本发明公开了HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对、质粒及其应用,涉及生物技术领域。本发明的HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对包括L序列和R序列,所述L序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,所述R序列的碱基序列如SEQ ID NO.2或3所示。本发明的HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶质粒包括载体质粒和上述打靶序列对,打靶序列对构建至载体质粒中。本发明还提供了上述打靶序列对在制作HTT基因突变模型中的应用。
本发明公开了HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型,涉及生物技术领域。本发明的打靶序列对包括L序列和R序列,L序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,R序列的碱基序列对如SEQ ID NO.2所示。本发明的打靶质粒包括第一载体质粒和上述的打靶序列对,打靶序列对构建至第一载体质粒中。本发明的HD细胞模型由PolyQ Donor质粒以及上述打靶质粒共转染细胞而得。
本发明公开了提供一种小鼠核糖体基因区打靶载体及其构建方法。所述小鼠核糖体基因区打靶载体中含有如SEQ ID NO.1所示的同源臂序列。本发明在核糖体基因区较高的同源重组效率基础上,旨在针对核糖体基因区位点,利用本发明有效地将目的基因打靶到小鼠不同类型细胞的核糖体基因区,再通过启动子陷阱策略富集基因打靶阳性克隆,此外Loxp序列的引入可以实现之后不同基因在打靶位置高效替换本发明后续主要应用小鼠胚胎干细胞的核糖体基因区打靶,再最终建立核糖体基因区打靶的小鼠模型,为验证以核糖体基因区基因打靶的有效性、生物安全性提供基础。