[发明专利]核酸组合及其应用、病毒检测试剂盒和检测病毒的方法

说明书

本申请涉及核酸检测领域，具体而言，涉及一种核酸组合及其应用、病毒检测试剂盒和检测病毒的方法。核酸组合包括以下引物对及其对应的探针：引物对和探针如SEQ ID NO：1‑9所示。本申请提供的基于重组配对扩增法的病毒检测试剂盒操作简便且能有效防止污染，检测时间较短，能够同时检测出SARS‑CoV‑2病毒、甲型流感病毒以及乙型流感病毒，解决了现有产品只能单一检测一种病毒的问题；具有灵敏度高、特异性好、可重复性强、检测结果快等优点。

技术领域

本申请涉及核酸检测领域，具体而言，涉及一种核酸组合及其应用、病毒的检测试剂盒和检测病毒的方法。

背景技术

重组配对扩增法（Recombinase Matching Amplification，RMA）是一种基于重组配对的等温扩增技术。其扩增原理是：重组酶与引物结合形成复合物后，在“辅酶”配合下，寻找配对的DNA同源序列，紧密结合发生重组，在单链DNA结合蛋白的作用下，模板DNA开始解链，引物与模板DNA配对，在Bsu DNA聚合酶的作用下复制延伸，对目的片段进行指数级扩增。核酸等温扩增的全过程均在同一温度下进行，使它们对仪器的要求大大简化，可通过加热模块、水浴槽等简单设备完成反应。RMA的最适反应温度在37℃～42℃之间，无需变性，在常温下20分钟即可完成扩增反应，可以真正实现便携式的快速核酸检测。

目前，核酸检测主要是针对一种病毒进行检测，一类试剂盒只能单一检测一种病毒；对于需要检测多种病毒的情况下，需要多个试剂盒，检测效率较低。

发明内容

本申请实施例的目的在于提供一种核酸组合及其应用、病毒检测试剂盒和检测病毒的方法。其旨在通过一个试剂盒检测乙型流感病毒、甲型流感病毒、SARS-CoV-2病毒。

本申请第一方面提供一种核酸组合，核酸组合包括以下引物对及其对应的探针：

第一引物对如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；第一探针的核酸序列如SEQ IDNO：3所示。

第二引物对如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示，第二探针的核酸序列如SEQ IDNO：6所示。

第三引物对如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示，第三探针的核酸序列如SEQ IDNO：9所示。

第一探针、第二探针以及第三探针的5’端均修饰生物素、3’端均修饰阻挡子。

第一引物对的后引物的5’端修饰第一分子标记，第二引物对的后引物的5’端修饰第二分子标记，第三引物对的后引物的5’端修饰第三分子标记。

其中，第一分子标记、第二分子标记和第三分子标记均不相同。

本申请第二方面提供一种基于重组配对扩增法的病毒检测试剂盒，包括检测试纸和上述第一方面提供的核酸组合；检测试纸设置有第一分子的抗体、第二分子的抗体以及第三分子的抗体。

本申请第三方面提供一种基于重组配对扩增法的检测病毒的方法，检测病毒的方法为非疾病的诊断方法。

检测病毒的方法包括：将待测模板、缓冲体系、重组酶体系、启动反应剂以及上述第一方面提供的核酸组合混合后进行重组配对扩增反应得到反应产物。

稀释反应产物，然后将被稀释的反应产物滴加在检测试纸条上，然后判断结果；其中，检测试纸设置有第一分子的抗体、第二分子的抗体以及第三分子的抗体。

本申请第四方面提供一种上述第一方面提供的核酸组合在制备检测SARS-CoV-2病毒、甲型流感病毒以及乙型流感病毒的试剂中的应用。

本申请提供的核酸组合及应用、基于重组配对扩增法的病毒检测试剂盒和检测病毒的方法至少具有以下优点：