[发明专利]一种二裂酵母发酵组合物及其制备方法

说明书

本发明涉及一种二裂酵母发酵组合物及其制备方法，所述发酵组合物由二裂酵母溶胞物母液和滤液按照一定比例混合而成。所述制备方法包括S1：厌氧培养活化，制成一级发酵种子液；S2：将一级发酵种子液接种至微氧发酵固体培养基中，得到二级发酵种子液；S3：二级种子液转接至发酵培养基内进行微氧发酵；S4：通过离心发酵液分离二裂酵母滤液及双歧杆菌菌体；S5：将双歧杆菌菌体重悬、破碎后，得到二裂酵母溶胞物母液；S6：将二裂酵母滤液及溶胞物母液按比例混合，得到二裂酵母发酵产物。通过使用长双歧杆菌多级无氧/微氧发酵，限制了微生物污染影响的问题，并进一步提高了安全性；通过在逐级发酵过程中控制含氧量等指标使最终产物的各项理化指标更加稳定；通过复合蛋白酶消化工艺，有效的提高了同规模双歧杆菌发酵下的多肽含量。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种二裂酵母发酵组合物的制备方法。

背景技术

二裂酵母发酵产物（Bifida Ferment Lysate），是经双歧杆菌发酵后处理得到的生理溶胞产物，主要成分为细胞代谢产物、胞质片段、多糖、蛋白质与多肽等。大量的体外实验证实了二裂酵母发酵产物中的多种氨基酸、蛋白质和各类分子介质具有调节平衡肌肤、调节免疫机能的功效，也同样是人类皮肤细胞的重要组成成分及营养分子；多糖、维生素等分子及双歧杆菌胞质代谢物具有一定的保释、抗氧化、抗衰老作用，并能够防止紫外线等外源刺激的损害，促进损伤DNA的修复，这些优势使得二裂酵母发酵产物广泛应用于护肤产品中以改善肤质，具有极大的市场前景。但目前用于食品及化妆品原料的二裂酵母发酵产物制备工艺往往存在微生物污染、理化性质不稳定、蛋白和易于皮肤吸收的小分子多肽含量较少等问题，常需要额外补充非双歧杆菌发酵的组分，影响发酵产出的同时提高了生产成本。

本发明公开的一种基于长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）多级厌氧/微氧发酵制备二裂酵母发酵产物的工艺，通过多级扩增目的菌种、调控发酵环境因子、应用多种蛋白酶消化产物中的大分子蛋白组分，有效改进了二裂酵母发酵产物生产工艺的不足，提升产品的品质。

发明内容

为了克服常规二裂酵母发酵产物制备工艺中杂菌造成的微生物污染、双歧杆菌微氧发酵水平限制引起的产品理化性质不稳定、蛋白和易于皮肤吸收的小分子多肽含量较少等问题。本发明的第一发明目的是提供一种二裂酵母发酵组合物，该组合物是由二裂酵母溶胞物和滤液按照一定比例混合而成，溶胞物和滤液全部为发酵过程中的产物。

本发明的第二目的是提供一种长双歧杆菌的发酵生产工艺，包括如下步骤：

S1，制备一级种子液：将长双歧杆菌接种于无菌培养试管中，厌氧培养活化，制成一级发酵种子液；

S2，制备二级种子液：将一级发酵种子液接种至微氧发酵固体培养基中，扩增培养后提取菌群并重悬为二级发酵种子液；

S3，发酵：二级种子液转接至发酵培养基内进行微氧发酵，调整温度为及含氧量；

S4，菌液分离：通过离心发酵液分离二裂酵母滤液及双歧杆菌菌体；

S5，制备二裂酵母母液：将长双歧杆菌菌体重悬、破碎后，按比例使用蛋白酶温水浴消化后离心抽滤，得到二裂酵母溶胞物母液；

S6，制备二裂酵母发酵液：将二裂酵母滤液及溶胞物母液按照一定比例混合，同时加入防腐剂及保护剂，最终得到二裂酵母发酵产物溶胞物和滤液组合物。

进一步的，所述发酵用固体/液体培养基为MRS培养基。

通过所述技术方案的步骤S1和S2，长双歧杆菌发酵的一级种子液及二级种子液制备需控制含氧量在0~5%，二级种子液需使用200mL~500mL的固体MRS培养基进行筛选培养，二级种子液转接后微氧发酵应控制含氧量在5%~15%。

进一步的，长双歧杆菌一级种子液厌氧发酵制备的条件为：pH范围6.0~6.5，培养温度25~40℃，摇床速度180rpm，活化时间10~30小时。