本发明公开了一组高强度的酿酒酵母人工小启动子。本发明提供了酿酒酵母人工启动子突变体库，是对酿酒酵母人工启动子UASF‑E‑C‑core1的核苷酸序列自3’末端起的第1‑6位中的全部或部分进行随机突变后得到的。本发明提供的酿酒酵母人工启动子突变体具体为如下中任一：核苷酸序列如SEQ ID No.10‑23所示的14个启动子突变体。本发明所提供一组高强度的酿酒酵母人工小启动子，其中强度最强的小启动子强度约是天然强启动子TDH3的3.3倍，是出发启动子强度的7倍。显著拓宽了人工小启动子的强度范围，为启动子工程更好的应用于酿酒酵母代谢途径的基因表达调控添砖加瓦。
本发明公开了一种甘蓝型油菜BnGLABRA2启动子及制备方法和应用，其步骤是：A、基因组步移克隆启动子序列：利用SDS裂解法提取基因组DNA，进行基因组步移，每次步移扩增两轮PCR克隆油菜。B、启动子序列生物信息学分析：将所克隆序列用BLASTN进行同源比对。启动子核心元件和上游顺式作用元件用启动子预测软件，得到启动子序列和上游启动子元件；C、全长启动子、缺失启动子的扩增以及pMD18-T-GP载体的构建：以基因组DNA为模板，根据前期得到的启动子序列，设计扩增各缺失片段的引物进行一种甘蓝型油菜BnGL2基因全长启动子SEQ ID NO：1在叶片表皮毛、种子、根部、整个叶脉、中柱叶脉中的应用，操作简单，结果稳定可靠。具有生物安全性和开发应用价值。
本发明涉及斑马鱼naalad2基因启动子及其应用。斑马鱼naalad2基因启动子的表达基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明首次发现了斑马鱼naalad2基因启动子，通过验证该启动子的功能和启动效率发现，斑马鱼naalad2基因启动子的调控方式更加清晰可控，将其用作斑马鱼相关模型的建立较其他来源的启动子具有显著的优势，较其他相关启动子更具有应用前景。
本发明涉及生产透明质酸的方法，包括：(a)在有助于生产透明质酸的培养基中培养芽孢杆菌宿主细胞，其中芽孢杆菌细胞包含含有三联启动子的核酸构建体，三联启动子包含具有对应于SEQ ID NO：1的位置590的突变的变体amyL启动子，“-35”区域具有TTGACA序列和“-10”区域具有TATAAT序列的共有启动子和cryIIIA启动子，其中三联启动子的每个启动子序列可操作地与一个或多个涉及透明质酸生物合成的编码序列相连本发明也涉及包含核酸构建体的芽孢杆菌细胞，其中核酸构建体包含(i)含有具有对应于SEQ ID NO：1的位置590的突变的变体amyL启动子，“-35”区域具有TTGACA序列和“-10”区域具有TATAAT序列的共有启动子和cryIIIA启动子的三联启动子，其中三联启动子的每个启动子序列可操作地与该个或多个涉及透明质酸生物合成的编码序列相连。
本发明公开了一种不受甘油和葡萄糖抑制的可诱导启动子及利用该启动子构建的毕赤酵母表达载体。所述启动子为FDH1基因启动子，所述FDH1基因启动子的序列如SEQ ID NO:1所示。利用FDH1基因启动子驱动外源基因转录的毕赤酵母表达载体包括胞内表达和胞外分泌型表达两种。本发明获得的FDH1基因启动子以及所构建的表达载体可以有效的提高外源蛋白在毕赤酵母中的表达，同时可以满足更多启动子的选择。
本发明公开了一种花药特异表达启动子pRsSWEET15.1及其应用，其启动子pRsSWEET15.1核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；用于体外扩增所述启动子的引物，其序列如SEQ ID NO.2‑3所示；所述的RsSWEET15.1启动子的重组表达载体以及所述的表达启动子pRsSWEET15.1或所述的含有RsSWEET15.1启动子的重组表达载体的基因试剂盒。本发明筛选到一种全新的启动子(RsSWEET15.1启动子)可以有效驱动外源基因在花药中特异性表达的表达水平精准。
本发明属于微生物基因工程领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌发酵生产启动子及其应用方法。本发明所述启动子的碱基序列中含有如SEQ ID NO.1所示的分离的多核苷酸序列。本发明的发明人，将所述启动子与GFP连接，转化枯草芽孢杆菌,检测启动子对外源基因（或蛋白）表达的影响。通过检测GFP的表达结果证明，该启动子具有启动子的活性，并受工业生产培养基PPB诱导活性增强。此外，本发明启动子与其他启动子进行比较，所诱导表达的GFP量比其他启动子高65%~114%，适用于外源蛋白或多肽在微生物的重组生产，并具有受诱导可调控的活性特征。
