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[发明专利]一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包-CN202110659681.2有效
发明人：周景文;高松;曾伟主;陈坚;沐万孟 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-06-11 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包，属于基因和代谢工程领域。本发明构建和验证的多拷贝整合质粒工具包，可以通过一次转化在酿酒酵母基因组上实现多个外源基因的多拷贝、稳定的、整合型表达。并且可以通过选择不同的筛选标签在不同的Ty位点，实现多批次、多基因、稳定的、整合型表达外源基因。
一组用于酿酒酵母拷贝整合质粒工具包

[发明专利]一种高产乳酰-N-四糖的微生物的构建方法及应用-CN202110900124.5有效
发明人： 沐万孟;张文立;朱莺莺;李泽宇 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-08-06 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产乳酰‑N‑四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明以前期构建完成的高效生产前体物质乳酰‑N‑三糖II的菌株为出发菌株，过表达合成乳酰‑N‑四糖的关键基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,3‑半乳糖基转移酶基因，并合理设计在载体pCDFDuet‑1上共表达β‑1,3‑半乳糖基转移酶基因和强化UDP‑半乳糖途径关键基因UDP‑葡萄糖4差向异构酶基因(galE)，从而提高乳酰‑N‑四糖的合成，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑四糖的能力为3.04g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑四糖的产量达到25.49g/L，具备工业应用的前景。
一种高产微生物构建方法应用

[发明专利]一种高效降解兽药抗生素残留的漆酶及其应用-CN202210737434.4有效
发明人： 沐万孟;徐炜;欧阳斌斌;张文立 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-06-21 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C02F3/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效降解兽药抗生素残留的漆酶及其应用，属于环境生物技术领域。本发明筛选到一种来源于Lysinibacillus fusiformis的漆酶，相比现有的技术，本发明筛选到的漆酶能够耐受80℃的高温，具有在更高温度下长时间稳定降解抗生素，良好的耐热性和优异的降解效率等能力。能够在短时间内降解大量抗生素，并且生产成本低，所用设备少，有助于工业上对兽药抗生素残留的控制。
一种高效降解兽药抗生素残留及其应用

[发明专利]一种β-（2, 6）果聚糖蔗糖酶突变体的构建及应用-CN202310677702.2在审
发明人：徐炜;张文立;张晓琦;倪大伟;沐万孟 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-06-08 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶突变体的构建及应用，属于酶的基因工程技术领域。本发明将微生物Pseudomonas orientalis来源的β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶作为亲本，构建了单点突变体酶R91T。突变体R91T催化蔗糖的聚合能力明显提高，在1h内将20％的蔗糖和20％的乳糖转化为低聚乳果糖的转化率可达40％，同时该突变体将30％蔗糖转化为高分子量果聚糖的转化率达49％。这一发现对于工业化制备低聚乳果糖，以及β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶的工业化应用有重要的研究价值。
一种聚糖蔗糖突变体构建应用

[发明专利]一种专一生产2′-岩藻糖基乳糖的菌株及应用-CN202310168797.5在审
发明人： 沐万孟;朱莺莺;陈逸晗;王浩;王芬;陈柔霖;张文立 -专利权人：江南大学;华熙生物科技股份有限公司
申请日： 2023-02-27 - 公布日： 2023-09-19 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种专一生产2′‑岩藻糖基乳糖的菌株及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明公开了一种编码SAMT蛋白的核酸分子，核酸分子包括如SEQ ID NO.2所示序列或与SEQ ID NO.2具有至少98％序列同一性的核苷酸序列。该核酸分子编码的SAMT蛋白来源于Azospirillumlipoferum，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该蛋白具有优越的α1,2‑岩藻糖基转移酶催化活性和严格的底物特异性，在摇瓶发酵实验过程中，重组大肠杆菌BSS2生产2′‑岩藻糖基乳糖的能力为8.03g/L，在5L发酵罐中，2′‑岩藻糖基乳糖的产量达到112.56g/L，为目前报道的最高产量，具备工业化应用的潜力。
一种专一生产岩藻糖基乳糖菌株应用

[发明专利]一种高产2′-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用-CN202210666616.7有效
发明人： 沐万孟;张文立;刘苑琳;朱莺莺 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-06-13 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产2′‑岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明在敲除lacZ和wcaJ基因的BL21(DE3)宿主菌中，通过引入从头途径基因和编码α‑1,2‑岩藻糖基转移酶的wbgL基因来实现2′‑岩藻糖基乳糖的合成。在引入编码正转录调控因子的基因rcsA和rcsB基因来调节wbgL基因的表达，并采用强启动子PJ23119实现基因的表达。得到的重组大肠杆菌在分批发酵条件下2′‑岩藻糖基乳糖的产量最大可达9.055 g/L，在3 L发酵罐中，2′‑岩藻糖基乳糖的产量达到79.23 g/L，是迄今报道的最高值，在大规模工业应用中表现出显著的生产潜力。
一种高产岩藻糖基乳糖重组大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]一种高产乳酰-N-新四糖的微生物的构建方法及应用-CN202110900122.6有效
发明人： 沐万孟;张文立;朱莺莺;罗国聪 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-08-06 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产乳酰‑N‑新四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明过表达β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶，β‑1,4‑半乳糖基转移酶和/或UDP‑葡萄糖4差向异构酶的编码基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因，并通过组合调控乳酰‑N‑新四糖合成途径中lgtA，Aa‑β‑1,4‑GalT和galE的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑新四糖的能力为0.91 g/L，在3 L发酵罐中，乳酰‑N‑新四糖的产量达到12.14 g/L，具备工业应用的前景。
一种高产新四糖微生物构建方法应用

[发明专利]一种高产N-乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌的构建方法及应用-CN202310598341.2在审
发明人： 沐万孟;朱莺莺;赵明利;张文立 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-25 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，通过敲除基因nanA，基因nanT，基因nanK和基因nagB，游离表达外源基因neuC和基因neuB，并过表达UDP‑GlcNAc合成途径基因glmM，glmU和GlmS突变体基因glmS*获得的一种高产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌。在摇瓶发酵实验过程中，N‑乙酰神经氨酸的产量可以达到7.02g/L。分批补料条件下，在5L发酵罐中N‑乙酰神经氨酸的产量达到46.92g/L，产率达到0.82g/L/h和1.05g/gDCW，具备工业化应用的潜力。
一种高产乙酰神经氨酸重组大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]一种热稳定性提高的甘露糖异构酶突变体-CN202110797099.2有效
发明人： 沐万孟;武彦昌;陈秋铭;张文立 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-07-14 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N9/90 文献下载
摘要：本发明公开了一种热稳定性提高的甘露糖异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了来源于微生物Deltaproteobacteria bacterium的甘露糖异构酶作为亲本，利用基因突变技术，第37位的精氨酸替换成赖氨酸和第164位的甘氨酸替换成亮氨酸，得到双突变体R37K/G164L。在温度为60℃时，测得野生酶的半衰期为46.27min,突变体酶R37K/G164L的半衰期为185.83min，两点突变体R37K/G164L在60℃的半衰期为野生酶半衰期的4倍，突变体酶相对于野生酶热稳定性明显的提高。这一发现对于研究更多热稳定性甘露糖异构酶具有重要的研究价值。
一种热稳定性提高甘露糖异构酶突变体

[发明专利]一种高产乳酰-N-岩藻糖基五糖Ⅰ的重组大肠杆菌的构建方法及应用-CN202310372381.5在审
发明人： 沐万孟;朱莺莺;赵明利;李泽宇;张文立 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-04-10 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明在大肠杆菌基因组上整合尿苷二磷酸半乳糖‑4‑差向异构酶编码基因galE，在基因组IS186多拷贝基因座上插入β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶编码基因lgtA，游离表达β‑1,3‑半乳糖基转移酶编码基因wbgO使底物乳糖转化为乳酰‑N‑四糖。发现鸟苷二磷酸‑岩藻糖的从头合成途径利于乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ的生产。本发明筛选到既能够提高乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ的产量，又能避免副产物2′‑岩藻糖基乳糖的生成的α1,2‑岩藻糖基转移酶WbsJ。本发明提供的重组大肠杆菌摇瓶发酵产乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ达2.53g/L，5L发酵罐产量达30.47g/L，为进一步工业化生产乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ奠定了基础。
一种高产岩藻糖基五糖重组大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]一种纤维二糖差向异构酶突变体及其应用-CN202111649475.X有效
发明人： 沐万孟;张文立;黄昭霖;陈秋铭;陈业明 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-12-30 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N9/90 文献下载
摘要：本发明公开了一种纤维二糖差向异构酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明公开了来源于微生物Caldicellulosiruptor saccharolyticus的纤维二糖差向异构酶(简称Casa‑WT酶)作为亲本，利用基因突变技术，第231位的苯丙氨酸Phe替换成半胱氨酸Cys和第173位的丝氨酸Ser替换成半胱氨酸Cys，得到双突变体F231C/S173C。最适催化条件下，双突变体酶在70℃的异构酶活提高到原有的287％。这一发现对于研究更多异构酶活较低的纤维二糖差向异构酶具有重要的研究价值。
一种纤维差向异构突变体及其应用

[发明专利]一种高产3-岩藻糖基乳糖微生物的构建方法及应用-CN202111404385.4有效
发明人： 沐万孟;张文立;陈耕;朱莺莺;吴昊 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-11-24 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产3‑岩藻糖基乳糖微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明通过筛选高效的α‑1,3‑岩藻糖基转移酶基因，并通过组合调控3‑岩藻糖基乳糖合成途径中manC、manB、wcaG和gmd在大肠杆菌中的表达，使大肠杆菌拥有生产3‑岩藻糖基乳糖的合成能力，并能够精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产3‑岩藻糖基乳糖的能力为2.01g/L，在3L发酵罐中，3‑岩藻糖基乳糖的产量达到20.3g/L，具备良好工业应用的前景。
一种高产岩藻糖基乳糖微生物构建方法应用

[发明专利]一种高酶活D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体及其应用-CN202310155281.7在审
发明人：张文立;沐万孟;任虎;李瑾;徐炜;朱莺莺;倪大伟;石婷 -专利权人：江南大学;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2023-02-22 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N9/90 文献下载
摘要：本发明公开了一种高酶活D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体及其应用，属于酶的基因工程技术领域。本发明以来源于Thermoclostridium caenicola的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，利用基因突变技术，将第258位的半胱氨酸突变为组氨酸，获得单点突变体C258H，其酶活得到了提高，由野生型酶的242.4U/mg提高到387.8U/mg，增加了60.0％。这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
一种高酶活阿洛酮糖差向异构突变体及其应用

[发明专利]高效合成乳酰-N-四糖的工程大肠杆菌的构建方法及应用-CN202310187376.7在审
发明人： 沐万孟;朱莺莺;李泽宇;张文立 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-03-01 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了高效合成乳酰‑N‑四糖的工程大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。通过CRISPR相关的转座酶系统(CRISPR‑associated transposases,MUCICAT))对大肠杆菌基因组进行多位点的基因编辑，实现大肠杆菌基因组不同拷贝数编码β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶的基因整合，再引入β‑1,3‑半乳糖基转移酶，从而构建了多株生产乳酰‑N‑四糖的工程大肠杆菌，在摇瓶实验过程中，乳酰‑N‑四糖的摇瓶产量可以达到6.07g/L，为进一步工业化生产与合成其他复杂母乳寡糖奠定了基础。
高效合成工程大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]一种酮糖3-差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用-CN202310160691.0在审
发明人：张文立;沐万孟;任虎;李瑾;徐炜;朱莺莺;倪大伟;石婷 -专利权人：江南大学;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2023-02-23 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N9/90 文献下载
摘要：本发明公开了一种酮糖3‑差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用，属于固定化酶制备技术领域，本发明分为以下步骤：第一步，对阴离子交换树脂进行预处理；第二步，离子交换树脂吸附蛋白酶；第三步，加入戊二醛进行交联。本发明制备的固定化酶制备简单，价格低廉，反应条件简单温和。固定化提高了酶的相对活性和稳定性，制备得到的固定化酶结合牢靠，可进行多次酶催化反应。这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
一种差向异构固定制备方法及其应用

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