[发明专利]一种引物组合及其用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用

权利要求书

1. 一种引物组合，由外引物、内引物和环引物组合而成，其特征在于，它是基于gyrB基因的引物组合，所述外引物、内引物和环引物及其序列分别为：

外引物FOP：5′-GGCTATGTCTACAT-3′、

外引物BOP：5′-GCGATACCCGCA-3′、

内引物FIP：5′-GCAACTGGCCTAGAATGTTACGCCAAGGCAAAATGACG-3′、

内引物BIP：5′-CGTTACAAAGGGCTTCCGGATCCATGGTCGTCT-3′、

环引物FLP：5′-TTCTTCATCGGAATCGA-3′和

环引物BLP：5′-GAAATGGACGCCAAC-3′。

2.权利要求1所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用。

3.根据权利要求2所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用，其特征在于，它是以所述一种引物组合为qLAMP反应体系的引物，以PMA处理后待测乳制品的DNA作为qLAMP反应体系的模板，进行qLAMP反应，实时监测qLAMP反应体系的的荧光强度，反应结果呈阳性则待测乳制品中含副干酪乳杆菌，反应结果呈阴性则待测乳制品中不含副干酪乳杆菌。

4.根据权利要求3所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用，其特征在于，所述待测乳制品的DNA，通过以下步骤进行提取：

S11.向待测乳制品中加水进行溶解/稀释，于MRS培养基中培养后, 用无菌生理盐水冲洗细胞，得待测液α；

S12.将PMA溶液加入到菌悬液α中，得反应液β，反应液β避光反应后，在卤素光源下进行孵育，离心,弃上清,取菌体细胞进行清洗、悬浮，得菌悬液γ；

S13.菌悬液γ进行沸水浴处理，冷却，离心，取上清液，即得所述待测乳制品的DNA。

5.根据权利要求4所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用，其特征在于，步骤S11中，所述培养，温度为35-40℃，时间为20-30h。

6.根据权利要求4所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用，其特征在于所述步骤S12中：

所述PMA溶液，浓度为10mg/mL;

所述反应液β中副干酪乳杆菌浓度为5μg/mL；

所述避光反应,时间为3-8min；

所述卤素光源，功率为400-600w；

所述孵育，时间为8-15min；

所述离心，转速为10000-15000rpm，时间为1-3min。

7.根据权利要求4所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用，其特征在于所述步骤S13中：

所述沸水浴处理，时间为8-15min；

所述冷却后温度为20-30℃；

所述离心，转速为10000-15000rpm，时间为8-15min。

8.根据权利要求2-7中任一项所述的一种引物组合用于检测乳制品中副干酪乳杆菌的应用，其特征在于，所述qLAMP反应体系，以体积份数计，包括3-4份内引物FIP、3-4份内引物BIP、0.3-0.8份外引物FOP、0.3-0.8份外引物BOP、3-5份环引物FLP、3-5份环引物BLP，及0.8-1.2份模板，还包括2-3份10×反应缓冲液，0.8-1.2份硫酸镁溶液、1.1-1.8份dNTPs、0.2-0.5份甜菜碱、0.8-1.2份聚合酶、0.2-0.5份10000×SYBRgreenI和1-1.5份无菌蒸馏水。