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[发明专利]融合蛋白的应用和细胞融合的方法-CN202310116463.3在审
发明人：吴毅;付宗恒;赵广荣;李家苇 -专利权人：天津大学
申请日： 2023-02-15 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及融合蛋白的应用和细胞融合的方法。本发明提供了DENV2E蛋白和VSV G蛋白在酿酒酵母原生质体与哺乳动物细胞的融合中的应用，所述哺乳动物细胞包括HEK293T。与PEG介导的融合相比，本发明制备的FUS1与HEK293T融合效率分别提高了5.25倍、5.83倍；本发明制备的FUS2与HEK293T的融合效率分别提高了1.31倍、2.78倍。
融合蛋白应用细胞融合方法

[发明专利]一种类囊体膜与NK细胞的融合细胞及其构建方法-CN202110311164.6有效
发明人：谢海燕;雷垚;武广昊;刘厚莉 -专利权人：北京理工大学
申请日： 2021-03-24 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种类囊体膜与NK细胞的融合细胞及其构建方法，涉及生物学技术领域。类囊体膜与NK细胞的融合细胞的构建方法包括将类囊体纳米囊泡与NK细胞进行融合；其中每4×106至6×106个NK细胞加入粒径为200‑500nm，浓度为5‑80μg的类囊体纳米囊泡，通过聚乙二醇对细胞进行诱导融合。本发明首次将NK细胞与类囊体膜进行融合形成一个工程化的融合细胞，该融合细胞同时具备类囊体膜的过氧化氢酶活性，以及NK细胞的肿瘤靶向性以及杀伤性。
种类囊体膜 nk 细胞融合及其构建方法

[发明专利]一种糙皮侧耳和酿酒酵母原生质体融合的方法-CN201510151684.X有效
发明人：范寰;刘西周;郭成金;燕晓翠;涂苑楠;孟繁瑞;马蕊;马恒德 -专利权人：天津市畜牧兽医研究所
申请日： 2015-04-02 - 公布日： 2020-05-05 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种糙皮侧耳和酿酒酵母原生质体的融合方法，是将糙皮侧耳和酿酒酵母制备出的原生质体，然后对糙皮侧耳原生质体进行60℃水浴处理10 min热灭活，酿酒酵母原生质体在距离15W紫外灯20cm处照射230s进行紫外灭活，采用化学融合和电融合。最后从17个融合子中，通过生长速度和木质素降解率的比较，获得了6株生产速度比亲本糙皮侧耳提高1.45‑16.33%左右，木质素降解率提高1.76‑4.16倍的融合子。本发明可以将糙皮侧耳和酿酒酵母原生质体融合。该技术可重复性较强，遗传稳定性好且方法简便属于非转基因育种方式，没有创造新基因，不存在基因污染问题。
一种侧耳酿酒酵母原生质体融合方法

[发明专利]一种造血祖细胞SHIP-1基因敲除小鼠模型及其构建方法-CN201910072113.5在审
发明人：叶旭军;高卫;罗峻 -专利权人：武汉大学中南医院
申请日： 2019-01-25 - 公布日： 2019-06-07 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明属于科学、医学或数学用的模型，公开了一种造血祖细胞SHIP‑1基因敲除小鼠模型及其构建方法；选小鼠；SHIP‑1^f/f小鼠的构建和鉴定；Tek‑Cre^+/‑SHIP‑1^+/‑小鼠的构建和鉴定；Tek‑Cre^+/‑SHIP‑1^‑/‑小鼠的构建。本发明首次从基因水平构建一种新型过敏性哮喘动物模型为过敏性哮喘提供实验基础。首次验证SHIP‑1对ILC2的调节作用分析SHIP‑1和过敏性哮喘的关系。为过敏性哮喘的发病机制提供一个新的理论，也为靶向于SHIP‑1的过敏性哮喘治疗药物研发提供新的靶点和理论依据。
构建过敏性哮喘小鼠基因敲除小鼠造血祖细胞动物模型发病机制基因水平实验基础治疗药物作用分析靶点靶向研发数学验证医学

[发明专利]HBV-DNA检测单克隆质控参考株的制备-CN201810703501.4在审
发明人：翁炳焕;李兰娟;苏岚;杨含金;杜雨轩;王薇 -专利权人：翁炳焕
申请日： 2018-06-15 - 公布日： 2018-12-18 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：一种用于医学领域的HBV‑DNA检测单克隆质控参考株的制备，其特征在于，取经手术切除的小块HBVDNA阳性肝肿瘤组织，剪成粥样，以0.25％胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化已剪成粥样的肝脏组织细胞30分钟，再进行融合前培养，并在融合前培养、肝细胞与sp2/0融合及融合细胞克隆筛选中均使用SV40LT培养基，从而提高了细胞融合率，制成能通过培养融合细胞而扩增HBV‑DNA的质控参考株。
质控融合细胞粥样参考制备融合胰蛋白酶肝脏组织克隆筛选手术切除细胞融合医学领域培养基肝细胞肝肿瘤扩增小块细胞消化检测

[发明专利]一种淋系白血病融合基因检测质控参考株的制备-CN201810703504.8在审
发明人：翁炳焕;苏岚;袁武锋;杜雨轩;王薇;应俊 -专利权人：翁炳焕
申请日： 2018-06-15 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：一种用于医学领域的淋系白血病融合基因检测质控参考株的制备，其特征在于，引用了B淋巴细胞刺激因子，增加了以B淋巴细胞刺激因子为诱导剂的骨髓细胞融合前培养步骤，以促使淋巴细胞系各期细胞的定向分化、增量和成熟，从而增加淋巴细胞系的融合率，而且B淋巴细胞刺激因子参与了骨髓细胞融合、杂交细胞筛选及其克隆化传代扩增的全程诱导，有利于各期淋巴细胞的分化，由此制备出能在体外无限扩增的由人骨髓细胞与鼠骨髓瘤细胞融合而制成的淋系白血病融合基因检测质控参考株，经融合基因的验证，应用于淋巴细胞白血病融合基因检测的质量控制。
白血病融合基因质控制备融合淋巴细胞系检测骨髓细胞融合基因扩增参考淋巴细胞淋巴细胞白血病鼠骨髓瘤细胞传代人骨髓细胞定向分化医学领域杂交细胞诱导剂质量控制体外诱导克隆验证引用分化筛选全程细胞成熟应用

[发明专利]一种猪鼠细胞单细胞融合方法-CN201810553064.2在审
发明人：刘忠华;牟彦双;郭佳;方园;厉雪纯 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2018-10-26 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：一种猪鼠细胞单细胞融合方法，属于细胞工程技术领域。本发明针对目前异种细胞融合效率低的问题，提供了一种单细胞融合方法,以小鼠胚胎干细胞与猪多能性干细胞或猪成纤维细胞作为细胞融合对象，用含质量分数为0.25％的胰酶的消化液将猪、鼠细胞消化成单细胞，经培养后，利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对，在含有质量分数为50％的聚乙二醇中培养1min，随后将细胞继续培养7天，获得猪鼠单细胞的融合细胞。本发明适用于动物育种研究或单克隆抗体的生产。
鼠细胞融合质量分数种猪小鼠胚胎干细胞多能性干细胞细胞工程技术猪成纤维细胞单克隆抗体细胞动物育种聚乙二醇融合细胞细胞凝集细胞融合异种细胞消化液构建胰酶一对一消化研究生产

[发明专利]一种耐酸耐盐兼性厌氧芽孢杆菌的制备方法-CN201510120005.2在审
发明人：刘玉婷;潘进权;何华美;刘夏婷;李淑珍;邓艳梨;陈超才 -专利权人：岭南师范学院
申请日： 2015-03-18 - 公布日： 2015-07-08 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：一种耐酸耐盐兼性厌氧芽孢杆菌的制备方法，包括原生质体的制备：乳酸杆菌原生质体制备条件为：取活化培养12h的乳酸杆菌细胞，加入浓度为3.5mg/mL的溶菌酶，在pH7.0、温度37℃的条件下酶解45min；芽孢杆菌原生质体制备条件为：取活化培养6h的芽孢杆菌细胞，加入浓度为2.0mg/mL的溶菌酶，在pH7.0、温度37℃的条件下酶解30min，分别将原生质体进行灭活，灭活后的乳酸杆菌与芽孢杆菌原生质体的融合。本发明方法操作简单，成功率高，获得的融合菌株具有耐酸耐盐兼性厌氧的特性，具有更加优越的使用性能。
一种耐酸耐盐兼性厌氧芽孢杆菌制备方法

[发明专利]人类胚胎干细胞无饲养细胞培养体系培养基及培养方法-CN200910042531.6无效
发明人：卢光琇;林戈;罗树伟 -专利权人：湖南惠霖生命科技有限公司
申请日： 2009-01-16 - 公布日： 2009-07-08 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种人类胚胎干细胞无饲养细胞无外源细胞因子培养体系培养基，由下列成分组成：DMEM/F12，1×N2，1×B27，0.1mM β-ME；本发明还提供了一种基于上述培养基的人类胚胎干细胞体系无饲养细胞的培养方法。在本发明培养条件下的干细胞体系下，只要克隆种植密度维持在高水平状态，人类胚胎干细胞就可以维持未分化状态扩增，并且不存在背景分化现象，可以大规模扩增人类胚胎干细胞，还具有培养成本低廉的特点，也为阐明人类胚胎干细胞未分化状态提供了技术平台。
人类胚胎干细胞饲养细胞培养体系培养基培养方法

[发明专利]利用转基因烟草根系及组织分泌表达枯草芽孢杆菌纤溶酶-CN200610103483.3无效
发明人：王瑞刚;李国婧;张子义;吴自荣;王水平 -专利权人：内蒙古农业大学
申请日： 2006-07-25 - 公布日： 2008-01-30 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用转基因烟草根系及组织分泌表达枯草芽孢杆菌纤溶酶的方法，它包括四个步骤：克隆枯草芽孢杆菌纤溶酶基因及其前导肽编码序列、构建植物表达载体、将表达载体导入烟草植株中表达、测定枯草芽孢杆菌纤溶酶在转基因烟草中的分泌表达。本发明所述的方法能将枯草芽孢杆菌纤溶酶分泌出植物体外，解决了利用转基因植物生产外源蛋白过程中存在的产量低、下游加工成本较高、外源蛋白在植物体内累积导致降解、转化并对植物体造成胁迫等问题。
利用转基因烟草根系组织分泌表达枯草芽孢杆菌纤溶酶

[发明专利]使用单个抗原特异性B淋巴细胞制备产生抗原特异性抗体的杂交瘤的方法以及单克隆抗体的制备方法-CN200480014764.0无效
发明人：村口笃;岸裕幸;民谷荣一;铃木正康;东保喜八郎;上野实;中里博吉 -专利权人：财团法人富山县新世纪产业机构;村口笃;岸裕幸;民谷荣一;铃木正康
申请日： 2004-03-26 - 公布日： 2006-06-28 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明提供使用单个抗原特异性B淋巴细胞制备产生抗原特异性抗体的杂交瘤的方法和单克隆抗体的制备方法。制备产生抗原特异性抗体的杂交瘤的方法包含：选择1个与某种抗原特异性反应的B淋巴细胞(抗原特异性B淋巴细胞)，对所选择的抗原特异性B淋巴细胞进行培养，使培养增殖的抗原特异性B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，制备杂交瘤。使用由该方法制备的杂交瘤制备单克隆抗体。
使用单个抗原特异性淋巴细胞制备产生抗体杂交瘤方法以及单克隆抗体

[发明专利]人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法-CN200410019057.2无效
发明人：叶丽虹;张晓东;秦宵然;朱惠芳;王洪辉 -专利权人：南开大学
申请日： 2004-04-20 - 公布日： 2005-01-12 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法，所述人肝癌转移亚克隆细胞系是用下述方法建立的：将人肝癌细胞H7402单细胞悬液接种于SCID鼠；确认转移部位为肺脏；原代培养；传代培养，当细胞传代到第三代以后，将培养液中的胎牛血清浓度降为10％，细胞生长良好，形态逐渐均一，即建立了一种来源于亲本人肝癌细胞H7402的肝癌转移亚克隆细胞系，并与亲本细胞形成配对关系，为肝癌细胞转移的研究提供新的实验材料；可用于筛选肝癌转移相关基因；可用于筛选肝癌转移相关蛋白；可用于筛选抗肿瘤转移药物；可用于肿瘤转移分子机理的研究；可用于进行肿瘤转移DNA疫苗的研究。
肝癌转移克隆细胞系及其建立方法

[发明专利]适合人治疗的分化细胞-CN01819647.0无效
发明人： J·D·戈尔德;J·S·莱布罗斯激 -专利权人：杰龙公司
申请日： 2001-11-26 - 公布日： 2004-02-25 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：本发明提供了一中从干细胞群产生分化细胞的系统，用于任何需要相对均一细胞群的地方。这些细胞含有在转录控制元件(如TERT启动子)控制下的效应基因，使该基因在细胞群中相对未分化的细胞中表达。此效应基因的表达导致未分化细胞的消除，或一种可用来以后除去它们的标记的表达。合适的效应基因编码毒素或诱导细胞凋亡的蛋白质、编码细胞表面抗原或将前药转化为对细胞致死的一种酶(如胸苷激酶)。根据本公开产生的分化细胞群适合用于组织再生和非治疗性应用，如药物筛选。
适合人治分化细胞

[发明专利]两真菌与一细菌原生质体融合的特效菌株及其构建方法-CN02138172.0无效
发明人：程树培;郝春博;阙子龙;陈俊;顾继东;李维新;黄秋明;于红霞;孙成;严俊;张徐祥;石磊 -专利权人：南京大学
申请日： 2002-08-26 - 公布日： 2003-03-26 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：两真菌与一细菌原生质体融合的特效菌株及其构建方法，是将白腐真菌(Phanerochaetechrysosporium)真核细胞、土著细菌YZ1原核细胞(Pseudomonas)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)真核细胞，共三个亲株菌的两界细胞的原生质体进行融合，三亲基因在同一个细胞内重组整合，构建出基因工程特效菌。该技术由双亲跨界融合和三亲跨界融合两部分组成。特效菌株同时含有三亲的基因DNA片段，综合了三亲株优势，利于处理废水。原生质体融合不产生新基因，不存在基因污染问题。
真菌细菌原生质体融合特效菌株及其构建方法

[发明专利]抗人MP52的单克隆抗体-CN97196365.7无效
发明人：北川宽;实川友史;柳泽幸子;中川启 -专利权人：赫斯·马里恩·鲁索株式会社
申请日： 1997-05-13 - 公布日： 1999-08-04 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：可与二聚体型人MP－52结合,不与单体型人MP－52结合的鼠抗人MP－52单克隆抗体。以CHO细胞产生的人MP－52(CHO－MP52)和大肠杆菌产生的人MP－52(rhMP52)为致敏原致敏小鼠而得到上述由IgG组成的高特异性鼠单克隆抗体。上述抗体在利用基因工程技术得到的人MP52的纯化和定量中有用。
抗人 mp52 单克隆抗体

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