本发明公开了热稳定性提高的低温淀粉酶突变体及其应用。本发明将低温淀粉酶进行定点突变最终筛选得到了热稳定性显著提高的3个低温淀粉酶突变体，其氨基酸序列分别为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示；Tm值测定结果表明三个突变体的Tm值均比野生型淀粉酶有明显提升，其中SEQ ID No.5所示突变体的Tm值相比野生型提高了4.77℃；残余酶活力比较试验结果发现，三个突变体的残余酶活力相比野生型淀粉酶分别提高了1.6倍，2.4倍和2.6倍；酶动力学参数测定结果表明，本发明低温淀粉酶突变体不仅可显著提高淀粉酶的热稳定性还可有效提高淀粉酶的催化效率。
本发明公开了一种L型淀粉酶变体及应用。所述的α淀粉酶变体通过B.licheniformis的α淀粉酶缺失其N‑末端第一个氨基酸残基V并替换成3个其他氨基酸残基DGL得到，序列如SEQ ID NO.4所示。本发明提供的α淀粉酶变体，在pH 5.0‑5.8酸性条件下和100℃以上高温条件下有较高的催化活度。这些α淀粉酶变体的耐酸和热稳定性，适用于淀粉液化。
本发明的目的是提供一种α淀粉酶及表达α淀粉酶的黑曲霉菌株，所述的α淀粉酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1，其一种编码mRNA序列为SEQ ID NO:2。本发明通过紫外诱变方法获得的突变菌株黑曲霉1-B5能够高效表达来源于棒曲霉的α淀粉酶AclaP11，菌株编号为CGMCC No.8443。黑曲霉1-B5的酶活力是出发菌株的1.97倍，其表达的α淀粉酶AclaP11的最适作用pH为6.0，最适作用温度为50℃，与出发菌株相比，酶学性质没有发生变化。此外，本发明所述黑曲霉1-B5是食品安全菌（GRAS），因此其分泌表达的α淀粉酶也可应用于食品添加剂领域，进一步拓宽了所述α淀粉酶的市场空间。
本发明揭示了一种来源于芽孢杆菌属细菌Bacillus sp.089的酸性α-淀粉酶编码基因amy089，其核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO：1。利用基因amy089构建的重组微生物表达产生的重组酸性α-淀粉酶，其氨基酸序列为序列表中的SEQ ID NO：2。利用本发明获得的酸性α-淀粉酶编码基因构建重组微生物，可实现酸性α-淀粉酶的高效率生产，该酸性α-淀粉酶在淀粉加工过程中具有液化淀粉的功能。
本发明公开了一种具有高麦芽糖生成率的真菌α‑淀粉酶变体及其制备方法，所述α‑淀粉酶变体在对应于SEQ ID NO：2所示区域77‑81区、135‑140区、214‑220区、331‑335区的一个或多个区域和/或位置的取代，所述变体具有α‑淀粉酶活性。本发明提供了一种具有高麦芽糖生成率的真菌α‑淀粉酶变体，与亲本真菌α‑淀粉酶相比，本发明提供的一种真菌α‑淀粉酶变体的淀粉水解物中麦芽糖含量提高了约5％，在高麦芽糖浆的工业化生产中具有应用优势。
