本发明属于生物技术领域,特别涉及慢病毒载体的滴度检测方法。公开了一种采用序列特异性引物和荧光染料进行实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR和RT‑qPCR)的质量指标检测方法、所用引物、标准品。该测定方法高效,准确,操作容易,样品用量小,重复性佳,解决了真核生物基因工程和基因治疗领域的载体定量不准确的限制问题。具有检测时间短,操作步骤简便,而且不需要扩增后的分析过程,与Taqman探针方法比较,SYBR Green I不需要设计合成荧光探针,简化了设计,且降低了成本,结合溶解曲线分析,可判断反应的特异性。