本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种利用RNAi技术和RNAi rescue原理制备的siRNA和突变型克隆载体。本发明的降低SPP1基因表达的小干扰RNA序列如SEQ ID NO:1‑2所示;本发明的突变型克隆载体针对前述降低SPP1基因表达的RNAi的靶序列构建。本发明的方法通过RNAi沉默基因观察功能变化情况,回复突变的载体与RNAi同时感染或转染目的细胞,沉默内源目的基因,通过外源突变型载体表达与内源相同功能的蛋白,经过这样组合处理细胞功能不发生改变;或者将突变型载体导入
本发明涉及一种突变型酯酶及其应用、重组载体及其制备方法和应用、重组工程菌及其应用。该突变型酯酶包括:(a)、由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸得到的多肽;或(b)、与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90%同源性的多肽。上述突变型酯酶的热稳定性较好。