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[发明专利]小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法-CN200810155962.9无效
发明人：杨中州;吕镗烽;沈小昆;宋勇 -专利权人：南京大学
申请日： 2008-10-14 - 公布日： 2010-06-09 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：一种小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法，它是将包含小鼠Akt1基因启动子片段插入pBluescriptIISKM(pBS)载体的XbaI位点间，构建包含小鼠Akt1基因启动子片段的pBS/XbaI4.5质粒；然后，将包含小鼠Akt1基因第一编码外显子ATG片段插入pBluescriptIISKM载体的NotI位点间，构建包含小鼠Akt1基因第一编码外显子片段的pBS/LA1.9质粒；最后，将小鼠Akt1基因启动子插入pGL3-basic载体的SamI和NcoI位点间，构建小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒pGL3/mAkt1-pro。本发明利用分子克隆技术构建小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒，从而便于对抗肿瘤药物的筛选研究。
小鼠 akt1 基因启动子荧光质粒构建方法

[发明专利]一种猪NLRP3炎症小体体外模型的构建方法-CN201911092741.6在审
发明人：师福山;吕倩;郑梦洁;石玉华 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-11-11 - 公布日： 2020-02-18 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪NLRP3炎症小体体外模型的构建方法，包括构建重组质粒pCMV‑N‑MYC‑NLRP3、重组质粒pCMV‑N‑HA‑caspase‑1、重组质粒pCMV‑N‑HA‑ASC、重组质粒pCMV‑N‑MYC‑IL‑1β；将上述4个重组质粒共转染至HEK293T细胞内，经培养，得猪NLRP3炎症小体体外模型。由于HEK293T细胞本身并不表达NLRP3炎症小体的四个组分蛋白(NLRP3、ASC、pro‑caspase‑1、pro‑IL‑1β)，因此体外构建该NLRP3炎症小体的反应平台为后续开展猪相关炎性疾病的研究提供了重要模型
种猪 nlrp3 炎症小体体外模型构建方法

[发明专利]一种金黄色葡萄球菌转座子测序文库及构建方法-CN202010648075.6在审
发明人：罗东;陈开森;陈嫱;詹佳欢 -专利权人：南昌大学第一附属医院
申请日： 2020-07-07 - 公布日： 2020-09-15 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种金黄色葡萄球菌转座子测序文库及构建方法，所述构建方法包括：（一）质粒构建：先构建质粒骨架和转座子，再合成完整pSATn21质粒；（二）质粒转化：将pSATn21质粒转入DC10B修饰后再转入金葡菌本发明构建方法随机性更高，转座子随机插入至金黄色葡萄球菌基因组的TA位点中，且无偏嗜性；构建的文库为后期高通量筛选细菌耐药、不同条件下的生存能力等奠定基础。
一种金黄色葡萄球菌座子序文构建方法

[发明专利]三角褐指藻钙网蛋白基因过表达突变株的构建方法-CN202210922403.6在审
发明人：刘晓娟;王婉娜;杜虹;谢茜慧;陈基琛;杜华;刘子东;罗濠东;方浩 -专利权人：汕头大学
申请日： 2022-08-02 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N1/13 文献下载
摘要：本发明提供了一种构建三角褐指藻钙网蛋白基因过表达突变株的方法，具体步骤包括：1）构建过表达质粒：获取三角褐指藻钙网蛋白片段、荧光标记和质粒骨架，通过重组克隆试剂连接；2）转化验证：将构建所得的过表达质粒转化入感受态细胞，扩大培养后检测验证构建的过表达质粒的重组序列正确性；3）构建突变株：将验证正确的过表达质粒转化入三角褐指藻中。构建所得的三角褐指藻钙网蛋白基因过表达突变株可以应对胁迫环境，特别是在氮限制条件下能够令三角褐指藻保持较好的生长速率。
三角褐指藻钙网蛋白基因表达突变构建方法

[发明专利]乙肝病毒L基因和hGM-CSF的融合基因及其表达载体的构建与应用-CN200910037756.2无效
发明人：李君武 -专利权人：李君武
申请日： 2009-03-11 - 公布日： 2009-08-19 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种乙型肝炎病毒全包膜蛋白L基因与hGM-CSF基因的融合基因及其表达载体的构建与应用。该融合基因的真核表达载体pVAX1-L-hGM的构建和表达：设计扩增乙肝病毒全包膜蛋白L基因的1对引物和扩增hGM-CSF基因的1对引物；重组质粒pVL的构建；重组质粒pVAX1-L-hGM的构建；重组质粒该融合基因的酵母表达载体的构建和转化：设计扩增融合抗原基因L-linker-GM的1对引物；以质粒PVAX1-L-GM为模板扩增L-linker-GM；pPICZαC-L-GM酵母表达载体的构建；pPICZαC-L-GM
乙肝病毒基因 hgm csf 融合及其表达载体构建应用

[发明专利]一种表达ASFV P30蛋白的PRV gE/gI双基因缺失株的构建方法-CN202010322977.0在审
发明人：徐志文;朱玲;曾喻兵 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2020-04-22 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明公开了生物医药领域的一种表达ASFV P30蛋白的PRV gE/gI双基因缺失株的构建方法，具体包括以下步骤，S1：试剂准备；S2：克隆质粒的制备；S3：构建PRV真核转移质粒pEGFP‑CP204L；S4：PRV和pEGFP‑CP204L质粒DNA的共转染；合成P30蛋白基因(CP204L)片段，构建转移质粒pEGFP‑CP204L，利用经典的同源重组方式将ASFV CP204L基因插入PRV基因组替换gI和gE毒力基因，构建共表达P30蛋白的重组伪狂犬病毒株rXJ gE/gI‑CP204L可用于预防ASFV和PRV感染；克隆质粒制备简单，成本较低，适用于产业化生产。
一种表达 asfv p30 蛋白 prv ge gi 基因缺失构建方法

[发明专利]一种新城疫病毒双质粒拯救系统及其构建方法、鉴定方法与应用-CN202310443379.2在审
发明人：王建忠;王瑞楠;宗宪春;朱广美;段姝宇;胡静涛;杨桂连;王春凤 -专利权人：吉林农业大学
申请日： 2023-04-24 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种新城疫病毒双质粒拯救系统及其构建方法、鉴定方法与应用，先基于CMV启动子构建新城疫病毒LaSota株全基因组cDNA克隆质粒，然后构建可同时表达NP、P、L蛋白的多启动子单辅助质粒pCI‑NPL，最终建立了双质粒病毒拯救系统，并成功产生了具有感染性的新城疫子代病毒颗粒。基于EGFP报告基因进行拯救效率评价的结果显示，双质粒系统的拯救效率更高。此外通过血凝效价、EID50、MDT、ICPI、IVPI检测结果表明，重组病毒rLaSota和rLaSota‑EGFP具有与亲本野生型毒株相似的生物学特性，为新城疫病毒及其他负链RNA病毒构建更加简便、
一种新城疫病质粒拯救系统及其构建方法鉴定应用

[发明专利]一种高效建立转基因小鼠模型的辅助质粒及其构建方法-CN201510325397.6有效
发明人：周勇;温平;申友锋;唐秋月;何燕;刘兰兰;向垚艮;李建均 -专利权人：重庆高圣生物医药有限责任公司
申请日： 2015-06-12 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效建立转基因小鼠模型的辅助质粒及其构建方法。该辅助质粒与外源基因共转染小鼠受体细胞时，辅助质粒能在小鼠基因组特异性靶位点序列上形成32个缺口，为外源基因提供32个整合热点，能显著提高外源基因整合进入小鼠基因组的效率。该辅助质粒的构建过程简单、廉价，普通的实验室也可自行完成构建，其可直接与不同的外源基因共转染小鼠受体细胞，操作方法简单。本发明公开的辅助质粒能有效的提高制备小鼠稳定表达转基因细胞株的效率，能实现各种人类疾病转基因小鼠模型的高效构建，有利于人类疾病发病机理的研究和基因治疗的发展。
一种高效建立转基因小鼠模型辅助质粒及其构建方法

[发明专利]一种人源四次跨膜超家族蛋白12的大胞外片段TSPAN12-LEL制备方法-CN201811196755.8有效
发明人：串俊兰;杨正林;童荣生;张侯斌;黄璐琳;何霞;钟磊;张远 -专利权人：四川省人民医院
申请日： 2018-10-15 - 公布日： 2021-02-23 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物技术和基因工程技术领域，公开一种TSPAN12蛋白LEL片段制备方法，包括将含有TSPAN12蛋白LEL片段的编码序列重组到质粒中构建重组表达质粒，然后将质粒转化至表达宿主中，诱导表达TSPAN12本发明构建的蛋白表达体系提供了原核表达人源TSPAN12‑LEL的重组表达质粒构建方法，并将重组表达质粒转入表达宿主中构建了表达TSPAN12‑LEL的工程菌，通过诱导表达和纯化，获得高纯度可溶的TSPAN12
一种四次跨膜超家族蛋白 12 大胞外片段 tspan12 lel 制备方法

[发明专利]靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒构建方法及其用途-CN201310162299.6无效
发明人：李恭楚;武虎;陈磊;梁天祥 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2013-05-03 - 公布日： 2013-08-21 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了一种靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒构建方法及其用途。构建sCAR-4N1的表达框；插入到pXC2-sp-E1A质粒相应酶切位点,获得pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A质粒；pXC2质粒删除E1B、插入外源抗癌基因表达框构建得到pXC2-△E1B-gene质粒；然后构建得到pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene质粒。
靶向 cd47 阳性白血病细胞溶瘤腺病毒构建方法及其用途

[发明专利]一种高产羟基酪醇的大肠杆菌构建方法及应用-CN202010582557.6有效
发明人：袁吉锋;赖煜萌;曾白云 -专利权人：厦门大学
申请日： 2020-06-23 - 公布日： 2022-11-01 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种高产羟基酪醇的大肠杆菌构建方法及应用，该方法包括：PCR扩增获取HpaBC、LAAD、ARO10和PAR四种基因；构建质粒pACYC‑HpaBC、质粒pET‑LAAD‑ARO10和质粒pRSF‑PAR；将质粒pACYC‑HpaBC、质粒pET‑LAAD‑ARO10和质粒pRSF‑PAR共同转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，得到重组大肠杆菌。
一种高产羟基大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]重组仙台病毒的构建方法及其应用-CN202010313056.8有效
发明人：张曦;萧哲 -专利权人：梅尔顿（深圳）生物医药技术有限公司
申请日： 2020-04-20 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种重组仙台病毒的构建方法，包括：构建质粒pCAGGS‑NP/P/L；以仙台病毒逆转录样品为模板扩增SeV‑01/02 DNA；扩增线性化pUC57‑insert质粒收集pUC‑insert DNA；将SeV‑01/02 DNA片段和pUC‑insert DNA融合，获得Sev‑full质粒，酶切得到Sev‑full‑Not1；合成pUC57‑A质粒，酶切收集A‑Not1，与Sev‑full‑Not1连接得到Sev‑A质粒；提供293T细胞，加入pCAGGS‑NP/P/L、Sev‑A和T7‑opt三种质粒，转染得到重组仙台病毒。
重组仙台病毒构建方法及其应用

[发明专利]一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法-CN202110957544.7有效
发明人：刘延峰;张晓龙;董晓敏;刘龙;吕雪芹;堵国成;李江华;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-08-17 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法，属于遗传工程领域。本发明通过优化组装溶液成分，排除现有方法中存在有毒试剂二硫苏糖醇，以及DNA聚合酶、DNA连接酶、NAD等较昂贵的试剂。同时，太极组装4个片段构建质粒时，拥有95％以上的阳性率，在高通量构建质粒实验中，可以省略菌落PCR验证步骤，进一步简化高通量质粒构建流程。
一种安全无毒通量无缝构建质粒方法

[发明专利]一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法-CN201610458378.5在审
发明人：季晓飞;赵慧琳;李波清;张莹;王颖 -专利权人：滨州医学院
申请日： 2016-06-23 - 公布日： 2016-11-09 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明涉及微生物基因工程领域中的基因敲除技术，特别涉及一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法，（a）构建适用于幽门螺杆菌的敲除模板质粒和辅助质粒；（b）设计目的基因同源重组双交换同源臂，在敲除模板质粒基础上构建目的基因敲除质粒，转入幽门螺杆菌中得到基因敲除突变株；（c）将辅助质粒转入上步骤得到的基因敲除突变株中，去除抗性基因，得到携带辅助质粒的无痕基因敲除突变株；（d）辅助质粒通过无抗生素传代培养消除，最终获得无痕基因敲除突变株本发明，实现了幽门螺杆菌中无痕基因敲除突变株的构建，相比普通的基因敲除，该方法在实现目的基因敲除的同时不引入外源基因，使对目的基因的功能分析更为准确。
一种幽门螺杆基因无痕敲方法

[发明专利]重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用-CN201810206375.1有效
发明人：孟二红 -专利权人：北京多赢时代转化医学研究院
申请日： 2018-03-13 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。
重组溶瘤腺病毒用于制备载体及其构建方法应用