[发明专利]一种二裂酵母发酵组合物及其制备方法

权利要求书

1.一种二裂酵母发酵组合物，其特征在于：所述组合物由二裂酵母溶胞物母液和滤液按照一定比例混合而成。

2.根据权利要求1所述的一种二裂酵母发酵组合物，其特征在于：二裂酵母溶胞物母液与滤液按照体积配比为1:10~1:1进行混合。

3.一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：选用长双歧杆菌进行多级微氧发酵，包括如下步骤，S1：选用长双歧杆菌接种于无菌培养试管中，无氧培养活化，制成一级发酵种子液；S2：将一级发酵种子液接种至微氧发酵固体培养基中，扩增培养后提取菌群并重悬为二级发酵种子液；S3：二级种子液转接至发酵培养基内进行微氧发酵，调整温度及含氧量；S4：通过离心发酵液分离二裂酵母滤液及长双歧杆菌菌体；S5：将长双歧杆菌菌体重悬、破碎后，按比例使用蛋白酶温水浴消化后离心、抽滤除杂得到二裂酵母溶胞物母液；S6：将二裂酵母滤液抽滤后与溶胞物母液合并，加入防腐剂及保护剂，得到最终的二裂酵母发酵产物。

4.根据权利要求3所述的一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：所述培养基为MRS固/液体培养基。

5.根据权利要求3所述的一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶中的一种或几种。

6.根据权利要求5所述的一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：所述蛋白酶添加比例为：3wU木瓜蛋白酶0.01~0.04%、3wU菠萝蛋白酶0.01~0.04%、3wUβ-葡聚糖酶0.01~0.04%、3wU甘露聚糖酶0.01~0.04%、3wU胰蛋白酶0.005~0.02%，酶消化温度为37~55℃，消化时间为16~24小时。

7.根据权利要求3所述的一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：

所述长双歧杆菌一级种子液厌氧发酵制备的条件：pH范围6.0~6.5，培养温度25~40℃，摇床速度180rpm，活化时间10~30小时，含氧量0~5%；

所述长双歧杆菌二级种子液微氧发酵制备的条件为：固体培养基内接种量为体积百分比的1%~2%，pH范围6.0~6.5，培养温度25~40℃，扩增时间5~7天，含氧量0~5%，重悬比例1:100~1:50；

所述长双歧杆菌二级种子液微氧发酵扩增的条件为接种量体积百分比2~5%，初始600nm吸光度0.1~0.2，温度25~40℃，pH范围6.0～6.5，培养时间48～72小时，含氧量5%~15%。

8.根据权利要求3所述的一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：离心分离转速为8000~12000rpm，压力破碎时间为30~60分钟，滤液及溶胞物使用0.22μm滤膜抽滤除杂，并控制环境温度在4~25℃之间。

9.根据权利要求3所述的一种二裂酵母发酵组合物的制备方法，其特征在于：所述二裂酵母发酵产物最终产品需添加防腐剂及保护剂，防腐剂为苯甲酸钠，添加量为最终发酵产物质量的0.2%~1%；保护剂为海藻糖，添加量为最终发酵产物质量的0.5%~5%。