[发明专利]生产含有酪蛋白巨肽的组合物的方法

说明书

本发明涉及一种在高产率并具有非常低含量苯丙氨酸(Phe)的情况下生产含酪蛋白巨肽(CMP)的组合物的方法。更确切地说，该方法涉及使一种乳清来源的进料经受超滤和随后阳离子交换的组合。

发明领域

本发明涉及一种在高产率并具有非常低水平苯丙氨酸(Phe)的情况下生产含酪蛋白巨肽(CMP)的组合物的方法。更确切地说，该方法涉及使一种乳清来源的进料经受超滤和随后阳离子交换色谱法的组合。

背景

CMP由于半乳糖胺、半乳糖和o-唾液酸的各种糖基化模式和不同糖基化程度而是一种高度异质的肽。出于这个原因，CMP不具有单电荷，但实际上存在一种电荷分布。

CMP是一种不含有Phe的独特的、天然存在的肽。CMP例如是在奶酪制备过程中当凝乳酶在105至106个氨基酸残基之间特异性裂解κ-酪蛋白时形成的。副κ-酪蛋白(残基1至105)凝结从而形成奶酪凝乳，而CMP(残基106至169)余留在乳清中。CMP是在甜乳清中继β-乳球蛋白(BLG)和α-乳白蛋白(ALA)之后的第3种最丰富的蛋白质。

Phe的缺乏使得CMP成为罹患苯丙酮尿症(PKU)的人们的一种感兴趣的蛋白质来源。

在现有技术中已经描述了从乳清中分离CMP的若干次尝试。

US 5,278,288披露了一种用于生产CMP的方法，其中在低pH下使一种奶酪乳清经受阳离子交换并且随后使未结合的级分经受超滤，因而单体CMP和其他杂质被分离在超滤渗透液中。最后将所得渗透液的pH调节到pH 7，这导致形成CMP低聚物，并且通过超滤对这些CMP低聚物进行浓缩。在US 5,278,288中未提到所得到的组合物的Phe含量。

WO 99/18808披露了另一种回收CMP的方法。更确切地说，WO 99/18808描述了一种使奶酪乳清经受依次进行的具有相反极性的两个离子交换步骤的方法。在WO 99/18808的背景部分中讨论了以上提到的US5,278,288，并且在此提到US 5,278,288的该方法的CMP回收率是不经济地较低的。

WO 98/14071披露了一种生产CMP组合物的方法。这个方法涉及使奶酪乳清经受一个阴离子交换过程并且随后经受一个第二离子交换过程，该第二离子交换过程可以是一个阳离子或阴离子交换过程。据称所得到的CMP组合物相对于在通过盐酸进行蛋白质水解之后所测定的氨基酸总量具有至多0.5％(w/w)的Phe含量。

发明概述

与本领域中的一般理解相反(参见例如WO 99/18808，第2页)，诸位发明人已经发现超滤和阳离子交换的组合可以产生一种从乳清来源的进料中分离CMP的经济方法。然而，这要求在阳离子交换步骤之前进行超滤步骤，并且与披露了一个阳离子交换步骤然后是一个超滤步骤的US5,278,288中所描述的不一样。

通过使用本发明，可以在非常高产率并具有非常低的Phe含量这两者的情况下经济地分离CMP。

因此，本发明的一个方面涉及一种生产具有低含量苯丙氨酸的含酪蛋白巨肽的组合物的方法，该方法包括以下步骤

a)提供包含酪蛋白巨肽(CMP)和至少一种额外蛋白质的一种乳清来源的进料，所述乳清来源的进料具有至多4的pH，

b)使用允许单体CMP通过的一个超滤过滤器来使所述乳清来源的进料经受超滤(UF)，从而提供一种UF渗透液和UF渗余液，针对CMP富集该UF渗透液，

c)使来源于所述UF渗透液的一种第一组合物与一种阳离子交换材料接触，并且

d)收集未结合该阳离子交换材料的该第一组合物的级分，从而获得该含CMP的组合物。