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[发明专利]连接酶融合蛋白及其应用-CN202180092322.1在审
发明人：秦刚;吕操;约阿希姆·沃尔特;R·沃纳;钟云鹏 -专利权人：启德医药科技（苏州）有限公司
申请日： 2021-01-28 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：具体地，提供连接酶融合蛋白和包含其的固定化连接酶。本发明还提供所述连接酶融合蛋白或固定化连接酶在制备偶联物中的用途。本发明进一步提供使用连接酶或连接酶单元制备偶联物的方法。
连接酶融合蛋白及其应用

[发明专利]连接酶融合蛋白及其应用-CN202210090945.1有效
发明人：秦刚;吕操;约阿希姆·沃尔特;R·沃纳;钟云鹏 -专利权人：启德医药科技（苏州）有限公司
申请日： 2022-01-26 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：具体地，提供连接酶融合蛋白和包含其的固定化连接酶。本发明还提供所述连接酶融合蛋白或固定化连接酶在制备偶联物中的用途。本发明进一步提供使用连接酶或连接酶单元制备偶联物的方法。
连接酶融合蛋白及其应用

[发明专利]T4 DNA连接酶的制备方法-CN202310182419.2在审
发明人：罗漫杰;施婧妮;陈俊颖;吕梦娴;徐灿;王梁 -专利权人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司
申请日： 2023-02-27 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明涉及T4DNA连接酶的制备方法。该T4DNA连接酶的制备方法，包括如下步骤：对含有T4DNA连接酶的粗酶液进行阴离子交换层析，得到第一洗脱液；对第一洗脱液进行疏水层析或者复合模式层析，得到第二洗脱液；对第二洗脱液进行亲和层析，得到T4DNA连接酶。将含有T4DNA连接酶的粗酶液进行三步层析，能够去除粗酶液中的各种杂质，使制备得到的T4DNA连接酶具有较高的活性。在与市售T4DNA连接酶在连接效率相当的前提下，上述T4DNA连接酶的制备方法得到的T4DNA连接酶稀释100倍至400倍后的连接效率高于市售T4DNA连接酶，具有较高的酶活性。
t4 dna 连接酶制备方法

[发明专利]多种连接酶的组合物、系统以及方法-CN201780015885.4有效
发明人：郑钰;洪曼青 -专利权人：瑞尔基因公司
申请日： 2017-02-07 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本文提供了使用多种连接酶的组合物、系统、以及方法，其中至少一种连接酶是腺苷酸化缺陷型ATP依赖性连接酶或未腺苷酸化的ATP依赖性连接酶(例如存在于无ATP混合物中)。在某些实施方式中，使用多种连接酶来使预腺苷酸化的双链序列与非腺苷酸化的双链序列连接(例如所述腺苷酸化缺陷型ATP依赖性连接酶或未腺苷酸化的ATP依赖性连接酶连接第一链，并且第二连接酶连接第二链)。在其他实施方式中，本文提供了突变型T4连接酶(例如K159S突变体或K159C突变体)。
多种连接酶组合系统以及方法

[发明专利]一种新型的DNA合成连接酶-CN202210877668.9在审
发明人：李森;张伦;雍德祥;孙伟 -专利权人：通用生物（南京）有限公司
申请日： 2022-07-25 - 公布日： 2022-09-16 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型的DNA合成连接酶，包括改性TaqDNA聚合酶、柔性linker和T4连接酶；或改性TaqDNA聚合酶、柔性linker和T7连接酶；或还包括改性TaqDNA聚合酶+柔性linker+Thermusaquaticus连接酶，或改性TaqDNA聚合酶+柔性linker+Thermusthermophilus连接酶；制备方法，包括以下步骤：将Taq酶的DNA合成活性结构域，与常温或高温连接酶的连接结构域，以柔性linker加以连接，形成融合的双功能蛋白；使其同时具有DNA片段合成活性，和小片段连接活性；本发明将大大提高DNA连接酶合成效率。
一种新型 dna 合成连接酶

[发明专利]一种孝顺竹来源的蛋白连接酶原或酶及其应用-CN202310776481.4在审
发明人：何胜祥;郭占云;王薪博;张聪慧;刘雅雯;翁洁 -专利权人：安徽同科生物科技有限公司
申请日： 2023-06-28 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种孝顺竹来源的蛋白连接酶原或酶及其应用。所述蛋白连接酶酶原氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其突变体与SEQ ID NO:1相比具有G217V差异。本发明还公开了蛋白连接酶原激活后相应的蛋白连接酶或其突变体，编码酶原或酶的多核苷酸、包含其的重组表达载体和转化体，以及包含它们的试剂盒。本发明还公开了蛋白连接酶或蛋白连接酶突变体的制备方法、AEP型蛋白连接酶的辅助激活的方法以及利用蛋白连接酶连接或环化多肽或蛋白的方法。本发明从孝顺竹中鉴定出一个新的AEP型蛋白连接酶，其突变体具有相当高的蛋白连接酶活力，且水解酶活力显著降低，能有效催化蛋白质分子间连接和多肽分子内环化，有望作为一个新的工具酶。
一种孝顺来源蛋白连接酶及其应用

[发明专利]ATP依赖性DNA连接酶-CN202180038971.3在审
发明人：贝恩德·克特尔森·斯特里伯尼;特蕾莎·索尔斯塔德;奥拉夫·拉纳斯 -专利权人：阿克蒂克塞姆股份有限公司
申请日： 2021-03-31 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明涉及连接酶领域。更具体地说，本发明涉及新的并且高效的ATP依赖性DNA连接酶，其具有独特的连接酶活性，使得该连接酶在各种分子生物学技术中特别有用。此外，本发明涉及包含所述DNA连接酶的组合物和试剂盒、其制造和使用方法。
atp 依赖性 dna 连接酶

[发明专利]一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力的组合物、方法及其应用-CN202210120982.2在审
发明人：郭占云;张聪慧;邵晓霞 -专利权人：同济大学
申请日： 2022-02-09 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力的新方法，该方法对各种蛋白连接酶普遍适用，可用于已知蛋白连接酶的表征、活力跟踪及抑制剂筛选，也可用于从植物及其它来源筛选各种新型蛋白连接酶。本发明的特征是通过重组表达或其它方法在无活力的NanoLuc萤光素酶大片段(LgBiT)的C‑端融合蛋白连接酶的识别序列，通过化学合成或其它方法在低亲和力的SmBiT互补标签的N‑端引入蛋白连接酶识别的亲核进攻序列该活力测定方法基于生物发光检测，具有灵敏度高、操作简便、抗蛋白酶干扰、适于高通量筛选等优点，对于研究已知蛋白连接酶或筛选未知蛋白连接酶具有重要作用。
一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力组合方法及其应用

[发明专利]一种邻近生物素连接酶及其应用-CN202110545864.1有效
发明人：李栋;王新禹 -专利权人：中国科学院生物物理研究所
申请日： 2021-05-19 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程，进一步的说是基因工程改造的邻近生物素连接酶，具体的说一种用邻近生物素连接酶进行蛋白质邻近标记及其应用。邻近生物素连接酶为生物素连接酶中位于ATP或者生物素结合口袋的催化中心位点附近定点插入非天然氨基酸。所得邻近生物素连接酶在未经过特定波长紫外照射或者未与特定化合物孵育时，抑制其邻近生物素连接酶的酶活性。而后对所得邻近生物素连接酶进行特定紫外波长照射或者加入特定化合物，将非天然氨基酸转化为天然氨基酸，恢复其酶活性。本发明邻近生物素连接酶可以消除以往生物素连接酶的非特异性背景，极大提高鉴定特定细胞器内蛋白质组的特异性。
一种邻近生物素连接酶及其应用

[发明专利]基于其NAD依赖性DNA连接酶活性来检测微生物-CN200880104327.6无效
发明人：克里斯托弗·约翰·斯坦利;斯图尔特·威尔逊 -专利权人：微敏医疗技术有限公司
申请日： 2008-07-09 - 公布日： 2010-09-29 - 主分类号： C12Q1/25 文献下载
摘要：NAD依赖性连接酶被鉴定可作为样品中微生物的指示物。检测样品中表达NAD依赖性连接酶之微生物存在的方法，其包括以下步骤：(a)将样品与作为样品中NAD依赖性连接酶活性之底物的核酸分子接触；(b)在适合NAD依赖性连接酶活性的条件下孵育如上接触的样品；以及(c)特异性测定由NAD依赖性连接酶针对底物核酸分子之作用产生的经连接核酸分子的存在，以指示表达NAD依赖性连接酶之微生物的存在。基本不含核酸酶和/或连接酶污染物的溶葡萄球菌素制剂通过加热含有核酸酶和/或连接酶污染物的溶葡萄球菌素制剂而获得，其在降低核酸酶和/或连接酶的活性而基本不影响溶葡萄球菌素之内肽酶活性的条件下进行。
基于 nad 依赖性 dna 连接酶活性检测微生物

[发明专利]一种用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒及酶活测定方法-CN202311189903.4在审
发明人：卢润丰;何文龙;庄志华;王春香 -专利权人：江苏康为世纪生物科技股份有限公司
申请日： 2023-09-15 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12Q1/25 文献下载
摘要：本发明涉及基因测序领域，具体地说，本发明涉及一种用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒及酶活测定方法。本发明的用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒，包括用于检测T4 DNA连接酶活性的反应底物原料，还包括T4 DNA连接酶稀释液和T4 DNA连接酶反应缓冲液。本发明解决了现有测活方法操作繁琐、步骤复杂的弊端；不需要使用噬菌体单链DNA作为反应底物，因此不会产生噬菌体残留的风险，也不需要借助荧光基团或者染料，避免了需要特定准备荧光酶标仪或者荧光分光光度计，本发明提供的T4 DNA连接酶检测试剂盒及测活方法，降低了T4 DNA连接酶测活的仪器成本、耗材成本，从而降低测活门槛。
一种用于 t4 dna 连接酶活检测试测定方法

[发明专利]靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶及其制备方法和应用-CN202310604347.6在审
发明人：蒋兴宇;李轩宇;李家安 -专利权人：南方科技大学
申请日： 2023-05-24 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于生物医药领域，公开了靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶及其制备方法和应用。该嵌合泛素连接酶包括KRAS结合结构域和E3泛素连接酶结合蛋白；KRAS结合结构域包括RAF1(52‑188)、ARAF、PIP5K1A、RASSF2、APP、KRAS、RAF1中的至少一种。本发明还公开了编码上述嵌合泛素连接酶的核酸分子；包括上述核酸分子的载体；包括上述核酸分子或载体的宿主细胞；嵌合泛素连接酶的制备方法；及该酶在制备降解KRAS蛋白的制剂或治疗KRAS相关癌症的药物中的应用本发明的嵌合泛素连接酶能降解不同的突变型KRAS。
靶向降解 kras 嵌合连接酶及其制备方法应用

[发明专利]序列偏倚降低的热稳定连接酶-CN202180049533.7在审
发明人：瑞安·查尔斯·赫勒;托马斯·威廉·肖恩费尔德;帕特里克·巴查德 -专利权人：凯杰贝佛利有限公司
申请日： 2021-06-17 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明涉及DNA和/或RNA连接酶、其氨基酸序列、其核酸序列和由这些核酸序列编码的DNA和/或RNA连接酶蛋白质，以及包含所述DNA和/或RNA连接酶的核酸或氨基酸序列的部分的核酸或氨基酸构建体。本发明还涉及将所述DNA和/或RNA连接酶用于分子生物学测定法和分子诊断应用的方法以及包含所述DNA和/或RNA连接酶的试剂盒。
序列偏倚降低稳定连接酶

[发明专利]一种新型蛋白质生物素连接酶及基于其的邻近标记系统PhastID-CN202111302493.0有效
发明人：松阳洲;冯然;刘峰;吴苏;李克成;李影影;周志芬;李若菲;刘熠 -专利权人：中山大学
申请日： 2021-11-04 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型蛋白质生物素连接酶及基于其的邻近标记系统PhastID。具体公开了蛋白质生物素连接酶BPL及改造后的突变蛋白质生物素连接酶BPL*及基于上述生物素连接酶BPL或BPL*的邻近蛋白标记系统PhastID。所述包含蛋白质生物素连接酶BPL*的标记系统，相比与传统的BioID邻近标记系统，其标记强度更高，所需标记时间更短，具有较大的应用前景。
一种新型蛋白质生物素连接酶基于邻近标记系统 phastid

[发明专利]中国明对虾泛素连接酶基因及其编码的泛素连接酶与应用-CN201010254801.2无效
发明人：王金星;赵小凡 -专利权人：山东大学
申请日： 2010-08-17 - 公布日： 2011-01-12 - 主分类号： C12N15/52 文献下载
摘要：本发明公开了一种中国明对虾泛素连接酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并提供了其重组表达与纯化方法。本发明还提供了中国明对虾泛素连接酶基因编码的泛素连接酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并提供了该基因序列的用途、泛素连接酶的用途：可以利用中国明对虾泛素连接酶基因制备原核表达载体，转化大肠杆菌利用本发明获得的重组的泛素连接酶蛋白可用于抗病毒的饲料添加剂、动植物基因转化和药物开发。
中国对虾连接酶基因及其编码应用

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