[发明专利]一种新型冠状病毒组合物及其试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒组合物，为基于Taqman‑LNA荧光PCR检测新冠病毒用组合物，所述组合物包括有：如SEQ ID NO:1‑2所示的第一引物对；如SEQIDNO.3所示的第一探针；如SEQIDNO.4‑5所示的第二引物对；如SEQIDNO.6所示的第二探针。本法还公开了试剂盒和检测方法。本发明通过在TaqMan探针的基础上使用LNA修饰的碱基，减少了探针分子长度，增加了探针分子的亲和力，提高了检测灵敏度、特异性，且同时检测ORF1ab和N基因时大大提高了其准确性，改善了SARS‑CoV‑2的核酸阳性检出率低的问题，对于疫情的诊疗有积极的意义。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，具体涉及一种新型冠状病毒组合物及其试剂盒及其检测方法。

背景技术

新型冠状病毒(2019-nCoV，SARS-CoV-2)，为新发现的第7种可以感染人类的冠状病毒，该病毒在分类学上属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)中的β类型冠状病毒，具有囊膜和刺突细胞学特征基因组为线性单股正链的RNA((+)ssRNA)病毒。SARS-CoV-2从2019年末发现至今，在全世界爆发，在全球累积造成超过1900万人感染，累积造成超过70多万人死亡，为国际公共卫生事件。

在目前《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》中，SARS-CoV-2的核酸的检出仍是唯一确诊依据，在诊疗方案中了明确核酸检测的方式有两种：(1)实时荧光定量PCR(qPCR)检测核酸阳性；(2)病毒基因测序，测序结果与已知SARS-CoV-2高度同源。病毒基因测序法虽然结果更为准确，但是其检测周期长、成本高、对实验室要求高，很难大规模运用临床。

由于基因测序法存在上述限制，所以临床大规模采取qPCR方法来进行检测。相对基因测序而言，qPCR方法具有快速、成本低等优势。

据报道，自从qPCR检测试剂大面积用于临床诊断以来，初期核酸阳性检出率只有30-50％；此外，更有医疗机构报道，个别病例在不同时间3次以上结果由阴性转为阳性；且在国内外网上爆出多个报道，WHO提供的引物探针存在特异性问题，美国CDC提供的检测试剂存在检测效果差的问题。以上这些情况的发生为临床诊断和疾病控制带来极大困扰。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒组合物及其试剂盒及其检测方法。

为了实现本发明的目的，所采用的技术方案是：

一种新型冠状病毒组合物，为基于Taqman-LNA荧光PCR检测新冠病毒用组合物，其中，所述组合物包括有：

如SEQ ID NO:1-2所示的第一引物对，所述第一引物对用于特异性地扩增SARS-CoV-2的ORF1ab基因；

如SEQIDNO.3所示的第一探针，所述第一探针为用于检测所述第一引物对的扩增产物,所述第一探针的第4、8、12、15、17个碱基进行LNA修饰；

如SEQIDNO.4-5所示的第二引物对，所述第二引物对用于特异性地扩增N基因；

如SEQIDNO.6所示的第二探针，所述第二探针用于检测所述第二引物对的扩增产物，所述第二探针的第3、6、9、12、15个碱基进行LNA修饰。

一种基于Taqman-LNA荧光PCR检测新冠病毒用试剂盒，其中，所述试剂盒包括有所述组合物。

在本发明的一个优选实施例中，所述试剂盒中还包括PCR反应液或RT-酶混合液或阳性质控品中的任意一种或多种。

在本发明的一个优选实施例中，所述PCR反应液包括MgCl2或dUTP反应液中的任意一种或多种。

在本发明的一个优选实施例中，所述RT-酶混合液包括RT-酶或Taq酶或UNG酶中的任意一种或多种。