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[发明专利]一种免筛选原/真核双表达载体及其构建与应用-CN201710037821.6在审
发明人：马跃 -专利权人：西南大学
申请日： 2017-01-19 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原/真核双表达载体及其构建方法、应用所述原/真核双表达载体进行免筛选PCR重组克隆目的基因的方法以及获得的包含目的基因的重组载体。本发明提供的原/真核双表达载体具备兼容的原核表达调控元件和真核表达调控元件，因此克隆入本发明载体的目的基因既能进行原核表达又能进行真核表达。本发明载体在Kozak序列与真核加尾信号序列之间含有一个高效自杀基因表达盒，因此采用本发明提供的PCR重组克隆技术克隆目的基因时，目的基因将插入本发明提供的原/真核双表达载体的Kozak序列与真核加尾信号序列之间并替换原有的高效自杀基因表达盒因此，应用本发明载体仅需一对PCR引物和两次PCR反应即可获得目的基因的原/真核双表达重组载体，无需使用内切酶、连接酶和其它DNA修饰酶，极大地节约时间成本和经济成本。
真核目的基因表达载体加尾信号序列原核表达重组载体自杀基因表达盒构建克隆真核表达调控元件筛选应用生物技术领域重组克隆技术重组载体克隆调控元件经济成本时间成本真核表达重组克隆自动筛选连接酶内切酶原有的替换兼容节约

[发明专利]日本血吸虫双价DNA疫苗及制备方法-CN200510019808.5无效
发明人：石佑恩;胡媛 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2005-11-15 - 公布日： 2007-05-23 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明涉及日本血吸虫双价DNA疫苗，包括真核表达载体和插入到真核表达载体的多克隆位点上的目的基因，目的基因为Sj23和SjFABP，真核表达载体为具有两套翻译单位的真核表达载体，Sj23和SjFABP分别插入到具有两套翻译单位的真核表达载体的多克隆位点上，构建日本血吸虫双价DNA疫苗。本发明日本血吸虫双价DNA疫苗具有安全、高效、制备简单、性能稳定、不需冷藏系统，利于储存运输和使用方便，一次免疫能产生较为持久的免疫保护效果。
日本血吸虫 dna 疫苗制备方法

[发明专利]SFTSV膜蛋白真核双表达载体构建方法-CN202211244292.4在审
发明人：刘苗苗 -专利权人：济宁医学院
申请日： 2022-10-12 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： C12N15/40 文献下载
摘要：本发明公开了SFTSV膜蛋白真核双表达载体构建方法，具体包括以下步骤：步骤一、基因分析：发现SFTSV的膜蛋白上含有决定病毒与宿主细胞间相互作用的抗原决定簇；步骤二、密码子优化；步骤三、表达构建；步骤四、表达纯化：将真核表达载体转染到哺乳动物细胞中来表达目的蛋白，进行表达纯化测试，本发明涉及分子病毒学技术领域。该SFTSV膜蛋白真核双表达载体构建方法，通过将含有抗原决定簇的膜蛋白优化后亚克隆到真核表达载体PBudce4.1中，利用PBudce4.1的双表达载体特性，实现Gn蛋白和Gc蛋白的同时表达，构建出同时表达Gn蛋白和Gc蛋白的真核表达载体PBudCE‑Gn/Gc，大大提高了工作效率的同时，获得针对病毒膜蛋白的重组基因工程疫苗，为病毒防控提供思路。
sftsv 膜蛋白真核双表达载体构建方法

[发明专利]基于深度学习的单双微核细胞图像检测方法及相关设备-CN202211076978.7在审
发明人：杨炼;陈忠雄;崔玉峰 -专利权人：上海北昂医药科技股份有限公司
申请日： 2022-09-05 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： G06T7/00 文献下载
摘要：本发明公开了基于深度学习的单双微核细胞图像检测方法及相关设备，方法包括：获取步骤，获取真阳性微核组学图像，所述真阳性微核组学图像携带有关键指标；检测步骤，将所述真阳性微核组学图像输入至微核组学检测模型进行处理，以剔除不符合预定面积关系的假阳性微核样本，输出微核组学模型图像；计算步骤，所述微核组学检测模型利用所述输出微核组学模型图像的微核面积与所述真阳性微核组学图像的微核面积进行计算。本发明提供了一种基于深度学习和图像处理算法的微核组学图像检测方法，实现了微核组学的大规模、多指标、高效、高精度和可视化检测，有效检测癌症风险。
基于深度学习单双微核细胞图像检测方法相关设备

[发明专利]山羊脂联素基因真核表达载体的构建和应用-CN201410581934.9在审
发明人：王林杰;张红平;薛科;李利;仲涛;王艳 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2014-10-28 - 公布日： 2015-03-04 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种山羊脂联素蛋白真核表达载体的构建和应用。所述的山羊脂联素基因编码区的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：1所示。将山羊脂联素基因的完整编码区片段经过双酶切，连接到同样经过双酶切pEGFP-N1载体中，这样可以构建山羊脂联素蛋白真核表达载体。该真核表达载体构建方法简单可行，可以高效的增强山羊脂联素蛋白的表达，并且都包含绿色荧光蛋白，可以检测山羊脂联素蛋白真核细胞中的表达和定位。本发明提供的真核表达载体也可以应用于研究脂联素蛋白在山羊脂肪沉积过程中的作用。
山羊脂联素基因表达载体构建应用

[发明专利]一种双靶标肿瘤疫苗及其制备方法和应用-CN201811196350.4有效
发明人：杨曌 -专利权人：重庆医科大学附属永川医院
申请日： 2018-10-15 - 公布日： 2021-08-27 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明属于生物医药领域，具体涉及一种双靶标肿瘤疫苗及其制备方法和应用。本发明的肿瘤疫苗由肿瘤血管内皮标志物GPR124重组真核表达质粒和融合肽通过静电作用结合，GPR124重组真核表达质粒又由GPR124基因和真核表达载体连接组成。本发明的的双靶标肿瘤疫苗有如下优点：1)肿瘤疫苗具有双靶标，可同时抑制肿瘤血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡；2)本疫苗安全、易于制备纯化，免疫原性强，易被APC摄取；3)大大提高肿瘤治疗的有效性和安全性，在肿瘤治疗领域具有良好的应用前景
一种靶标肿瘤疫苗及其制备方法应用

[发明专利]一种重组噬菌体双表达载体及应用-CN201310255769.3有效
发明人：徐海;王义伟;鲍熹;侯继波 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2013-06-25 - 公布日： 2013-09-18 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供一种重组噬菌体双表达载体及应用，涉及生物技术领域。所述重组噬菌体双表达载体，是在T7噬菌体基因组中p10B基因的下游插入目的基因1，在T7噬菌体基因组中非编码区插入含有目的基因2的真核表达盒后得到的重组双表达载体。本发明重组噬菌体双表达载体，稳定性高，能够在噬菌体表面展示目的基因1编码的蛋白，同时能够将真核表达盒运到免疫细胞内部，实现目的基因2的真核表达，可作为各种抗原表位多肽表达的通用平台。
一种重组噬菌体表达载体应用

[发明专利]用于制备真核表达构建体的前T载体及其制备方法和应用-CN200910063275.9无效
发明人：刘庭凯;桂建芳;张义兵;蒋芳芳 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2009-07-21 - 公布日： 2010-01-20 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于制备真核表达构建体的前T载体及其制备方法和应用，涉及T载体制备技术领域。本前T载体是在现有的质粒型真核表达载体中引入Kozak序列和XcmI盒或AhdI盒，再利用XcmI酶切或AhdI酶切，形成T载体，再利用该T载体可以直接克隆PCR产物。本前T载体的制备方法是：①制备含有Kozak序列和XcmI盒的真核表达载体通用插入序列；②制备真核表达前T载体。本发明的前T载体是以质粒形式存在，可以通过细菌扩增而源源不断地获得；可用于直接克隆PCR产物，简化了对PCR产物和载体进行双酶切的过程；使得引物设计更加简便；可以提高外源蛋白的表达效率；适用于用TA克隆的方法快速制备各种真核表达构建体
用于制备表达构建载体及其方法应用

[发明专利]一种鸡传染性喉气管炎双价核酸疫苗及其制备方法-CN201010228651.8无效
发明人：陈红英;崔保安;魏战勇;邵攀峰;刘金朋;王淑娟;朱前磊;王子馨;钞安军 -专利权人：河南农业大学
申请日： 2010-07-16 - 公布日： 2011-02-16 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种鸡传染性喉气管炎双价核酸疫苗，在真核表达载体pIRES的2个多克隆位点中分别插入了ILTV HN1株gB和ChIL-18完整基因，所述双价核酸疫苗共表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因和鸡IL本发明采用的真核双表达载体pIRES在启动子下游的MCS A和MCS B的多克隆酶切位点分别插入鸡传染性喉气管炎病毒HN1株gB基因片段和鸡白介素-18基因片段，获得真核双表达质粒pIRES-gB/IL18
一种传染性气管炎核酸疫苗及其制备方法

[发明专利]一种新疆出血热病毒多表位真核表达载体pVAX-MEPX2的构建及应用-CN201811085515.0在审
发明人：孙素荣;俞欢;阿来·沙力塔那;李轶杰;张富春 -专利权人：新疆大学
申请日： 2018-09-18 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N15/40 文献下载
摘要：本发明公开了一种在制备新疆出血热药物应用的重组真核表达载体，通过新疆出血热病毒多表位双拷贝基因片段MEPX2与真核表达载体pVAXⅠ组合而成真核表达载体，合理的表位设计提高了免疫效力，并且具有将免疫反应集中于保守表位的能力通过选择新疆出血热病毒YL04057株多表位双拷贝基因片段MEPX2与真核表达载体pVAXⅠ重组成真核表达载体并与蛋白质疫苗联合免疫，克服了单一抗原产生的免疫保护效果差的缺点，具有良好的开发应用前景。
表位新疆出血热病毒真核表达载体真核表达载体pVAX 蛋白质疫苗单一抗原拷贝基因重组真核表达载体免疫保护效果细胞免疫水平保守表位开发应用抗体水平免疫动物免疫效果免疫效力免疫原性药物应用重组质粒构建制备联合试验应用

[发明专利]副溶血弧菌二价DNA疫苗及其制备方法和应用-CN201010292253.2无效
发明人：陈吉祥;刘瑞;何庆芳;徐广峰 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2010-10-26 - 公布日： 2011-01-19 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明涉及副溶血弧菌二价DNA疫苗及其制备方法和应用，其特征是将副溶血弧菌tdh2基因和vps基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-vps融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括：利用双酶切技术使基因tdh2和vps获得粘性末端后相连，并克隆到原核表达载体pET28a中构建得到融合基因蛋白原核表达工程载体；再通过双酶切技术，将该融合基因插入到真核载体中构建得到融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；最后用常规的方法制成副溶血弧菌二价
溶血弧菌二价 dna 疫苗及其制备方法应用

[发明专利]一种人甲状旁腺激素真核表达重组质粒载体及其构建方法-CN202011114208.8在审
发明人：赵振林;樊敏;黄晨宸;赵晨野 -专利权人：深圳市瑞普逊科技有限公司
申请日： 2020-10-19 - 公布日： 2020-12-29 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及基因药物领域，具体提供了一种人甲状旁腺激素真核表达重组质粒载体及其构建方法。该构建方法包括如下步骤：人工合成甲状旁腺激素（hPTH1‑84aa)基因（SEQ ID NO.1）,经PCR扩增获得甲状旁腺激素基因片段，用限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切PCR产物后,与经相同酶切的真核表达载体质粒PHY‑810连接,将连接好的表达载体转化感受态细菌,涂板筛选得到人PTH基因真核表达重组质粒载体（图1：PHY‑PTH）。本发明所构建的真核表达重组质粒载体使细胞高表达PTH，可用于针对甲状旁腺功能减退症和骨质疏松的基因治疗。
一种甲状旁腺激素表达重组质粒载体及其构建方法

[发明专利]一种酿酒酵母整合型表达载体-CN201310003066.1有效
发明人：贺鹏;张新杰;陶勇 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2013-01-05 - 公布日： 2014-07-09 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明提供了一种双链DNA片段，自上游至下游依次包括如下元件：酿酒酵母染色体上游同源臂、真核启动子、酿酒酵母的IRES序列、真核筛选基因、真核转录终止序列和酿酒酵母染色体下游同源臂。本发明还保护含有所述双链DNA片段的质粒，即为酿酒酵母整合型表达载体，能够使外源或内源基因在酿酒酵母中表达，并且无需诱导，利用酿酒酵母生产目的蛋白，或用于基因工程菌株的代谢途径构建。
一种酿酒酵母整合表达载体

[发明专利]小鼠CRABP2基因真核表达载体的构建及应用-CN201510591834.9在审
发明人：袁晶;陶恒勋 -专利权人：长江大学
申请日： 2015-09-17 - 公布日： 2016-02-03 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：一种小鼠CRABP2基因真核表达载体的构建，包括以下步骤：(1)、提取小鼠肌肉组织中的总RNA，合成cDNA第一链后，以合成的cDNA第一链为模板进行扩增，获得CRABP2基因；(2)、将步骤(1)中获得的产物克隆到pGEM-T easy载体，测序，将测序获得的阳性重组子命名为pGEM-T-CRABP2；(3)、将步骤(2)中的阳性重组子pGEM-T-CRABP2与真核表达载体pcDNA3.1(+)经双酶切后进行连接、转化，得到小鼠CRABP2真核表达载体。其优点是：利用一对引物进行PCR扩增，克隆得到小鼠CRABP2基因的完整编码区，并成功构建CRABP2基因的真核表达载体。
小鼠 crabp2 基因表达载体构建应用

[发明专利]一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型及其应用-CN201911077819.7在审
发明人：王选年;孙国鹏;何海汛;岳锋;李鹏;张艳芳;朱艳平;郭东光;陈威;李丹;蒋力维 -专利权人：新乡学院
申请日： 2019-11-06 - 公布日： 2020-01-07 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：一种细胞膜表面展示含双信号肽PD‑1蛋白的细胞模型及其应用，细胞模型是可表达PD‑1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞，真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成，真核荧光表达载体在293T
细胞模型真核宿主细胞成熟蛋白荧光表达信号肽真核蛋白细胞膜细胞膜表面信号肽序列真核细胞膜蛋白展示全长序列瞬时表达细胞表面细胞形成多肽构建抗体锚定转染应用展示筛选细胞基因

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