理和质壁分离处理，利用纤维素酶、离析酶和果胶酶组合酶解杜梨叶肉组织，有效实现了杜梨原生质体的制备，克服了杜梨原生质体难以分离的问题，有效建立了杜梨叶肉原生质体的制备方法。本发明为突破杜梨遗传转化瓶颈，建立杜梨细胞工程技术体系，为杜梨原生质体遗传转化、基因瞬时表达检测、原生质体融合等提供了技术依据。
一种杜梨原生质体制备方法

[发明专利]缢江蓠原生质体的制备方法-CN201610161826.5有效
发明人：刘涛;张磊 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2016-03-22 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了缢江蓠原生质体制备的方法，研究了海洋动物提取酶对缢江蓠组织的解离效果，建立了缢江蓠原生质体制备方法，分离出缢江蓠体细胞原生质体。本发明的优点是成功获得了缢江蓠的原生质，可以应用于细胞壁和细胞质膜功能的研究、种间细胞杂交、遗传工程研究等领域。
江蓠原生质体制备方法

[发明专利]一种香橼叶肉原生质体的分离方法-CN201910195356.8有效
发明人：张艳芳;温寿星;赵维峰;杨文秀 -专利权人：福建省农业科学院果树研究所
申请日： 2019-03-14 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种香橼叶肉原生质体的分离方法，包括以下步骤：取香橼实生苗的幼嫩叶片进行预质壁分离处理、酶解、加入CPW洗液纯化，即可收集得到纯化后的原生质体沉淀。本发明可获得高活性、高产量的原生质体，为开展香橼原生质体胞融合、遗传转化等研究提供实验材料，为香橼实生选种提供新途径。
一种香橼叶肉原生质体分离方法

[发明专利]一种微生物原生质中分子的制备方法及化妆品组合物-CN202310855090.1在审
发明人：凌丰;丁文勇;宋彦霞 -专利权人：北京活力蓝晶生物科技有限公司
申请日： 2023-07-13 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： A61K8/99 文献下载
摘要：本发明公布了一种微生物原生质中分子的制备方法及化妆品组合物，以微生物为原料，采用低温破壁方法在对微生物进行破壁的同时保持原生质内物质的活性，采用分离除去微生物破壁液中的固体物质，采用微滤除去破壁液分离液中的大分子物质采用纳滤除去微滤透过液中的颜色、气味物质和小分子物质，采用树脂吸附柱除去水洗的纳滤浓缩液稀释液中残留的颜色、气味物质和小分子物质，在整个生产过程中，始终保持低温，最终得到无色、无味、没有小分子物质、保持原生质中分子原有的生物活性的微生物原生质中分子，通过利用所得到的微生物原生质中分子为主要组分，以源于微生物和/或植物的化妆品原料为主要的其它组分，形成一种新的化妆品组合物。
一种微生物原生质分子制备方法化妆品组合

[发明专利]马蔺叶肉原生质体及其制备方法-CN201811566917.2在审
发明人：唐君;常有宏;李建斌;于利;王神云;余方伟 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2018-12-20 - 公布日： 2019-02-22 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种马蔺叶肉原生质体及其制备方法，通过马蔺材料的前处理和质壁分离处理，利用纤维素酶、离析酶和果胶酶组合酶解马蔺叶肉组织，有效实现了马蔺原生质体的制备，克服了马蔺原生质体难以游离的技术瓶颈，有效建立了一种马蔺叶肉原生质体的高效制备方法本发明为实现马蔺快速遗传转化，基因瞬时表达研究等提供了一种有效的操作品台，为建立马蔺细胞工程技术体系进行马蔺原生质体培养、原生质体融合、原生体遗传转化、基因瞬时表达研究等提供了技术支撑。
马蔺叶肉原生质体制备瞬时表达遗传转化原生质体细胞工程技术原生质体培养原生质体融合高效制备技术瓶颈技术支撑纤维素酶叶肉组织有效建立有效实现质壁分离组合酶解果胶酶离析酶前处理原生体基因游离研究作品

[发明专利]一种金银花原生质体的分离、培养方法及专用培养基-CN202010373363.5在审
发明人：林瑞娥 -专利权人：林瑞娥
申请日： 2020-05-06 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种金银花原生质体的分离、培养方法及专用培养基，属于植物组织和细胞培养技术领域。本发明方法包括以下步骤：（1）外植体的消毒；（2）外植体的预处理：将叶片在质壁分离液中预处理60min；（3）原生质体的分离：将叶片与酶解液混合后先静置酶解4h后低速振荡酶解4h；（4）原生质体的纯化：采用沉淀法纯化分离出的原生质体；（5）原生质体培养：采用本发明原生质体培养基进行液体浅层培养。本发明以金银花试管苗叶片为外植体，分离纯化获得了高产量、高活力的金银花原生质体，并初步建立了原生质体的培养体系，对开展金银花杂交育种、基因工程等相关生物技术研究具有重要的意义。
一种金银花原生质体分离培养方法专用培养基

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