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[发明专利]人乳头瘤病毒和热休克蛋白重组蛋白的制备方法-CN201910704904.5有效
发明人：孙昌荣;李利华;李慎涛;王志 -专利权人：北京泓恩生物科技有限公司
申请日： 2019-07-31 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供一种人乳头瘤病毒和热休克蛋白重组蛋白的制备方法，包括：A、构建表达人乳头瘤病毒和热休克蛋白重组蛋白的工程菌；B、诱导表达及目的蛋白纯化；其中，所述工程菌是将重组蛋白的编码基因经密码子优化后构建到利用本发明提供的人乳头瘤病毒和热休克蛋白重组蛋白的优化基因能够获得高效表达，目的蛋白的表达水平占全菌蛋白的20％。在蛋白纯化过程中，包涵体采用十二烷基肌氨酸钠溶解，结合柱上复性，有效避免了工艺复杂，减少了变性剂尿素或盐酸胍的使用，减少了废液排放，本方法具有成本低、复性率高以及操作方便等诸多优点，为人乳头瘤病毒和热休克蛋白重组蛋白的制备提供了新思路
乳头病毒休克蛋白重组制备方法

[发明专利]一种病毒囊膜蛋白装配系统及其方法和应用-CN201911075506.8在审
发明人：董春升;刘牧龙 -专利权人：深圳普菲科生命科技有限公司
申请日： 2019-11-06 - 公布日： 2021-05-07 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本申请提供了一种病毒囊膜蛋白装配系统，其制备方法及应用。所述囊膜蛋白装配系统包含依次连接的分泌肽信号序列，外源装配目的蛋白分子和跨膜区(TM)。其方法为利用基因合成技术，将含有分泌肽信号序列、外源装配目的蛋白分子、跨膜区的多组件整合到基因表达载体中，转染细胞，然后以病毒感染细胞。本申请的方案可用于溶瘤病毒或病毒疫苗候选载体的改造，所述囊膜蛋白装配系统能够在病毒表面进行正确组装。病毒囊膜装配外源装配目的蛋白分子后，重组病毒的施用途径和应用得到更多拓展。
一种病毒膜蛋白装配系统及其方法应用

[发明专利]利用表面等离子共振传感器检测抗草甘膦CP4-EPSPS蛋白的方法-CN201410049537.7有效
发明人：黄新;杜方 -专利权人：中国检验检疫科学研究院
申请日： 2014-02-13 - 公布日： 2014-05-14 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了利用表面等离子共振传感器检测CP4-EPSPS蛋白的方法。本发明提供了一种制备用于检测目的蛋白的SPR金片的方法，包括如下步骤：1）用巯基十一酸和3-巯基丙酸共修饰SPR金片，得到修饰后金片；2）将抗目的蛋白抗体固定到所述修饰后金片，得到用于检测所述目的蛋白的本发明的实验证明，本实验基于抗原抗体特异性结合的原理，依托SPR检测平台，建立了对CP4-EPSPS蛋白的新的检测方法，此方法相比较于常规的蛋白检测方法其优点在于，检测灵敏度高，操作简便、快捷，特异性好
利用表面等离子共振传感器检测抗草甘膦 cp4 epsps 蛋白方法

[发明专利]一种酵母菌重组表达载体及其构建方法与应用-CN202110621586.3有效
发明人：胡凡;王昭凯;杨隆河 -专利权人：自然资源部第三海洋研究所
申请日： 2021-06-03 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及一种酵母菌重组表达载体及其构建方法与应用，该酵母菌重组表达载体含有表达框，所述表达框依次包括位于同一顺反子的待表达目的蛋白的基因、蛋白酶酶切位点的编码序列与抗生素抗性基因；所述蛋白酶酶切位点能够被酵母菌中的蛋白酶特异性识别并切割本发明还提供了该酵母菌重组表达载体的构建方法及其在筛选高表达目的蛋白的重组酵母菌方面的应用。通过应用本发明的技术方案，可以快速、高通量地筛选得到高表达目的蛋白的重组酵母菌，与现有技术相比，显著减少了复筛时间，降低了假阳性率，提高了筛选效率。
一种酵母菌重组表达载体及其构建方法应用

[发明专利]超声穿孔转染细胞的方法-CN202011096422.5有效
发明人：宋一之;郄兴旺;马玉婷;王策 -专利权人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
申请日： 2020-10-14 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种超声穿孔转染细胞的方法，包括以下步骤：1)培养靶细胞；2)将靶细胞、目的对象和超声造影剂混合于容器中；3)使用超声波作用于所述容器；4)将所述容器在恒温条件下再培养，以使目的对象充分进入靶细胞；其中，目的对象为目的基因或目的蛋白，且当目的对象为目的基因时，所述步骤3)中采用的超声波的频率为800‑900kHz；当目的对象为目的蛋白时，所述步骤3)中采用的超声波的频率为800‑1200kHz。本发明的超声穿孔转染细胞的方法，操作简单，转染效率高，成本低，且本发明可以对DNA、RNA、蛋白、病毒、糖、药物、纳米颗粒了等不限定范围的分子进行转化或转染。
超声穿孔转染细胞方法

[发明专利]尿激酶受体稳定突变体suPARcc在真核胞外蛋白表达中的应用-CN202010565212.X在审
发明人：袁彩;黄明东;江龙光;李林林;林华建 -专利权人：福州大学
申请日： 2020-06-19 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及可溶性尿激酶受体突变体suPARH47C/N259C(suPARcc)在真核胞外蛋白表达中的应用，具体是通过融合表达的方式提高外源蛋白质的表达量，同时利用suPARcc与配体ATF的高亲和性，利用ATF亲和柱从大体积的发酵液中直接高效地捕获目的蛋白。本申请是将suPARcc和常规蛋白酶切位点整合至真核表达系统载体，获得suPARcc基因融合表达载体。待表达的目的基因和suPARcc基因以正确阅读框融合，构建融合表达重组质粒。融合表达重组质粒经转染和稳定细胞系筛选，在真核细胞经诱导分泌表达获得含标签和目的蛋白的融合蛋白，融合标签最后可以通过常规蛋白酶去除。
尿激酶受体稳定突变体 suparcc 真核胞外蛋白表达中的应用

[发明专利]一种基于免疫磁珠富集古代壁画三种胶结物的方法-CN202211588034.8在审
发明人：张秉坚;孙晓路;陈卫祥 -专利权人：浙江大学
申请日： 2022-12-12 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： G01N33/532 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于免疫磁珠富集古代壁画三种胶结物的方法，对存在于蛋清中的卵清蛋白、奶类中的酪蛋白以及桃胶进行高效富集。该方法通过分别修饰卵清蛋白抗体、酪蛋白抗体以及桃胶抗体三种抗体于proteinA磁珠从而制备偶联抗体的免疫磁珠，在加入目的蛋白后磁珠的抗体可以通过抗体‑抗原的特异性反应捕获复杂古代壁画样品中的特定胶结物蛋白，从而达到高效富集的目的。本发明通过简单高效的检测分析方法实现对胶结物的有效富集，避免复杂样品中的干扰物质对目的蛋白检测分析的影响，该方法不仅实现对古代壁画中胶结物的分析检测，可以推广到对其他考古样品，如灰浆等掺有胶结物的样品。
一种基于免疫富集古代壁画胶结方法

[发明专利]一种全能核酸内切酶的表达纯化方法-CN201910836871.X在审
发明人：李颖洁;刘一璇;杨青 -专利权人：上海药明康德新药开发有限公司
申请日： 2019-09-05 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开一种全能核酸酶表达纯化方法，包括以下步骤：1)表达步骤：含目的基因的大肠杆菌在基础培养基生长，并加入诱导剂异丙基‑P‑D‑硫代半乳糖对目的蛋白进行诱导表达；所述目的基因含全能核酸酶序列，且全能核酸酶序列的前端具有编码6xHis标签；所述目的蛋白为包涵体；2)包涵体变复性：所述步骤1)得到的包涵体通过稀释变复性获得可溶的有活性的目的蛋白；3)纯化步骤：目的蛋白通过亲和层析纯化、酶切、反挂，得到高纯度的全能核酸酶。
目的蛋白核酸酶核酸内切酶包涵体目的基因复性亲和层析纯化大肠杆菌基础培养基工业领域诱导表达半乳糖高纯度高活性异丙基诱导剂可溶硫代酶切稀释生产成本标签生长科研应用

[发明专利]一种红米稻血红素结合蛋白的原核细胞高效表达方法-CN202210072817.4在审
发明人：方庆;黄卉;王海洋 -专利权人：湖北民族大学
申请日： 2022-01-21 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明公开了一种红米稻血红素结合蛋白的原核细胞高效表达方法，涉及原核细胞表达技术领域，包括以下步骤：植物材料准备，对红米稻进行无菌消毒，进行培养箱培养，取少量无菌红米稻幼苗样品，采用Trizol法提取红米稻总RNA；RT‑PCR扩增目的基因，目的基因与重组表达载体连接，重组载体转化大肠杆菌细胞，目的蛋白大肠杆菌诱导表达与检测，本发明采用现代基因工程策略，通过对红米稻总RNA提取、RT‑PCR扩增目的基因。将目的基因与重组表达载体连接，再重组载体转化大肠杆菌细胞，实现红米稻中一个血红素结合相关的目的蛋白基因在原核细胞大肠杆菌中高效表达，为该类型植物源性血红素结合相关蛋白的大量获得及其活性鉴别和运用提供了关键技术条件和基础
一种红米稻血红素结合蛋白原核细胞高效表达方法

[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的筛选互作蛋白的方法-CN201610076717.3有效
发明人：王建;商立民;贺福初;原艳芝 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2016-02-03 - 公布日： 2019-08-02 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于双分子荧光互补技术的筛选互作蛋白的方法。该方法包括：1)将YGFP分成N端(序列1第1‑157位)和C端(序列1第158‑238位)；在N端编码基因3’末端通过连接序列(编码序列2所示连接肽)连接目的蛋白A的编码基因，形成融合基因片段A；在C端编码基因5’或3’末端通过所述连接序列连接目的蛋白B的编码基因，形成融合基因片段B；2)将融合基因片段A和B导入受体酵母细胞，培养所得转基因酵母细胞，检测其是否产生绿色荧光，若产生绿色荧光，则目的蛋白A与B互作或候选互作；若不产生绿色荧光，则目的蛋白A与B不互作或候选不互作。本发明建立的BiFC技术具有较高的敏感性和特异性，适合于在酵母中开展高通量蛋白质相互作用筛选。
一种基于分子荧光互补技术筛选蛋白方法

[发明专利]硫化叶菌蛋白复合物的表达载体的构建及表达纯化方法-CN201810206123.9在审
发明人：周敏;祝发鹏;卢颖洪;路俊欣 -专利权人：南京理工大学
申请日： 2018-03-13 - 公布日： 2018-08-24 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种硫化叶菌蛋白复合物的表达载体的构建及表达纯化方法。所述的构建方法利用大肠杆菌质粒给硫化叶菌目标蛋白复合物的亚基基因带上10×His‑StrepⅡ标签序列，然后将带标签的目的基因连接到pSeSD中，得到pSeSD表达载体，再将pSeSD表达载体转化到硫化叶菌中，阿拉伯糖诱导目的基因表达，通过该亚基与蛋白复合物其他亚基间的相互作用，利用目的蛋白上的His标签纯化整个蛋白复合物。
硫化蛋白复合物表达载体复合物构建目的基因大肠杆菌质粒阿拉伯糖标签序列目标蛋白目的蛋白亚基基因诱导标签转化研究

[发明专利]挖掘真核生物基因转录调控组差异蛋白的方法-CN201210348284.4无效
发明人：孟庆勇;王萌;高婧;李宁 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2012-09-18 - 公布日： 2013-01-23 - 主分类号： C07K1/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种挖掘真核生物基因转录调控组差异蛋白的方法，首先将5’或3’端带有生物素的启动子序列或其片段与表面吸附有链亲和素的磁珠结合，形成磁珠-启动子二元复合物，然后从组织或细胞中提取特定时期的核蛋白，与磁珠-启动子二元复合物结合形成磁珠-启动子-核蛋白三元复合物，对该三元复合物进行SDS-PAGE分析，找出差异条带，以确定所要候选目的蛋白的片段长度，然后进行二维电泳分离提纯目的蛋白，并对纯化的目的蛋白进行质谱分析，从而确定所含蛋白。为从转录水平上研究基因表达的调节，寻找新蛋白并了解其对转录调节的作用提供了新思路，并为进一步阐明某些疾病的发病机制及基因治疗奠定了基础。
挖掘生物基因转录调控差异蛋白方法

[发明专利]一种增强蛋白降解多肽的发现及应用-CN201910383227.1有效
发明人：尹秀山;李学龙;李根 -专利权人：拜澳泰克（沈阳）生物医学集团有限公司
申请日： 2019-05-09 - 公布日： 2023-03-10 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强目的蛋白降解的多肽。所述多肽信息包括编码多肽的cDNA序列，RNA序列和蛋白序列及其延伸序列、修饰过的氨基酸序列以及同5源性不低于70%的蛋白序列。本发明还提供了一种增强蛋白降解多肽的应用，通过与目的蛋白融合，该多肽可以特异增强自身降解并可以介导融合蛋白的共降解，其降解程度显著，可以达到近乎敲除的效果。该多肽可用做调控蛋白水平的工具，在体外或者体内调节融合蛋白的表达水平来研究其功能和调节生物学通路。该多肽可以通过体内和体外合成得到，方便快捷，为今后关于蛋白聚集疾病的治疗提供新的途径和方法。
一种增强蛋白降解多肽发现应用

[发明专利]一种弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的制备方法-CN201410468090.7在审
发明人：沈鹤霄;华权高 -专利权人：沈鹤霄
申请日： 2014-09-15 - 公布日： 2015-01-21 - 主分类号： C07K16/20 文献下载
摘要：一种弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的制备方法，包括如下步骤：(1)选择目的片段作为表达重组蛋白的目的基因；(2)弓形虫致密颗粒蛋白6的合成；(3)弓形虫致密颗粒蛋白6的分离纯化；(4)制备兔抗弓形虫致密颗粒蛋白6多克隆抗体：用步骤(3)纯化后的重组弓形虫致密颗粒蛋白6作为抗原去免疫兔子，得到含抗重组弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的抗血清；(5)对步骤(4)中得到的抗弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的抗血清进行分离纯化，得到抗重组弓形虫致密颗粒蛋白该方法制备的抗体干粉可作为血清学检查的诊断原料，且本发明弓形虫致密颗粒蛋白6表达产量高。
一种弓形虫致密颗粒蛋白抗体制备方法

[发明专利]一种高活性极细链格孢激活蛋白的制备工艺-CN202310589596.2在审
发明人：洪恒伟;张蕊;蒋梦琴;谢成锋;金志敏 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2023-05-24 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C07K14/37 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程法制备蛋白领域，具体涉及一种高活性极细链格孢激活蛋白的制备工艺。本发明采用基因工程的方法，人工合成表达极细链格孢激活蛋白(PeaT1)的目的基因peaT1，将该目的基因peaT1与质粒整合，再导入到宿主细胞中以进行蛋白的诱导和表达，然后加入少量甜菜碱和海藻糖以起到协同增效的作用，通过反复冻融促进蛋白折叠以获得优势构象，使极细链格孢激活蛋白的活性大大提高，经蛋白纯化最终获得高活性的极细链格孢激活蛋白。
一种活性极细链格孢激活蛋白制备工艺