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[发明专利]一种用于动物细胞培养的气升式反应器-CN202010619392.5有效
发明人：李雪良;陈坚;堵国成;周景文;房峻 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-06-30 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12M3/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于动物细胞培养的气升式反应器，属于动物细胞培养技术领域。所述反应器包括：外壳、一次性柔性内胆、隔膜、上升管区域、降液管区域、阀门、顶部空间；所述一次性柔性内胆设于外壳内，所述隔膜设于一次性柔性内胆内部，并将一次性柔性内胆的腔室左右分为上升管区域和降液管区域，所述隔膜上方为顶部空间；所述阀门有多个并纵向设于隔膜上；所述浮筒根据反应器内的液位自动打开或者关闭阀门的膜瓣。本发结合浮筒设计，在上升管和降液管之间的隔膜上开有若干个可以根据液位自动开闭的阀门，使反应器操作在不同液位时，上升管和下降管区域之间都有液体交换，达到促进混合和传质的效果。
一种用于动物细胞培养气升式反应器

[发明专利]一种快速构建曲霉重组菌株的方法-CN201910773371.6有效
发明人：刘松;李岑;堵国成;陈坚;周景文 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-08-21 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速构建曲霉重组菌株的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过CRISPR‑Cas9对黑曲霉albA基因和黑曲霉kusA基因同时剪切，通过孢子表型快速筛选出黑曲霉kusA突变菌株，与同源重组方法突变kusA基因相比，显著提高同源重组菌株纯合子概率，白色突变体kusA破坏概率达50％，纯化子概率达100％。
一种快速构建曲霉重组菌株方法

[发明专利]一种利用保加利亚乳杆菌强化酵素功效的方法-CN201710972121.6有效
发明人：方芳;朱茂伟;李益烽;李巧玉;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2017-10-18 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用保加利亚乳杆菌强化酵素功效的方法，属于发酵食品技术领域。本发明通过向果蔬原料中添加酿酒酵母N85，葡糖醋杆菌Q1和德氏乳杆菌保加利亚亚种B1，强化了酵素的益生功效，使制备的酵素还原力相比对照组提高了43.3％，DPPH清除率也从88.25％提高到了93.09％，乳酸含量提高了36.1％，乙酸含量提高了35.2％。蛋白酶活力相比于对照组提高了11.9％，增加了挥发性物质的含量，乙酸乙酯含量提高了85.1％，乙酸戊酯含量提高了89.1％，使酵素具有特殊的果香味，并且提高了酵素抑菌能力。
一种利用保加利亚杆菌强化酵素功效方法

[发明专利]一种适用于雷帕霉素介导调控蛋白亚细胞定位的黄酒酵母-CN201811445149.5有效
发明人：周景文;陈坚;张伟平;曾伟主;方芳;堵国成;夏小乐 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-11-29 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于雷帕霉素介导调控蛋白亚细胞定位的黄酒酵母，属于遗传工程领域。本发明是以黄酒酵母XZ‑11(MATa，Δura3，Δtrp1)作为出发菌株，通过敲除雷帕霉素结合亚基编码基因FPR1，阻断雷帕霉素与内源基因FPR1编码产物的结合。同时将TOR1基因1972位的丝氨酸残基突变为精氨酸，使菌株生长不受雷帕霉素抑制。由此构建的重组菌JNZ01(MATa,Δura3,Δtrp1，TOR1 S1972R，Δfpr1)在含有1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL雷帕霉素的培养基中生长良好，为运用雷帕霉素介导调控蛋白亚细胞定位提供了基础。
一种适用于霉素调控蛋白细胞定位黄酒酵母

[发明专利]一种发酵合成四氢嘧啶的酿酒酵母工程菌株-CN202011576378.8在审
发明人：康振;陈坚;堵国成;杜养标;魏伟伟 -专利权人：江苏瑞霆生物科技有限公司
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种发酵合成四氢嘧啶的酿酒酵母工程菌株，属于生物工程技术领域。本发明以酿酒酵母为宿主，以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌与酿酒酵母的三穿梭质粒pEBS为表达载体，在酿酒酵母中引入来源于伸长盐单胞菌的ectABC基因簇，再进行ectA、ectB、ectC单基因RBS优化、启动子优化以及单基因RBS和启动子双优化等策略，实现了高效生物合成四氢嘧啶。本发明构建的酿酒酵母重组菌在摇瓶上培养96h四氢嘧啶积累量高达2.3g/L，在工业上具有潜在而广泛的应用价值。
一种发酵合成嘧啶酿酒酵母工程菌株

[发明专利]一种食品安全级枯草芽孢杆菌及其在生产几丁二糖脱乙酰酶中的应用-CN202110536143.4在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;毛馨竹 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-05-17 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种食品安全级枯草芽孢杆菌及其在生产几丁二糖脱乙酰酶中的应用，属于生物分子改造及基因工程技术领域。本发明通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的表达载体pP43NMKmut‑C4‑yncM‑Dac的信号肽进行筛选和优化，提高几丁二糖脱乙酰酶Dac的分泌效率，提高酶活，并构建了可以稳定高效表达几丁二糖脱乙酰酶Dac的食品安全级工程菌株。与现有技术相比，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活得到了极大的提高。本转化方法简单易行，条件温和，高效环保，产物得率高。此法有利于解决传统合成法中污染严重，产率低下等问题，而且此法易于控制，利于推广应用。
一种食品安全枯草芽孢杆菌及其生产几丁二糖脱乙酰中的应用

[发明专利]高效合成5-甲基吡嗪-2-羧酸的工程菌及其构建方法及应用-CN201910833893.0有效
发明人：刘龙;顾刘燕;刘克;堵国成;李江华;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2021-07-20 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的工程菌及其构建方法及应用，属于生物工程技术领域。本发明的重组大肠杆菌是通过在大肠杆菌BL21(DE3)中组合优化二甲苯单加氧酶、苯甲醇脱氢酶和苯甲醛脱氢酶基因的表达，并强化表达二甲苯单加氧酶的电子转移蛋白基因得到，通过改造获得了高效合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的大肠杆菌，其产量达到10.2g/L，且摩尔转化率提高到67％。在底物浓度提高的同时，摩尔转化率也有所提高。本发明重组大肠杆菌的构建方法简单，便于使用，具有很好应用前景。
高效合成甲基羧酸工程及其构建方法应用

[发明专利]一种诱导合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用-CN201711092672.X有效
发明人：刘龙;陈坚;堵国成;邓洁莹;陈春梅;李江华 -专利权人：光明乳业股份有限公司
申请日： 2017-11-08 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种诱导合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，所述重组芽孢杆菌是通过诱导表达枯草芽孢杆菌168的糖转运蛋白基因，并表达外源岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因得到的。本发明通过强化丙酮酸到草酰乙酸的反应，增加流向草酰乙酸的碳通量，增强了细胞膜对岩藻糖的运输，增加了胞内岩藻糖的浓度，促进了鸟苷二磷酸岩藻糖的合成。本发明重组枯草芽孢杆菌的构建方法简单，便于使用，具有很好的应用前景。
一种诱导合成二磷酸岩藻糖重组枯草芽孢杆菌及其构建方法应用

[发明专利]一种高产乙酰氨基葡萄糖的重组谷氨酸棒杆菌及其应用-CN201910433896.5有效
发明人：刘龙;邓琛;卢建行;刘长峰;卢建功;李江华;堵国成;陈坚 -专利权人：江南大学;山东润德生物科技有限公司
申请日： 2019-05-23 - 公布日： 2021-06-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种高产乙酰氨基葡萄糖的重组谷氨酸棒杆菌，是敲除了乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶编码基因NagA和乙酰氨基葡萄糖脱氨基酶编码基因GamA，并表达了来源于秀丽隐杆线虫的氨基葡萄糖脱乙酰化酶编码基因GNA1。该重组谷氨酸棒杆菌可实现乙酰氨基葡萄糖在胞外积累，其浓度最高为24.7g/L，相比未改造菌株提升84.2％，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好的应用前景。
一种高产乙酰氨基葡萄糖重组谷氨酸杆菌及其应用

[发明专利]红枣山楂复合饮料及其制备方法-CN202110422739.1在审
发明人：刘龙;陈坚;石训;石勇;吕雪芹;堵国成;李江华;张卫卫;刘延峰;王璇 -专利权人：江南大学;好想你健康食品股份有限公司
申请日： 2021-04-16 - 公布日： 2021-06-22 - 主分类号： A23L2/38 文献下载
摘要：本发明涉及一种红枣山楂复合饮料的制备方法，包括以下步骤：以红枣和山楂为原料，分别进行蒸煮、榨汁、酶解和过滤，得到澄清的红枣汁和山楂汁；将澄清的红枣汁和山楂汁进行配比和灭菌，得到红枣山楂培养基，采用植物乳杆菌10345和肠膜明串珠菌22185发酵，得到红枣山楂复合饮料；其中，植物乳杆菌10345的保藏编号为CICC NO:10345，肠膜明串珠菌22185的保藏编号为CICC NO:22185。本发明的红枣山楂复合饮料以药食同源的红枣和山楂为原料，真正做到零添加，口感酸甜，风味独特，同时具有消食化积、健脾护胃、补血益气、抗氧化和提高免疫力等保健功效。
红枣山楂复合饮料及其制备方法

[发明专利]红枣酵素及其制备方法-CN202110411962.6在审
发明人：刘龙;石训;陈坚;石勇;吕雪芹;堵国成;李江华;张卫卫;刘延峰;王璇 -专利权人：江南大学;好想你健康食品股份有限公司
申请日： 2021-04-16 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： A23L2/38 文献下载
摘要：本发明涉及一种红枣酵素及其制备方法，制备方法包括以下步骤：由红枣经蒸煮、榨汁、酶解、过滤和灭菌获得红枣汁发酵基质，再通过巴氏醋杆菌、葡萄糖醋杆菌3‑15和乳酸克鲁维酵母发酵而成。本发明的红枣酵素安全性高，无添加，独具风味。
红枣酵素及其制备方法

[发明专利]一种N-乙酰神经氨酸生产稳定性提高的重组枯草芽孢杆菌-CN202110219450.X在审
发明人：刘延峰;堵国成;曹燕亭;刘龙;吕雪芹;李江华;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-02-26 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种N‑乙酰神经氨酸生产稳定性提高的重组枯草芽孢杆菌，属于枯草芽孢杆菌代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过将两个单输出细胞亚群调控回路组合，构建了一种可以提高亚群调控回路稳定性的的双输出亚群调控回路。在双输出亚群调控回路中，存在两个传感器启动子Pveg105作为输出启动子，只有当两个Pveg105同时发生遗传突变，细胞亚群调控回路才会失效，这增加了亚群调控回路的稳定性。所得到的重组枯草芽孢杆菌可以在96h的连续传代发酵培养过程中一直维持NeuAc生产，且产量稳定在0.65‑0.90g/L。
一种乙酰神经氨酸生产稳定性提高重组枯草芽孢杆菌

[发明专利]采用双启动子增强乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其应用-CN202110415416.X在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;崔世修 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-04-18 - 公布日： 2021-06-11 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及一种采用双启动子增强乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其应用，本发明通过融合PCR的方式构建Paox1和Pgap串联启动子，进一步优化两个启动子的间隔长度与启动子的顺序，通过发酵实验发现，不同长度的间隔序列导致不同的转录水平。其中当间隔序列达到50bp时，与单个启动子Paox相比，乳铁蛋白的转录水平提高了将近6.5倍，通过western blot发现乳铁蛋白的表达量增加了约3.7倍，达到了150mg/L。本发明能够有效的提高乳铁蛋白的表达量，并将甲醇的用量降低50％以上。
采用启动子增强铁蛋白表达酵母及其应用

[发明专利]一种维生素D3产量提高的酵母菌-CN202110267085.X在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;曲丽莎 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-03-11 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及一种维生素D3产量提高的酵母菌，本发明利用dCas9系统动态调控ERG6基因，该系统的引入可以将酿酒酵母细胞分为前期细胞生长阶段和后期产物积累阶段。前期dCas9系统不发挥对ERG6基因的抑制作用，细胞实现正常生长繁殖，后期当OD进入较高水平时，dCas9系统发挥动态调控作用，抑制ERG6基因的正常转录，阻断7‑DHC的竞争途径，实现代谢流更大限度的流向目标产物。同时保证了细胞的正常生长繁殖，发酵产量达到123mg/L。
一种维生素 d3 产量提高酵母菌

[发明专利]从头合成莱鲍迪苷M的酿酒酵母工程菌及其应用-CN202110106054.6在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;徐雅梦;房峻 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-01-26 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种从头合成莱鲍迪苷M的酿酒酵母工程菌及其应用，属于代谢工程技术领域。本发明的酿酒酵母工程菌整合表达了贝壳杉烯合酶fpps、贝壳杉烯合酶ks、贝壳杉烯酸氧化酶ko、甜菊醇合酶kah、UDP葡萄糖基转移酶ugt74g1、UDP葡萄糖基转移酶ugt85C2、UDP葡萄糖基转移酶eugt11和UDP葡萄糖基转移酶ugt76g1。本发明提供的重组酿酒酵母可实现以葡萄糖为底物发酵生产莱鲍迪苷M，并在胞内积累，为代谢工程改造酿酒酵母从头合成莱鲍迪苷M奠定了基础。本发明提供的重组酿酒酵母的构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
从头合成莱鲍迪苷酿酒酵母工程及其应用