本发明属于基因工程技术领域，更具体地说，本发明涉及基于CRISPR/Cas9系统的向导RNA（gRNA）序列及其组合在用于特异性靶向敲除乙型肝炎病毒cccDNA P基因的gRNA。本发明根据CRISPR/Cas9的设计原则，设计了30个gRNA，其序列表见SEQ ID NO.1‑30所示，并且将其构建在PX458载体上，筛选出4个最高效率的gRNA。在人肝癌细胞株(HepG2.2.15)中利用这4条gRNA及其组合指导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的敲除人乙型肝炎病毒cccDNA P基因。利用本发明制备的特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA的gRNA能够精确靶向乙型肝炎病毒cccDNA并且实现基因敲除。该制备方法操作简单、gRNA靶向性好，CRISPR/Cas9系统的敲除效率高。
本发明属于分子生物学与生物医学技术领域。具体的说，本发明涉及基于CRISPR/Cas9系统的gRNA序列在敲除人Lin28A基因的应用以及肿瘤治疗中的应用。本发明根据CRISPR/Cas9的设计原则，设计了6个向导RNA（gRNA），其序列表见SEQ ID NO.1‑6所示，并且将其构建在PX458载体上，经活性检测筛选获得2个高效靶向gRNA。在人肝癌细胞株(HepG2)和人黑色素瘤细胞株（A375）中利用这2个gRNA指导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的敲除人Lin28A基因，这一系统易于操作，人Lin28A基因敲除效率高，适用于多种肿瘤细胞模型。本发明涉及的gRNA有望在治疗肿瘤的新型药物中得到应用。
本发明公开了一种糖肽类抗生素耐药基因检测试剂盒，包括探针1~23，其对应序列如SEQ ID NO.1~23所示；还公开了利用该试剂盒进行糖肽类抗生素耐药基因检测的方法使用本发明糖肽类抗生素耐药基因检测试剂盒进行检测，先要进行实验结果可信度评估，只有当阳性和阴性质控对照的检测结果同时分为别阳性（+）和阴性（‑），才认为该组检测结果可信。当检测对象的三个探针显示的结果一致时可以判断样品是否感染糖肽类抗生素耐药基因；当检测对象的三个探针显示的检测结果不一致时，无法判断该待测样品为阳性或阴性，建议使用该检测试剂盒重新检测或者使用现有其它检测方法进一步验证。本发明操作简单、快速高效、准确性高、结果易读。
