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[发明专利]用于水牛高低活力精子的Percoll连续密度梯度分离方法-CN201410558211.7在审
发明人：付强;张明;潘洪丽 -专利权人：广西大学
申请日： 2014-10-20 - 公布日： 2015-01-28 - 主分类号： C12N5/076 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于水牛高低活力精子的Percoll连续密度梯度分离方法，通过设置合理浓度的Percoll液叠放，静置使之形成连续密度梯度，将水牛精子置于分离液顶层，在离心机低温离心时，由于高活力精子和低活力精子在Percoll分离液中的沉降系数和沉降速率不同，离心结束后，高活力精子和低活力精子将分布在Percoll分离液中的不同密度层中，达到了有效分离水牛高低活力精子的目的。本发明的方法高效、分离稳定度高、费用低，可以替代传统的精子上浮法，克服了精子上浮法中分离数量少、时间久等缺陷，实现了高低活力水牛精子的高效、快速分离，解决了体外受精实验所需高活力精子的来源问题。
用于水牛高低活力精子 percoll 连续密度梯度分离方法

[发明专利]一种水牛睾丸精子细胞分离和鉴定方法-CN201811103634.4在审
发明人：张明;张鹏飞;黄愉淋;侯振 -专利权人：广西大学
申请日： 2018-09-20 - 公布日： 2019-01-11 - 主分类号： C12N5/076 文献下载
摘要：本发明属于精子细胞处理技术领域，具体涉及一种水牛睾丸精子细胞分离和鉴定方法，其主要包括以下步骤：1)获得水牛睾丸，用胶原酶IV、透明质酸酶和DNase I组合酶法消化，细胞筛过滤，差异贴壁后取悬浮细胞；有益效果：本技术方案为行之有效的水牛精子细胞分离方法，通过使用双酶法分解牛睾丸组织，得到单细胞悬液，采用连续差异贴壁法去除体细胞的干扰，再采用流式细胞仪根据未贴壁细胞染色后的荧光强弱，判断细胞DNA含量，有效消化和去除了二倍体精原细胞和四倍体初级经母细胞等其他非目标细胞的干扰，实现大量单倍体精子细胞的成功分选。
细胞分离水牛流式细胞仪悬浮细胞睾丸精子分选贴壁单倍体精子细胞单细胞悬液活细胞染色透明质酸酶未贴壁细胞胶原酶IV 精原细胞精子细胞连续差异目标细胞水牛精子荧光强弱有效消化睾丸组织细胞DNA 二倍体母细胞双酶法四倍体体细胞细胞筛组合酶染色睾丸去除过滤分解消化成功

[发明专利]一种分离哺乳动物XY精子的方法-CN200410060793.2无效
发明人：卢克焕;陆阳清;张明 -专利权人：广西大学
申请日： 2004-08-31 - 公布日： 2005-09-14 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：一种分离哺乳动物XY精子的方法，依据哺乳动物X精子的DNA含量比Y精子多的原理，利用荧光染料Hoechst33342对精子DNA染色之后通过流式细胞仪将其分离。本发明通过改进精子分离之前的保存方法、精子的稀释液、分离精子的鞘液和接收液，在保证分离XY精子效率的同时，提高了精子分离的准确率和分离后精子的活力，适用于黄牛、水牛、山羊等哺乳动物XY精子的大规模商业化分离生产
一种分离哺乳动物 xy 精子方法

[发明专利]分步提取水牛精子蛋白质的方法-CN201510148412.4在审
发明人：付强;张明;官俊良;黄德伦;陈富美 -专利权人：广西大学
申请日： 2015-03-31 - 公布日： 2015-07-08 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种分步提取水牛精子蛋白质的方法，采用三种裂解液分三步依次裂解精子细胞，达到对高、中、低亲水性蛋白质分步溶解的效果。将三次裂解后获得的上清混合，即得水牛精子的总蛋白质。本发明提取效率高、降解少、分离稳定度高、费用低，可以替代传统的蛋白质一步提取法，弥补了一步法中蛋白质提取不完全的缺陷，实现精子不同疏水性蛋白质和极端理化性质的蛋白质全部提取，达到呈现更多蛋白质信息的目的，解决了精子蛋白质制备问题。
分步提取水牛精子蛋白质方法

[发明专利]一种生产水牛可控性别体外胚胎的方法-CN200510031159.0无效
发明人：卢克焕;张明;陆阳清 -专利权人：广西大学
申请日： 2005-01-12 - 公布日： 2005-08-17 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：一种生产水牛可控性别体外胚胎的方法，利用屠宰场水牛卵巢回收卵母细胞(或通过活体采卵获取水牛卵母细胞)，经体外成熟培养后，与经流式细胞仪分离的新鲜或冷冻的良种公牛的X或Y精子进行体外受精。本发明的优点是可使胚胎生产性别化及工厂化，从而加快高产奶水牛扩繁速度。
一种生产水牛可控性别体外胚胎方法

[发明专利]一种槟榔江水牛精液冷冻工艺方法-CN201610462652.6有效
发明人：全凡凡;郭妮妮;熊明清;赫海龙;付平;胡立昌;张文昆;杨铭;汪又萍;杨华;张力青;杨凌;祁洁;叶敏;余毅;易川奇 -专利权人：湖北省畜禽育种中心
申请日： 2016-06-22 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及槟榔江水牛精液冷冻工艺方法领域，公开了槟榔江水牛精液制作时的一条冷冻曲线，包括下述步骤：(1)步骤一：精液的采集；(2)步骤二：精液的稀释；(3)步骤三：精液的分装与平衡；(4)步骤四：精液的冷冻该槟榔江水牛精液冷冻工艺方法的目的在于制作出一条冷冻曲线，在后期冷冻过程中，根据本曲线试验找出该品种槟榔江水牛精子在冷冻过程中不同阶段最适合的冷冻降温速率和危险温度区间，最终将其科研成果运用到生产实践中，提高生产质量和生产效率；且得出曲线V能明显提高该槟榔江水牛品种的冻后活力和降低畸形率，有效提高牛冻精生产质量和生产效率。
一种槟榔江水精液冷冻工艺方法

[发明专利]一种奶水牛养殖人工授精的方法-CN201510826147.0在审
发明人：陈兴 -专利权人：陈兴
申请日： 2015-11-25 - 公布日： 2017-05-31 - 主分类号： A01K67/02 文献下载
摘要：一种奶水牛养殖人工授精的方法，其特征为包括刺激发情、直肠触摸、配前处理、促进排卵、深部输精，本发明通过公牛试情，促进排卵；直肠触摸，准确把握卵巢成熟程度以及那边卵巢排卵；结合药物处理，受孕率和排卵数；深部输精，缩短精子和卵子运动过程，减小能力消耗，提高受孕率，可提高到85%，效果明显。
一种奶水养殖人工授精方法

[发明专利]一种提高奶水牛人工授精受胎率的方法-CN201510876741.0在审
发明人：陈兴 -专利权人：陈兴
申请日： 2015-12-03 - 公布日： 2016-02-24 - 主分类号： A61D19/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高奶水牛人工授精受胎率的方法，主要包括下述步骤：1、试情母牛，2、触摸直肠，3、配前处理，4、促进排卵，5、深部输精。与传统放任公母牛自由配种的方式不同，首先由结扎公牛试情，挑选出发情母牛，然后通过触摸直肠深处的卵巢，确定卵巢的发育是否健康良好，准确把握卵巢的成熟程度以及排卵情况，结合药物处理，提高受孕率和排卵数，深部输精则是缩短精子和卵子的运动过程奶水牛人工授精第一发情期的受胎率约为25%，采用本发明后，能够提高到85%，效果明显。
一种提高奶水人工授精受胎率方法

[发明专利]激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用-CN202111080386.8有效
发明人：杨春艳;尚江华;郑海英;李玲玉 -专利权人：广西壮族自治区水牛研究所
申请日： 2021-09-15 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明涉及水牛体外胚胎生产技术领域，特别涉及激活Wnt/β‑catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用，本发明针对水牛的Wnt/β‑catenin信号通路进行研究，最终发现，Wnt通路的抑制剂会降低水牛卵母细胞的成熟率，而Wnt通路的激活剂能提高水牛卵母细胞的成熟率。为此，申请人通过在水牛卵母细胞成熟液中添加Wnt通路激活剂氯化锂(LiCl)来实现提高水牛卵母细胞的成熟率、水牛胚胎分裂率和水牛胚胎囊胚率的目的，从而对水牛体外胚胎生产效率起到了良好的促进作用。
激活 wnt catenin 信号通路提高水牛体外胚胎生产效率中的应用

[发明专利]一种提高夏季水牛胚胎生产效率的方法-CN202211087371.9在审
发明人：杨春艳;尚江华;郑海英 -专利权人：广西壮族自治区水牛研究所
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2023-01-17 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开一种提高夏季水牛胚胎生产效率的方法，属于水牛体外胚胎发育技术领域。该方法为在常规培养水牛卵母细胞的基础下，体外成熟培养液中添加氯化锂和褪黑素联合培养水牛卵母细胞，胚胎培养阶段继续添加褪黑素培养。在本发明中，研究对比夏冬季水牛胚胎体外生产效率和牛体内的褪黑素，发现夏季水牛胚胎的体外生产效率显著低于冬季，且夏季水牛血液中的褪黑素浓度显著低于冬季水牛，推定褪黑素可以影响水牛卵泡发育，进而影响卵母细胞成熟和胚胎发育本技术方案中氯化锂作为Wnt/β‑catenin信号通路激活剂对水牛体外胚胎生产效率起到了良好的作用，因此添加褪黑素与氯化锂联合培养水牛卵母细胞，提高夏季水牛胚胎的体外生产效率。
一种提高夏季水牛胚胎生产效率方法

[实用新型]一种奶水牛牛栏-CN201621188208.1有效
发明人：苗永旺;王金梅;张永云;滕晓红 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2016-10-28 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： A01K1/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种奶水牛牛栏，属于奶水牛养殖技术领域，主要包括牛栏本体、门Ⅰ、门Ⅱ、圈养区、围栏；本实用新型通过在一个牛栏内设置两个圈养区，两个圈养区之间可以连通也可以单独分列，在圈养奶水牛时，两个圈养区单独分列，实现奶水牛的分区圈养及分圈管理；奶水牛出圈或进圈时，可将两个圈养区连通，使奶水牛从专供奶水牛进出的出口进出，两个圈养区之间设置供人行、储料以及喂料的通道，通道的入口与奶水牛的进出口分离，实现人牛出口的分离，避免发生牛踩踏人员的情况；同时，可对奶水牛进行保定和控制，便于对奶水牛进行全面的检查和疾病治疗，避免在对奶水牛检查和操作时，奶水牛乱动，影响工作人员的工作或伤害到工作人员。
一种奶水牛栏

[发明专利]抗水牛IgG单克隆抗体细胞株及其制备方法和应用-CN201811495602.3有效
发明人：吴文德;张为宇;侯林静 -专利权人：广西大学
申请日： 2018-12-07 - 公布日： 2022-02-01 - 主分类号： C12N5/20 文献下载
摘要：本发明公开了抗水牛IgG单克隆抗体细胞株及其制备方法和应用。本发明采用自主制备得到的抗水牛IgG单克隆抗体2G7建立检测水牛大片吸虫抗体的ELISA方法，可大量地对水牛进行快速准确的检测大片形吸虫病，对水牛实时情况进行检测，在预防或及时发现已患病的水牛的情况中有重要作用，能极大地加强水牛大片吸虫的防控力度。
水牛 igg 单克隆抗体细胞株及其制备方法应用

[发明专利]一种水牛乳酪蛋白抗氧化活性肽的制备方法-CN201810373234.9在审
发明人：李珊珊;步婷婷;吴建平 -专利权人：浙江大学
申请日： 2018-04-24 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种水牛乳酪蛋白抗氧化活性肽的制备方法，该方法包括：取新鲜水牛乳，经脱脂、沉淀和纯化处理后，得到水牛乳酪蛋白；将水牛乳酪蛋白溶解到缓冲溶液中，煮沸变性，再向缓冲溶液中加入嗜热脂肪芽孢杆菌蛋白酶进行酶解，酶解结束后煮沸灭酶，得到水牛乳酪蛋白酶解液；所述水牛乳酪蛋白酶解液依次经离心、超滤和纳滤处理后，冷冻干燥，得到水牛乳酪蛋白抗氧化活性肽粉。本发明从鲜水牛乳中分离、纯化得到水牛乳酪蛋白，并采用嗜热脂肪芽孢杆菌蛋白酶酶解水牛乳酪蛋白，经进一步分离纯化后，得到氮回收率高、分子量小、抗氧化活性强的水牛乳酪蛋白抗氧化活性肽粉。
水牛乳酪蛋白抗氧化活性肽嗜热脂肪芽孢杆菌乳酪蛋白酶缓冲溶液牛乳煮沸解液酶解制备蛋白酶蛋白酶酶解抗氧化活性纯化处理分离纯化纳滤处理新鲜水脱脂变性回收率超滤灭酶鲜水沉淀溶解

[发明专利]冲击噪声环境下的单快拍测向方法-CN201910103535.4有效
发明人：高洪元;杜亚男;程建华;孙志国;刁鸣;丁继成;李亮;李晋;池鹏飞;吕阔 -专利权人：哈尔滨工程大学
申请日： 2019-02-01 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： G01S3/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种冲击噪声环境下的单快拍测向方法，包括建立均匀线阵单快拍采样信号模型；构造基于高斯核的无穷范数协方差矩阵，获得基于高斯核的无穷范数单快拍极大似然方程；初始化非洲水牛种群；计算每头水牛位置适应度，记录每头水牛局部最优位置和整个非洲水牛群全局最优位置；更新水牛位置和水牛交流位置，产生斐波那契权重；利用斐波那契搜索策略更新每头水牛局部最优位置；计算每头水牛所在新位置的适应度，确定每头水牛的局部最优位置和非洲水牛群的全局最优位置；输出的非洲水牛群全局最优位置即为来波方向估计值。
冲击噪声环境单快拍测向方法

[发明专利]精子形态缺陷识别方法、精子形态分析仪及存储介质-CN202111277108.1在审
发明人：张游龙;刘晓康;陈齐文;权晓梅 -专利权人：深圳市瑞图生物技术有限公司
申请日： 2021-10-29 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： G06T7/00 文献下载
摘要：本申请公开了一种精子形态缺陷识别方法、精子形态分析仪及存储介质，其中，该方法包括：从精子染色图像中提取精子的精子头部图像；基于所述精子头部图像从所述精子染色图像中提取精子的精子整体图像；根据所述精子整体图像提取精子的精子骨架；获取所述精子骨架对应的精子各部位的骨架特征，其中，精子各部位包括精子头部、精子中段、精子尾部；根据精子各部位的骨架特征以及精子正常形态的骨架特征，识别精子各部位的形态缺陷，提高了精子形态缺陷识别的准确性和效率
精子形态缺陷识别方法分析存储介质

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