本发明公开了一株表达山羊α干扰素的重组毕赤酵母及其构建方法和应用。本发明首先公开了根据毕赤酵母的密码子偏嗜性进行优化的山羊α干扰素基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。本发明进一步公开了一株表达优化的山羊α干扰素基因的重组毕赤酵母，其微生物保藏编号为：CGMCC No.9088。本发明所构建的重组毕赤酵母能够稳定的表达山羊α干扰素，不仅表达量大，而且抗病毒活性高。本发明重组毕赤酵母表达的山羊α干扰素在牛源细胞和羊源细胞上均具有高度抗病毒活性，能够作为抗病毒感染的药物或疫苗佐剂使用，用于预防或治疗牛和羊等反刍动物病毒性传染病。
本发明提供一种犬干扰素‑α6α7重组蛋白及其制备方法与应用。所述犬干扰素‑α6α7重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，可按如下方法制备：对犬干扰素‑α6基因、犬干扰素‑α7基因分别进行密码子优化，将优化后的基因序列进行拼接，克隆至pPICZαA中构建重组表达质粒，转化毕赤酵母，制备重组菌，然后进行发酵、诱导表达、纯化，获得犬干扰素‑α6α7重组蛋白。其可作为广谱抗病毒制剂，对犬瘟热、犬细小病毒病、犬副流感病毒病、犬传染性肝炎病毒感染的预防及治疗效果显著，为实现重组犬干扰素‑α6、α7串联重组蛋白工艺化生产和进一步广谱性预防和治疗犬的病毒性疫病提供有效的技术手段。
本发明公开了一株表达山羊α干扰素的重组腺病毒及其构建方法和应用。本发明首先提供了优化的山羊α干扰素基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO1所示；本发明还提供一株稳定表达山羊α干扰素的重组腺病毒，其微生物保藏编号为CGMCC No.8757。本发明进一步提供一种构建所述重组腺病毒的方法。本发明所构建的重组腺病毒能够稳定表达山羊α干扰素，病毒滴度高，抗病毒活性强；本发明重组腺病毒及其表达的山羊α干扰素在猪源细胞IBRS2、牛源细胞MDBK和原代羊皮肤细胞均具有抗病毒活性，能用于预防或治疗反刍动物病毒性传染病。
本发明公开了一种经修饰改造的犬α1-干扰素基因及犬α1-干扰素的制备方法。修饰改造后的犬α1-干扰素基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码氨基酸的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明具体涉及犬α1-干扰素密码子对酵母密码子偏嗜性的匹配、改造，高效生产犬α1-干扰素的培养方法、避免污染的措施、确定加甲醇的量以及时间、对蛋白表达时间的控制即蛋白收获时间、无菌检验、蛋白含量以及活性测定、扩大培养条件等操作方法的优化控制，本发明方法简单易行，成本较低，实现了犬α1-干扰素在毕赤酵母中稳定高效的表达，表达的犬α1-干扰素对犬病毒性传染病有显著的疗效，可以增强狂犬疫苗的免疫效果。
本发明涉及“人工合成鸡干扰素基因序列及其重组工程菌的构建与应用”，属于生物技术领域。本发明对采用人工合成的序列如SEQ ID NO1或SEQ ID NO2，以酿酒酵母作为宿主菌株，得到了重组工程菌，经PCR、酶切、测序、SDS-PAGE、ELISA和CPE检测结果表明：ChIFN-α和ChIFN-γ基因均能在宿主菌株中胞内表达，并表达蛋白具有明显的生物学活性。实验表明，本发明将酿酒酵母作为生物反应器生产鸡干扰素药用蛋白，不仅可以极大降低干扰素生产成本，而且可以在提供优质蛋白的同时达到改善机体免疫功能的目的，为利用酵母添加剂防治动物疫病奠定基础。
