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[发明专利]一种复杂DNA的合成方法及其应用-CN202110554148.X有效
发明人：马石金;肖晓文;吴佑林;谢天;杜军 -专利权人：北京擎科生物科技有限公司;南京擎科生物科技有限公司
申请日： 2021-05-20 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供的复杂DNA的合成方法包括：分析待合成DNA，确定其含有的分割序列的位置以及II型限制性内切酶和IIS型限制性内切酶完整识别位点信息，选择拟使用的II型限制性内切酶和IIS型限制性内切酶，在分割序列的最后一个碱基之后将待合成DNA分割为多个序列片段，在每个序列片段的末端添加碱基，使其能够被II型限制性内切酶、IIS型限制性内切酶酶切且形成配对的粘性末端，分别合成各序列片段，利用II型限制性内切酶酶切、IIS型限制性内切酶酶切后，连接酶切产物。该方法为复杂DNA序列的合成提供了简便、快速、高效的方法。
一种复杂 dna 合成方法及其应用

[发明专利]入门载体pAmpGate和pGentGate的构建及使用方法-CN201610700818.3有效
发明人：张孟臣;娜仁;杨春燕;闫龙;史晓蕾;邸锐;赵鑫;冯燕 -专利权人：河北省农林科学院粮油作物研究所
申请日： 2016-08-22 - 公布日： 2019-03-19 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明所提供的入门载体为含有DNA片段A的环形载体；所述DNA片段A自5’端到3’端依次含有attL1序列、IIs型限制性内切酶A的识别序列、IIs型限制性内切酶B的识别序列、筛选标签序列1、所述IIs型限制性内切酶B的识别序列、所述IIs型限制性内切酶A的识别序列、attL2序列。本发明所提供的入门载体可采用Golden Gate构建方法取代传统的BP反应进行入门克隆的构建，由经济实惠的IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶取代昂贵的BP酶，大大节省了实验费用，同时该入门载体既可以用来进行单片段
入门载体 pampgate pgentgate 构建使用方法

[发明专利]基于3-臂DNA分子的DNA计算机广义表数据结构设计方法-CN200810207759.1无效
发明人：丁永生;李汪根;任立红 -专利权人：东华大学
申请日： 2008-12-25 - 公布日： 2009-06-17 - 主分类号： G06F19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于3-臂DNA分子的DNA计算机广义表数据结构设计方法，包括表结点数据元素和原子结点数据元素，其特征在于，所述的方法包括下列步骤：(1)设计限制性内切酶的识别位点E(i)；(2)设计限制性内切酶的识别位点Eh；(3)设计限制性内切酶的识别位点Et；(4)设计特定的DNA序列stick；其中特定的DNA序列包括s，s1，s2；(5)设计特定的DNA序列element；(6)设计限制性内切酶的识别位点Ec；(7)设计限制性内切酶的识别位点E。
基于 dna 分子计算机广义数据结构设计方法

[发明专利]一种用MspI检测人胃癌易感基因IL-1RN多态性rs9005的方法-CN201610095044.6在审
发明人：王凯娟;宋春花;侯瑞生;薛云红;高三友;杨文杰;陈晓霖;徐娅娟;范琦琪 -专利权人：郑州大学
申请日： 2016-02-22 - 公布日： 2016-05-11 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用MspI检测人胃癌易感基因IL-1RN多态性rs9005的方法，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。该方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。
一种 mspi 检测胃癌基因 il rn 多态性 rs9005 方法

[发明专利]识别简并序列或四碱基序列的限制性内切酶在接头介导的PCR方法中的应用-CN201711310334.9在审
发明人：王丹阳;杨云;张雪馨 -专利权人：西北大学
申请日： 2017-12-11 - 公布日： 2018-06-01 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了识别简并序列或四碱基序列的限制性内切酶在接头介导的PCR方法中的应用，利用识别简并序列的限制性内切酶或识别四个碱基序列的限制性内切酶可将基因组切割成更多短片段，增加了克隆目的片段的几率。在大多数情况下，长片段不能被Taq DNA聚合酶及其改进的衍生物有效扩增。另一方面，在克隆T‑DNA侧翼序列时，几十个核苷酸信息就能确定插入位点。因此，识别简并序列的酶或识别四个碱基序列的酶将会是更好的选择。
限制性内切酶碱基序列简并序列介导扩增克隆基因组切割侧翼序列插入位点扩增片段目的片段长片段核苷酸短片应用改进

[发明专利]用于保护限制性内切酶BspQ I表达的保护基因、组成型质粒、重组菌及其应用-CN202310298412.7在审
发明人：谢渊;徐灿;王赛赛;罗漫杰;王梁;施婧妮 -专利权人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司
申请日： 2023-03-24 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明涉及用于保护限制性内切酶BspQ I表达的保护基因、组成型质粒、重组菌及其应用。该保护基因同时含有M1.EarI基因序列和M2.EarI基因序列，且M1.EarI基因序列和M2.EarI基因序列的密码子适应指数均小于或者等于0.61。本研究对BspQ I限制性内切酶的表达进行大量研究，意外发现，M1.EarI基因和M2.EarI基因序列同时存在，且M1.EarI基因序列和M2.EarI基因序列的密码子适应指数均小于或者等于0.61，能够高效保护BspQ I限制性内切酶的重组表达。经试验验证，含有限制性内切酶BspQ I的编码序列和上述保护基因的重组菌能够可溶性表达具有较高酶活力的限制性内切酶BspQ I。
用于保护限制性内切酶 bspq 表达基因组成质粒重组及其应用

[发明专利]一种突变型限制性内切酶BsaI及其制备方法和应用-CN201911408602.X有效
发明人：张坤晓;程槐旭;胡梦竹;燕东平;聂尚海 -专利权人：莫纳（武汉）生物科技有限公司
申请日： 2019-12-31 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种突变型限制性内切酶BsaI及其制备方法和应用，所述突变型限制性内切酶BsaI具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；(II)与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有≥98％同源性的多肽；(III)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经过1～20个氨基酸残基的取代、缺失或添加而获得的氨基酸序列，且获得的氨基酸序列具有限制性内切酶的活性本发明通过对野生型限制性内切酶BsaI及进行多位点氨基酸突变，得到突变型限制性内切酶BsaI，所得酶稳定性好，酶活和纯度满足市场需要，且价格低廉。
一种突变型限制性内切酶 bsai 及其制备方法应用

[发明专利]一种构建T载体的方法-CN201110177458.0无效
发明人：周江宁;方辉;赵君 -专利权人：中国科学技术大学
申请日： 2011-06-28 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种构建T载体的方法，为将两端含有特异限制性内切酶识别序列的抗性基因定向克隆到出发载体的两个多克隆位点之间，用上述抗性基因对应的抗生素筛选阳性克隆，得到T载体前体；然后用所述特异限制性内切酶消化所得T载体前体，回收大片段，得到T载体；其中，所述特异限制性内切酶为其识别序列被酶切后突出末端位点可以是T的限制性内切酶，所述抗性基因与出发载体所含抗性基因不同。
一种构建载体方法

[发明专利]一种表达重组人NLK基因的质粒及构建方法-CN201710804329.7在审
发明人：宋鑫;付桥粉;孟旭东;李乔林;田慧 -专利权人：信雅生物科技（苏州）有限公司
申请日： 2017-09-08 - 公布日： 2018-03-23 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明的目的在于针对NLK基因在肿瘤中的研究现状及其可作为潜在治疗靶点的应用前景，提供一种表达重组人NLK基因的质粒及构建方法，其通过设计能特异性克隆人NLK基因的引物并在其上游添加限制性内切酶识别序列及保护性碱基；用PCR反应合成该含有限制性内切酶识别序列及保护性碱基的人NLK基因序列；将含有限制性内切酶识别序列的人NLK基因序列与pcDNA3.0载体分别进行双酶切反应；用T4 DNA连接酶将双酶切后的人NLK基因序列与双酶切后的pcDNA3.0载体进行连接，形成重组质粒；将重组质粒进行感受态细胞转化、培养、筛选和测序验证，挑选出正确克隆的重组菌液；提取正确克隆的重组菌液中的质粒；用Western blot验证上一步中重组质粒于细胞内
一种表达重组 nlk 基因质粒构建方法

[发明专利]用于重组表达限制性内切酶的工程菌株及其构建方法-CN201911014949.6在审
发明人：张坤晓;许恒皓;韩挺翰;龚雪梅;张惠铭;胡艳红 -专利权人：江苏海洋大学
申请日： 2019-10-24 - 公布日： 2020-01-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一类用于重组表达限制性内切酶的工程菌株及其构建方法，工程菌株为大肠杆菌ER2566，该工程菌株包含以下条件：兼容外源甲基转移酶；含有可保护四碱基通用序列的甲基转移酶基因的原核表达载体pACYC184；含有识别切割序列包含四碱基通用序列的限制性内切酶基因的原核表达载体pBAD；其中，四碱基通用序列包括：TCGA、TGCA、TTAA、AATT、ACGT、AGCT、CATG、CCGG、CGCG、CTAG、GATC、GCGC、GGCC、GTAC；与现有技术相比，本发明无需为每种限制酶筛选特定的甲基化保护菌株，大大减少了生产限制性内切酶所需的甲基转移酶保护菌株数量。
工程菌株通用序列碱基限制性内切酶原核表达载体甲基转移酶菌株限制性内切酶基因甲基转移酶基因大肠杆菌重组表达甲基化限制酶构建外源切割兼容筛选生产

[发明专利]一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法-CN201610250091.3在审
发明人：宋春花;夏宗江;蔡建有;侯瑞生;曹晶晶;闫芮;彭瑞 -专利权人：郑州大学
申请日： 2016-04-20 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。此方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。因此，本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人乳腺癌易感基因RAD51rs7180135多态性的方法及检测试剂盒。
一种 bcci 鉴定人乳腺癌 rad51 基因 rs7180135 多态性方法

[发明专利]一种DNA组装的方法及其应用-CN201811613376.4在审
发明人：刘树文;温廷益;张芸;邓爱华 -专利权人：南京中科游子生物技术研究院有限公司
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2020-07-07 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：该质粒包含单个毗邻的IIP和IIS型限制性内切酶识别位点。该质粒综合应用IIP和IIS型限制性内切酶的特性可实现递归循环、无痕和重复序列的组装。
一种 dna 组装方法及其应用

[发明专利]一种用ApoI检测人胃癌易感基因IL17A rs3748067多态性的方法-CN201610248517.1在审
发明人：王凯娟;高三友;侯瑞生;李丽;徐娅娟;和红;杨倩;董凯艳;段富交;胡艳丽 -专利权人：郑州大学
申请日： 2016-04-20 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用ApoI检测人胃癌易感基因IL17A rs3748067多态性的方法，采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。此方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。因此，本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人胃癌易感基因IL17A多态性rs3748067的方法及检测试剂盒。
一种 apoi 检测胃癌基因 il17a rs3748067 多态性方法

[发明专利]一种用MwoI鉴定人乳腺癌BRCA2基因rs15869多态性的方法-CN201610502984.2在审
发明人：赵艳艳;朱利楠;杨再刚;岳欣阁;桑海强;宋春花 -专利权人：郑州大学第一附属医院
申请日： 2016-06-28 - 公布日： 2016-08-31 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用MwoI鉴定人乳腺癌BRCA2基因rs15869多态性的方法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异酶切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。此方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人乳腺癌易感基因BRCA2多态性rs15869的方法及检测试剂盒。
一种 mwoi 鉴定人乳腺癌 brca2 基因 rs15869 多态性方法

[发明专利]一种用XmnI鉴定人食管癌RAD51基因rs45549040多态性的方法-CN201610503057.2在审
发明人：夏宗江;宋春花;方泽民 -专利权人：郑州大学第一附属医院
申请日： 2016-06-28 - 公布日： 2016-09-07 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用XmnI鉴定人食管癌RAD51基因rs45549040多态性的方法，采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异酶切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。此方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。因此，本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人食管癌易感基因RAD51多态性rs45549040的方法及检测试剂盒。
一种 xmni 鉴定人食管癌 rad51 基因 rs45549040 多态性方法

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