[发明专利]检测慢病毒质量指标组合的方法及其应用

权利要求书

1.一种检测慢病毒质量指标组合的方法，包括步骤：

(一)针对慢病毒质量指标组合中各质量指标的特异性引物对组合的制备；

(二)标准曲线的制作；

(三)样品的测定；

(四)数据分析，计算各指标的拷贝数；

其特征在于，

所述慢病毒质量指标组合包括病毒RNA总拷贝数、T细胞总拷贝数、有复制能力的慢病毒拷贝数和宿主细胞基因组DNA残留；

所述步骤(二)标准曲线的制作包括步骤

1.准备针对病毒质量指标组中各指标的标准品原料；

2.根据以下公式，计算出标准品原料的初始拷贝数/μL：

3.通过梯度稀释制备组合中每一标准品的一系列不同拷贝数的稀释标准品，形成不同标准品原料的系列稀释标准品组合

4.各质量指标的标准曲线的制作：用特异性引物测定标准品的qPCR荧光数值，分别用各质量指标拷贝数的对数值为横坐标，用测定的所述标准品组合中各稀释度的标准品的qPCR荧光数值作为纵坐标制作标准曲线；

所述标准品原料组合包括检测病毒RNA总拷贝数的标准品、检测T细胞总拷贝数的标准品、检测有复制能力的慢病毒拷贝数的标准品和检测宿主细基因组DNA残留的标准品；

所述检测病毒RNA总拷贝数的标准品来自载体质粒，所述检测有复制能力的慢病毒拷贝数的标准品来自包膜质粒,所述检测宿主细胞基因组DNA残留的标准品是SV40 Large T-pUC57质粒，所述检测T细胞总拷贝数的标准品包括携带部分ALB基因组序列的重组质粒ALBgDNA-pUC57质粒和ALB mRNA-pUC57,其中,所述质粒pUC57是携带人基因组中SV40大T抗原(SV40 large T antigen)的序列的重组pUC57载体；

所述样品的测定采用一步法实时荧光定量qPCR检测慢病毒质量的方法，包括步骤:

(1)模板DNA或RNA的提取；(2)测定和记录待测样品和一系列浓度梯度的标准品的qPCR荧光数值；(3)测定溶解曲线; (4)数值分析与计算。