本发明公开了一种利用酶切技术鉴定大骨鸡品种的方法及PCR扩增专用引物对。专用引物见序列表SEQ ID NO 1‑2。鉴定方法:利用所述PCR扩增专用引物对大骨鸡样本DNA和待测DNA混合样本同时进行PCR扩增和酶切,然后采用2.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物,以大骨鸡样本DNA琼脂糖凝胶电泳图谱中两条电泳条带(294bp,460bp)为阳性结果;将待测DNA混合样本酶切产物电泳图谱与阳性结果进行比对,如果待测样DNA酶切产物琼脂糖凝胶电泳图谱中出现两条电泳条带(294bp,460bp)则认定为纯正的大骨鸡品种。该方法利用本实验室检测到的大骨鸡d‑loop区SNP变异位点对待测样本进行PCR扩增酶切检测,所设计引物和酶切酶具有良好的特异性。