[发明专利]一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法，将表达包涵体蛋白的菌株离心收集，洗涤后，用BufferA进行重悬，接着用超声波或液压破碎仪破碎至清亮，经过适当离心后获得包涵体蛋白，用适当浓度的SKL溶解后，再用氧化型谷胱甘肽和还原性谷胱甘肽溶液进行处理，最终纯化复性的蛋白。本发明方法操作简单，提高了包涵体复性效率，简化了复性步骤，节约了时间并减少了操作人员的工作量，所得蛋白质纯度较高并且具有生物学活性。

主权项

一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，将表达菌体离心收集，离心菌体经PBS洗涤后用Buffer A重悬，之后用超声波或液压破碎仪破碎至清亮；其中离心温度为4‑10℃、离心速度为8000‑12000r/min、离心时间为每200ml菌体离心1min；第二步，在4‑10℃、8000‑12000r/min下离心第一步中的清亮液，弃去上清液，离心时间﹥10min，再用PBS洗涤沉淀；第三步，向沉淀中加入Buffer A、0.5mol/L的DTT和20%的SKL贮存液，使沉淀缓慢溶解，溶解条件为25℃下静置30‑120min或4℃下溶解时间＞8h ，然后4‑10℃、8000‑12000r/min离心，取上清液，离心时间﹥10min；第四步，向第三步的上清液中加入20%的PEG4000至终浓度为0.2%，加入50mmol/L的氧化型谷胱甘肽至终浓度为1mmol/L,加入100mmol/L的还原型谷胱甘肽至终浓度为2mmol/L，25℃下静置30‑120min或4℃下反应时间＞8h，接着用TE buffer透析后即得产品；其中，Buffer A的用量为菌体体积的1/10,DTT用量为菌体体积的1/10000，SKL用量为菌体体积的3/2000，所述百分比为重量百分比；所述Buffer A的组成为50 mmol/L的Tris‑base、0.5mmol/L的EDTA、50mmol/L的NaCl和体积分数为5%的甘油。