本发明公开了一种枯草芽孢杆菌表达系统及其生产α‑L‑AFs的方法。通过在枯草芽孢杆菌基因组的aprE位点插入木糖诱导的T7 RNA聚合酶表达系统，建立所述枯草芽孢杆菌表达系统。利用枯草芽孢杆菌表达系统生产α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶的方法为：合成序列如SEQ ID NO:2所示的质粒pMK4‑T7，在质粒pMK4‑T7中插入α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶的编码基因，得到表达质粒pMK4‑T7‑arbf；将表达质粒pMK4‑T7‑arbf转化至权利要求1所述的枯草芽孢杆菌表达系统得到枯草芽孢杆菌T7‑arbf；所述枯草芽孢杆菌T7‑arbf进行发酵培养分泌生产α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶。本发明能够以廉价的麸皮为诱导物高效表达蛋白；在发酵实验中，α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶的最高酶活可以达到194.8±4.1U/mL。
本发明属于微生物基因工程领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌发酵生产启动子及其应用方法。本发明所述启动子的碱基序列中含有如SEQ ID NO.1所示的分离的多核苷酸序列。本发明的发明人，将所述启动子与GFP连接，转化枯草芽孢杆菌,检测启动子对外源基因（或蛋白）表达的影响。通过检测GFP的表达结果证明，该启动子具有启动子的活性，并受工业生产培养基PPB诱导活性增强。此外，本发明启动子与其他启动子进行比较，所诱导表达的GFP量比其他启动子高65%~114%，适用于外源蛋白或多肽在微生物的重组生产，并具有受诱导可调控的活性特征。
本发明公开了一种表达外源基因的启动子及其应用。所述启动子的核苷酸序列选自以下其中一种(1)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或与其反向互补的核苷酸序列；(2)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失或添加修饰且具有相同启动子功能的核苷酸序列；(3)与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有90％以上同源性且具有相同启动子功能的核苷酸序列。本发明中公开的启动子序列属于高效表达分子元件，可以高效地启动外源蛋白，特别是工业酶制剂的发酵生产，在重组蛋白表达应用中，该启动子经自发启动，无需添加额外诱导物，主要用于芽孢杆菌，如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解链淀粉芽孢杆菌等工业生产菌株的构建。
