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[发明专利]地衣芽胞杆菌表达宿主-CN201310562150.7有效
发明人：陈守文;周银华;魏雪团;陈敬帮;祁高富;冀志霞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2013-11-12 - 公布日： 2018-09-14 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种多基因缺失的地衣芽胞杆菌宿主菌BL10，保藏编号为CCTCCNO：M2013400。该宿主菌来源于地衣芽胞杆菌WX‑02，部分或完全缺失了10个基因。这10个基因分别是8个蛋白酶基因(mpr，编码胞外金属蛋白酶；vpr，编码丝氨酸蛋白酶；aprX，胞内丝氨酸蛋白酶；epr，编码微小胞外蛋白酶；bpr，编码芽胞杆菌肽酶F；wprA，编码与细胞壁结合的蛋白酶；aprE，编码胞外碱性丝氨酸蛋白酶；bprA，编码芽胞杆菌肽酶F)和2个胞外分泌蛋白基因(hag，编码鞭毛蛋白；amyL，编码α‑淀粉酶)。BL10完全无胞外蛋白酶活性，可降低蛋白酶对目标蛋白的降解作用。当利用该表达宿主表达目标蛋白时，表达量更高，该宿主菌有利于增强蛋白的表达。
地衣杆菌表达宿主

[发明专利]用于为目标蛋白量身构建最优的枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失表达宿主的方法-CN201910299758.2在审
发明人：闫新;赵雷真;刘圆鑫 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2019-04-15 - 公布日： 2019-07-12 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明属生物高技术领域，公开了一种用于为目标蛋白量身构建最适的枯草杆菌蛋白酶缺失表达宿主的方法。每个重组蛋白都有其独特的最优蛋白酶缺失突变表达宿主，而现有的枯草杆菌胞外蛋白酶缺失宿主适用性差，不能满足这种个性化需求。鉴于此，本发明提供一种用于为重组蛋白量身定制最适胞外蛋白酶缺失表达宿主的方法。该方法能准确评估枯草杆菌的每种胞外蛋白酶对目标蛋白生产的影响，从而确定有利和有害的胞外蛋白酶，然后通过失活不利的蛋白酶、保留有利的蛋白酶，获得最优宿主，以最大化提高目标蛋白的产量。
宿主胞外蛋白酶目标蛋白缺失表达枯草杆菌蛋白酶重组蛋白构建枯草芽孢杆菌蛋白酶枯草杆菌蛋白酶蛋白酶缺失个性化需求生物高技术表达宿主量身定制准确评估最大化失活突变保留生产

[发明专利]蛋白酶响应的GPCR受体及其应用-CN202210826781.4在审
发明人：张海辉;雷正扬;秦培武 -专利权人：清华-伯克利深圳学院筹备办公室
申请日： 2022-07-14 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了蛋白酶响应的GPCR受体及其应用。本发明的蛋白酶响应的GPCR受体，包括胞外蛋白酶识别结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域；所述胞外蛋白酶识别结构域包含蛋白酶水解的肽段；所述胞内信号结构域包含HCV酶水解肽段、核定位序列NLS、Cas蛋白酶和偶联核转录因子本发明蛋白酶响应的GPCR受体能够通过响应细胞外蛋白酶，诱导内源性dCas9组装入核激活调节自然杀伤细胞内的嵌合抗原受体信号通路，为开发新的精确免疫细胞疗法提供新的解决方案。
蛋白酶响应 gpcr 受体及其应用

[发明专利]耐冷假单胞菌胞外蛋白酶失活方法、原料乳及处理方法-CN201611226097.3有效
发明人：徐煜;刘振民;游春苹 -专利权人：光明乳业股份有限公司
申请日： 2016-12-27 - 公布日： 2020-06-30 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明公开了一种耐冷假单胞菌胞外蛋白酶失活方法，包括以下步骤：将含有耐冷假单胞菌胞外蛋白酶的溶液在50‑70℃热浴加热2‑4min，再经800W微波加热60‑120s。上述的胞外蛋白酶失活方法，与低温失活方法相比，大大缩短了处理时间，降低能耗，灭活效果也优于传统方法，并且，不会破坏胞外蛋白酶所处的溶液环境中的其他营养物质。
耐冷假单胞菌胞外蛋白酶方法原料处理

[发明专利]一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因与应用-CN202010925531.7有效
发明人：涂雄兵;张泽华;李霜;徐超民 -专利权人：宁夏中微泰克生物技术有限责任公司
申请日： 2020-09-03 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本申请公开了一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因与应用。本申请首先从亚洲小车蝗中克隆亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK，并对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK设计引物，合成用于干扰亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA，且运用注射法将dsRNA导入亚洲小车蝗对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因结果表明：dsRNA注射亚洲小车蝗后，存活率、生长速率、体重及总体表现力均显著降低，说明亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK在昆虫生长发育过程中起着重要作用。
一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶 erk 及其编码基因应用

[发明专利]一种生产异源碱性蛋白酶的工程菌及其构建方法-CN202011539757.X有效
发明人：路福平;李玉;刘逸寒;陈雪佳;王茂军;王兴吉;李庆刚;王克芬;刘文龙;刘夫锋;张杰;佟新伟 -专利权人：天津科技大学;山东隆科特酶制剂有限公司
申请日： 2020-12-23 - 公布日： 2023-06-16 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
一种生产碱性蛋白酶工程及其构建方法

[发明专利]一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法-CN201610081013.5有效
发明人：徐煜;刘振民;游春苹 -专利权人：光明乳业股份有限公司
申请日： 2016-02-04 - 公布日： 2019-01-11 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明提供了一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法。将一部分上清液加热；(3)将经过与未经过热处理的上清液与反应缓冲液混合，35‑45℃反应2‑3小时，终止反应，离心，取上清转移至多孔板，加入强碱溶液，检测450nm吸光值；(4)将450nm吸光值换算为胞外蛋白酶酪蛋白水解活性；胞外蛋白酶的耐热性为经过热处理与未经过热处理的上清液中的胞外蛋白酶酪蛋白水解活性的比值。本发明方法可以同时对微生物胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性进行定量测试，更加精确比较菌株之间的差异，使操作更便捷，节省了培养基，能够实现批量操作并可直接检测菌液上清。
一种检测蛋白酶蛋白水解活性耐热性方法

[发明专利]芽孢杆菌DL-1的胞外蛋白酶在催化拆分乙酸苏合香酯的应用-CN201910963432.5在审
发明人：胡云峰;董璐;张云 -专利权人：中国科学院南海海洋研究所
申请日： 2019-10-11 - 公布日： 2020-01-17 - 主分类号： C12P7/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种芽孢杆菌DL‑1的胞外蛋白酶在催化拆分乙酸苏合香酯的应用。芽孢杆菌DL‑1所产的胞外蛋白酶可作为催化剂用于制备高光学纯度的手性(R)‑1‑苯乙醇和(S)‑乙酸苏合香酯。在最佳反应条件下，固定化胞外蛋白酶催化拆分(±)‑乙酸苏合香酯得到(R)‑1‑苯乙醇的对映体过量值(e.e.
乙酸苏合香酯胞外蛋白酶芽孢杆菌催化苯乙醇对映体产率生物化工领域最佳反应条件高光学纯度催化效率绿色环保固定化手性制备生产工艺催化剂应用

[发明专利]一种快速扩增食线虫真菌胞外丝氨酸蛋白酶基因的方法及应用-CN200510010801.7无效
发明人：张克勤;杨金奎 -专利权人：云南大学
申请日： 2005-05-11 - 公布日： 2005-12-21 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速扩增食线虫真菌胞外丝氨酸蛋白酶基因的方法和应用，属于分子生物学和应用微生物学领域。本发明设计了5对简并引物(共6条)用于快速扩增捕食线虫真菌的胞外丝氨酸蛋白酶基因。本发明以捕食线虫真菌基因组DNA作为模板，通过以上引物快速扩增胞外蛋白酶的编码基因。本发明能够快速扩增捕食线虫真菌胞外丝氨酸蛋白酶基因，具有良好的应用前景。
一种快速扩增线虫真菌丝氨酸蛋白酶基因方法应用

[发明专利]一种快速鉴定嗜冷菌胞外耐热蛋白酶种类的方法-CN202210146629.1在审
发明人：艾连中;夏永军;熊智强;王光强;宋馨;张汇;杨昳津 -专利权人：上海理工大学
申请日： 2022-02-17 - 公布日： 2022-08-09 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速鉴定嗜冷菌胞外耐热蛋白酶种类的方法，包括以下步骤：(1)嗜冷菌发酵液离心，制备发酵液样品；(2)配置含有蛋白底物的SDS‑PAGE凝胶；(3)将发酵液样品与蛋白上样缓冲液混匀后上样；(与现有技术相比，本发明方法能对嗜冷菌胞外耐热蛋白酶种类进行快速定性，能够良好的区分不同分子量耐热蛋白酶，比传统方法能够更加准确的对耐热蛋白酶种类进行定性，省去了繁琐的蛋白酶分离纯化步骤，重复性好，灵敏度较高，可以用于不同嗜冷菌胞外耐热蛋白酶的检测，应用空间广泛。
一种快速鉴定嗜冷菌胞外耐热蛋白酶种类方法

[发明专利]一种大豆蛋白酶解产物及其制备方法和应用-CN201710146247.8在审
发明人：赵强忠;谭允冰;赵谋明 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2017-03-13 - 公布日： 2017-07-28 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明属于食品工业技术领域，公开了一种大豆蛋白酶解产物及其制备方法和应用。所述制备方法为采用蛋白酶对大豆蛋白或大豆粕进行酶解，至水解度达到5％～15％时，高温灭酶终止酶解反应，得到酶解液；调节酶解液pH值为6.5～7.5，离心，取上清液通过3000～5000Da的超滤膜处理，收集透过液，即得所述大豆蛋白酶解产物。本发明所制备的大豆蛋白酶解产物促产胞外多糖能力强，在50～1000ppm添加范围，能显著提高乳酸菌产胞外多糖的能力；通过促进乳酸菌产胞外多糖，可显著增加酸奶黏度、提高其稳定性、改善其口感和保健功能。
一种大豆蛋白酶产物及其制备方法应用

[发明专利]一种胁迫条件下低蛋白酶A外泌酵母菌株及其构建方法-CN201410782691.5有效
发明人：陈叶福;肖冬光;韩月然;龚瑞;郭学武;董健;张翠英;杜丽平;马立娟 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2014-12-16 - 公布日： 2017-08-29 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明提供了一种在胁迫条件下调节蛋白酶A胞内外分泌的新方法，是通过敲除蛋白酶A编码基因即PEP4基因的一个等位基因的同时过表达编码液泡分选受体的MRL1基因来实现的。本发明选育的酿酒酵母菌株明显降低了蛋白酶A的胞外分泌量，能够提高纯生啤酒的泡持性，胞外蛋白酶A酶活较出发菌株有明显降低，约降低到出发菌株的54％，同时，重组菌株的胞内蛋白酶A酶活跟出发菌株相比无显著变化本发明为降低蛋白酶A胞外酶活的同时不改变发酵特性提供了一种的新的思路和方法，对提高工业酵母泡沫稳定性具有指导意义。
一种胁迫条件下蛋白酶酵母菌株及其构建方法

[发明专利]一株假交替单胞菌突变菌株及其应用-CN201510317461.6有效
发明人：何海伦;武翠玲;杨兴昊;刘丹;张姜;吴日帮;黄雅雯 -专利权人：中南大学
申请日： 2015-06-11 - 公布日： 2018-01-12 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于微生物技术领域，具体公开了一株假交替单胞菌突变菌株Pseudoalteromonas sp.CSN423‑M及其应用。本发明的假交替单胞菌CSN423‑M能够产胞外蛋白酶，经测定，该菌培养96h后，胞外蛋白酶活性达1461.33U/mL，因此,可用于生产蛋白酶，对蛋白酶的研究和利用具有重要的价值。
一株假交替单胞菌突变菌株及其应用

[发明专利]一种新的食线虫真菌来源的丝氨酸蛋白酶基因及其应用-CN200610010848.8无效
发明人：杨金奎;梁连铭;张楹;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2006-04-26 - 公布日： 2006-11-08 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及一种新的食线虫真菌来源的丝氨酸蛋白酶基因及其应用，属于分子生物学和应用微生物学领域。本发明选择在GenBank上发表的其它来源的丝氨酸蛋白酶的编码基因，利用DNAman生物学软件进行同源性分析，根据保守序列设计了一对简并引物。以异形隔指孢的基因组DNA作为模板，利用简并引物扩增得到蛋白酶编码基因的保守序列。再利用DNA Walking SpeedUp^TM Premix试剂盒扩增得到5′端的未知序列，把两段序列进行拼接得到异形隔指孢胞外丝氨酸蛋白酶编码基因的全序列。异形隔指孢所产生的胞外蛋白酶对线虫有较高的杀虫活性，可以通过分子生物学手段把该蛋白酶编码基因Dv1转化其它的线虫生防真菌，实现Dv1的异源表达，提高线虫生防真菌胞外蛋白酶的表达量和对植物寄生线虫的生防能力
一种线虫真菌来源丝氨酸蛋白酶基因及其应用

[发明专利]芽孢杆菌DL-2的胞外蛋白酶在催化(±)-乙酸苏合香酯不对称水解中的应用-CN201910066690.3在审
发明人：胡云峰;董璐;张云;孙爱君 -专利权人：中国科学院南海海洋研究所
申请日： 2019-01-24 - 公布日： 2019-05-24 - 主分类号： C12N9/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种芽孢杆菌DL‑2的胞外蛋白酶在催化(±)‑乙酸苏合香酯不对称水解中的应用。本发明从西太平洋深海分离到一株芽孢杆菌Bacillus sp.DL‑2，发酵培养制备其胞外蛋白酶，用硅藻土固定化后能够催化(±)‑乙酸苏合香酯不对称水解，可用于制备手性(R)‑1‑苯乙醇和(S)‑乙酸苏合香酯本发明利用固定化的胞外蛋白酶作为催化剂，对反应体系和反应条件进行优化，制备得到了光学纯度约为97％的(R)‑1‑苯乙醇和光学纯度大于99％的(S)‑乙酸苏合香酯。本发明的Bacillus sp.DL‑2的胞外蛋白酶具有生产工艺简单、催化效率高的优点，在生物医药和精细化工领域具有非常大的应用前景。
乙酸苏合香酯胞外蛋白酶不对称水解芽孢杆菌催化光学纯度苯乙醇固定化制备应用精细化工领域催化效率发酵培养反应条件生物医药制备手性硅藻土深海可用生产工艺催化剂优化

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