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[发明专利]一种巨大口蘑原生质体及其制备方法-CN201210018448.7有效
发明人：莫美华;马建伟;梁大伟;陈梅梅;马紫英;倪炎 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2012-01-18 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开一种巨大口蘑原生质体的制备方法。然后采用蜗牛酶与纤维素酶组成的混合酶液对巨大口蘑菌丝进行酶解，所述混合酶液中，纤维素酶的质量浓度为3.5～4.0％，蜗牛酶的质量浓度为0.5～1.0％，余量为渗透压稳定剂；最后对酶解液进行过滤，离心，所得沉淀即为巨大口蘑原生质体本发明所用的混合酶液比单一的溶壁酶价格低一半以上，大大降低了科研中巨大口蘑原生质体的制备费用，为利用原生质体技术进行巨大口蘑育种和基因工程奠定了基础；同时，本发明的巨大口蘑原生质体的制备方法成本比传统的制备方法降低一半以上，而且得到的原生质体释放量和再生率均处于较高水平。
一种巨大口蘑原生质体及其制备方法

[发明专利]飞秒激光融合红发夫酵母细胞的方法-CN200610129921.3无效
发明人：邢岐荣;巩继贤;李寰宇;田震;赵学明;柴路;王清月 -专利权人：天津大学
申请日： 2006-12-07 - 公布日： 2007-05-30 - 主分类号： C12N15/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种飞秒激光融合红发夫酵母原生质体的方法，属于细胞融合技术。该方法采用飞秒激光显微操作系统实施，其过程包括，对数期红发夫酵母用含二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸的磷酸盐缓冲液预处理；用由葡聚糖酶、氯化钾和氯化钙的水溶液组成的酶液，制原生质体；将原生质体与聚乙二醇、氯化钾、氯化钙和磷酸盐缓冲液组成融合液，并加入荧光素双醋酸酯；以5～20mW的光镊为工具，实现荧光较强两目标原生质体接触；调整激光光束的焦点对准两原生质体细胞膜紧密接触区，50～100mW照射67.5～250ms；两目标原生质体完全融合后，分离，培养。
激光融合红发夫酵母细胞方法

[发明专利]通过TALEN平台技术的甜菜原生质体的转化方法-CN201580031432.1在审
发明人：盖伊·魏恩斯;马克·勒菲弗;夏夫高达·塔姆曼纳高达;米里耶勒·隆梅尔;罗松 -专利权人：西斯凡德尔哈维公众公司
申请日： 2015-06-12 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：用于转化甜菜原生质体的方法，包括以下步骤‑从分离自甜菜植物的气孔保卫细胞获得原生质体，‑用包含感兴趣的核苷酸序列和转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)或者包含编码这些转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)序列的序列的一种或多种载体的核酸构建体转化所述原生质体，其中这些TALEN靶向并加工靶序列，并通过同源重组用包含所述感兴趣的核苷酸序列的核酸构建体替换所述靶序列，‑可能地，向这些原生质体的体外培养物应用对所述原生质体的体外培养物有毒的，优选地致死的培养基，和‑从细胞培养物再生甜菜植物，优选地，从整合了包含感兴趣的序列的核酸构建体的存活的原生质体再生甜菜植物，所述感兴趣的序列可能使所述转化的细胞对所应用的培养基的毒性活性具有耐受性。
通过 talen 平台技术甜菜原生质体转化方法

[发明专利]海藻原生质体分离培养和再生植株的方法-CN201811494026.0有效
发明人：王斌;张建设;杨静静 -专利权人：浙江海洋大学
申请日： 2018-12-07 - 公布日： 2021-11-23 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供海藻原生质体分离培养和再生植株的方法，属于藻类培养领域，具体方法为：选择颜色正常、无腐烂、生长旺盛的藻体，用毛刷清理藻体表面污泥、杂藻和其它附属杂质，用HgCl2原生质；将原生质体培养得到再生细胞壁的细胞，进一步培养即可得到再生植株。
海藻原生质体分离培养再生植株方法

[发明专利]一种测定烟草细胞内K⁺相对浓度的方法-CN201610396520.8有效
发明人：刘晶;郑轶琦;田耀武;赵燕;张巧明;王哲锋 -专利权人：河南科技大学
申请日： 2016-06-07 - 公布日： 2018-08-28 - 主分类号： G01N27/36 文献下载
摘要：本发明涉及一种测定烟草细胞内K+相对浓度的方法，首先利用细胞裂解缓冲液处理烟草叶片，过滤取滤液，离心，保留沉淀，用醋酸铵水溶液悬浮，制备原生质体液；其次准备玻璃电极系统，在K+选择性微电极的前端灌充氢离子液态交换剂，后端灌充电解液；最后进行离子相对浓度测定，将原生质体液滴在盖玻片上，静置使原生质体固定，盖玻片置于测试小室底部，用K+选择性微电极在Z轴方向上，刺破细胞膜，利用电极的瞬间感应分别测定探针在溶液中、接触细胞内液及细胞内外液交流后的电流电压，快速获得细胞质中K+相对浓度，进行样品间的差异比较。
一种测定烟草细胞内 sup 相对浓度方法

[发明专利]用融合技术驯化栽培野生名贵食用菌台蘑和银盘蘑菇的方法-CN03111970.0无效
发明人：李程才;梁枝荣;张池堂;李兆宁;韩博 -专利权人：李程才
申请日： 2003-03-10 - 公布日： 2003-09-17 - 主分类号： C12N15/02 文献下载
摘要：本发明是一种用融合技术驯化栽培野生名贵食用菌台蘑和银盘蘑菇的方法，其特征是以所驯化菌种台蘑和银盘蘑菇的双核体原生质体作为供体，与具有所需优良特性菌种凤尾菇(Pleurotussajor－cajuauct.nonSing.)的单核体原生质作为受体融合，从而选育出易于人工培养的所驯化的野生台蘑和银盘蘑菇菌株。本发明选用产量高，生态条件要求粗放，易于栽培的食用菌凤尾菇作为受体，而将驯化的台磨和银盘蘑菇的菌种作为供体进行原生质体的融合，使驯化的野生食用菌种的基本遗传物质在受体菌株内得以表达，进行正常分裂、繁殖，
融合技术驯化栽培野生名贵食用菌蘑菇方法

[发明专利]一种可以减少作物因倒春寒造成损伤的药肥制备方法-CN202210554292.8在审
发明人：周建 -专利权人：江苏多农多收技术研究有限公司
申请日： 2022-05-19 - 公布日： 2022-08-09 - 主分类号： C05G3/00 文献下载
摘要：尤其为一种可以减少作物因倒春寒造成损伤的药肥制备方法，包括芸苔素内酯提取、混合搅拌、消毒烘干、精细研磨和挤压造粒，本发明中，通过设置的芸苔素内酯、磷酸二氢钾和复硝酚钠，三种成分均有促进植物的光合作用，加快植物对营养物质的吸收和转化利用，使细胞内原生质的浓度显著提高，者复配使用，可提高细胞的活性，快速提高作物的光合作用能力，促进植物细胞多种酶的活性，加快蛋白质、氨基酸等物质的合成，使叶片更加厚实，细胞原生质浓度提高，显著提高植株的抗寒能力，该药肥能够促进果实膨大，
一种可以减少作物倒春寒造成损伤制备方法

[其他]赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化技术-CN87101002无效
发明人：葛扣麟;王韫珠;袁勋梅;黄培铭;杨金水;聂志平 -专利权人：复旦大学
申请日： 1987-03-25 - 公布日： 1988-03-30 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明是赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化的组织培养技术。本发明采用特定的酶液及酶解方法游离得叶肉原生质体；采用特定的大量元素及维生素成份，采用特定的碳源及渗透压稳定剂，采用特定的激素配比方式等制成赤豆叶肉原生质体生长培养基；采用特定的激素配比方式制成愈伤组织扩增及分化培养基采用本发明技术，原生质体能持续分裂，形成愈伤组织并最终分化成绿苗。
赤豆叶肉原生质体分离培养分化技术

[发明专利]一种用蓝子鱼内脏提取液制备细齿麒麟菜的原生质体的方法-CN201310026468.3有效
发明人：刘建国;李俊鹏;庞通;李虎;林伟 -专利权人：南通中国科学院海洋研究所海洋科学与技术研究发展中心;中国科学院海洋研究所
申请日： 2013-01-24 - 公布日： 2014-08-06 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种用蓝子鱼内脏提取液制备细齿麒麟菜的原生质体的方法，所述方法包括如下步骤：（1）用细齿麒麟菜饲喂蓝子鱼；（2）从蓝子鱼内脏获得粗酶提取液；（3）用所述粗酶提取液酶解细齿麒麟菜以获得原生质体本发明方法的原料易于获得，结果完整、稳定，通过本发明方法能够获得具有完整结构的没有细胞壁的原生质体，为接下来的通过原生质体愈合和组织培养途径进行种质种苗培育奠定良好基础。
一种用蓝子鱼内脏提取制备麒麟原生质体方法

[发明专利]一种猴头菌高产麦角甾醇优良菌株的选育方法及猴头菌株-CN202010522419.9有效
发明人：张赫男;杨焱;张劲松;李巧珍;陈明杰;唐传红;吴迪 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2020-06-10 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种猴头菌高产麦角甾醇优良菌株的选育方法及猴头菌株，其保藏编号为CGMCC No.19374，本发明原生质体融合育种，融合菌株R51*的菌丝生长速度、生物量、麦角甾醇含量均显著高于对照菌株。本发明优化融合育种方法，猴头菌原生质体融合率得到显著提高。本发明通过分多步骤、逐级降低PEG浓度同时提高Mg2+、Ca2+浓度来降低对原生质体的毒害作用，从而大大提高了原生质体融合效率
一种猴头菌高产麦角优良菌株选育方法猴头

[发明专利]赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化技术-CN87101002.X无效
发明人：葛扣麟;王韫珠;袁勋梅;黄培铭;杨金水;聂志平 -专利权人：复旦大学
申请日： 1987-03-25 - 公布日： 1991-07-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明是赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化的组织培养技术。本发明采用特定的酶液及酶解方法游离得叶肉原生质体；采用特定的大量元素及维生素成分，采用特定的碳源及渗透压稳定剂，采用特定的激素配比方式等制成赤豆叶肉原生质体生长培养基；采用特定的激素配比方式制成愈伤组织扩增及分化培养基采用本发明技术，原生质体能持续分裂，形成愈伤组织并最终分化成绿苗。
赤豆叶肉原生质体分离培养分化技术

[发明专利]产生单克隆植物细胞系的方法-CN201180071503.2有效
发明人：珍娜·基尔霍夫;史蒂芬·雪勒伯格;安德烈斯·席尔迈尔;海尔格·辛克尔;莱纳·费希尔 -专利权人：弗劳恩霍夫应用研究促进协会
申请日： 2011-06-07 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供一种由植物细胞的异种群体产生单克隆植物细胞系的方法，其包含下列步骤（a）提供植物细胞的异种群体；（b）由该植物细胞的异种群体制备原生质体；（c）通过将原生质体制备物进行流式细胞分选而分离单一原生质体；（d）在饲养细胞材料存在的情况下，通过共培养使分离的单一转化原生质体再生直到形成小集落；（e）将小集落从饲养细胞材料中转移，并培养小集落直到形成单克隆植物细胞系。
产生单克隆植物细胞系方法

[发明专利]用于转染原生质体的改进技术-CN201080057861.3有效
发明人： P·本多克;B·G·J·菲伦斯-翁斯滕克;F·吕西耶 -专利权人：凯津公司
申请日： 2010-12-20 - 公布日： 2012-11-21 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及用于向植物细胞原生质体中引入一种或多种感兴趣的分子的方法，所述方法通过提供植物细胞原生质体，采用能够改变选自错配修复系统和非同源性末端连接的一种或多种通路的调节的组合物和/或能够引入DSBs的组合物进行植物细胞原生质体的第一转染，采用一种或多种感兴趣的分子如致突变的寡核苷酸进行植物细胞原生质体的第二转染和允许细胞壁形成来实现。
用于转染原生质体改进技术

[发明专利]一种姬松茸原生质体的制备方法-CN201611160807.7在审
发明人：郝青 -专利权人：陕西玉航电子有限公司
申请日： 2016-12-15 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种姬松茸原生质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4‑6d的菌丝体用于原生质体制备；本发明所述方法制备的姬松茸原生质体，制备方法简单，成品率高
一种姬松茸原生质体制备方法

[发明专利]结合叶绿素荧光技术和原生质体系统研究光合作用的方法及其应用-CN201210265108.4无效
发明人：王宏斌;苏建斌;段珊;刘兵;冯冬茹;王金发 -专利权人：中山大学
申请日： 2012-07-27 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了结合叶绿素荧光技术和原生质体系统研究光合作用的方法及其应用。通过在原生质体中瞬时表达或沉默一个或多个基因，之后利用调制叶绿素荧光成像仪测定拟南芥叶肉细胞原生质体叶绿素荧光变化，并对其图像进行对比，可以快速、高通量地筛选出与光合作用相关的基因。
结合叶绿素荧光技术原生质体系统研究光合作用方法及其应用