[发明专利]核酸组合及其应用、病毒检测试剂盒和检测病毒的方法

权利要求书

1.一种核酸组合，其特征在于，所述核酸组合包括以下引物对及其对应的探针：

第一引物对如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；第一探针的核酸序列如SEQ ID NO：3所示；

第二引物对如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示，第二探针的核酸序列如SEQ ID NO：6所示；

第三引物对如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示，第三探针的核酸序列如SEQ ID NO：9所示；

所述第一探针、所述第二探针以及所述第三探针的5’端均修饰生物素、3’端均修饰阻挡子；

所述第一引物对的后引物的5’端修饰第一分子标记，所述第二引物对的后引物的5’端修饰第二分子标记，所述第三引物对的后引物的5’端修饰第三分子标记；

其中，所述第一分子标记、所述第二分子标记和所述第三分子标记各不相同。

2.根据权利要求1所述的核酸组合，其特征在于，所述第一分子标记、所述第二分子标记以及所述第三分子标记分别选自荧光素、花青素、德克萨斯红和地高辛中的任一个。

3.根据权利要求2所述的核酸组合，其特征在于，所述第一分子标记为羧基荧光素；

所述第二分子标记为德克萨斯红；

所述第三分子标记为地高辛。

4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸组合，其特征在于，所述第一引物对的前引物的5’端修饰生物素；

所述第二引物对的前引物的5’端修饰生物素；

所述第三引物对的前引物的5’端修饰生物素。

5.一种基于重组配对扩增法的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述病毒检测试剂盒包括检测试纸和权利要求1-4任一项所述的核酸组合；

所述检测试纸设置有所述第一分子的抗体、所述第二分子的抗体以及所述第三分子的抗体。

6.根据权利要求5所述的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述病毒检测试剂盒还包括反应体系，所述反应体系包括缓冲体系以及重组酶体系；

所述缓冲体系包括生物缓冲剂、钾盐、DTT、高能磷酸化合物、dNTPs、聚乙二醇、磷酸肌酸以及肌酸激酶；所述重组酶体系包括UvsX重组酶、UvsY辅助蛋白、gp32单链结合蛋白以及Bsu聚合酶；

所述生物缓冲剂、所述钾盐、所述DTT、所述高能磷酸化合物、所述dNTPs、所述磷酸肌酸以及所述肌酸激酶在所述反应体系中的终浓度分别为5-200mM、10-500mM、0.1-50mM、1-50mM、25-500μM、0.5-100mM、5-300ng/μL；所述聚乙二醇在所述反应体系中的终体积浓度为0.5-15%；

所述UvsX重组酶、所述UvsY辅助蛋白、所述gp32单链结合蛋白以及所述Bsu聚合酶在所述反应体系中的终浓度均各自独立地为10-1000ng/μL。

7.一种基于重组配对扩增法的检测病毒的方法，其特征在于，所述检测病毒的方法为非疾病的诊断方法，所述检测病毒的方法包括：

将待测模板、缓冲体系、重组酶体系、启动反应剂以及权利要求1-4任一项所述的核酸组合混合后进行重组配对扩增反应得到反应产物；

稀释所述反应产物，然后将被稀释的所述反应产物滴加在检测试纸条上，然后判断结果；

其中，所述检测试纸设置有所述第一分子的抗体、所述第二分子的抗体以及所述第三分子的抗体。

8.根据权利要求7所述的检测病毒的方法，其特征在于，所述重组配对扩增反应的反应温度为37-45℃，反应时间为8-25min；

和/或，所述重组配对扩增反应的步骤包括：先将所述待测模板、所述缓冲体系、所述重组酶体系以及所述核酸组合混合后，再加入所述启动反应剂，进行重组配对扩增反应。

9.权利要求1-4任一项所述的核酸组合在制备检测SARS-CoV-2病毒、甲型流感病毒以及乙型流感病毒的试剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测SARS-CoV-2病毒、甲型流感病毒以及乙型流感病毒的试剂采用重组配对扩增的方法扩增核酸。