所述的试剂盒中含有FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒以及PE2mRNA的体外转录模板质粒,以FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒为模板经PCR扩增得到的FecB‑pegRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.4所示,FecB‑sgRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.5所示。将体外转录获得的pegRNA、sgRNA及PE2mRNA纯化后混合,注射入绵羊受精卵细胞质中,受精卵体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中,生产的后代经检测后获得FecB基因g.A746G定点突变绵羊。
本发明提供一种体外转录mRNA的核苷酸分子、呈递细胞及应用,涉及生物技术领域,本发明提供的所述核苷酸分子至少具有SEQ ID NO.3所示的核酸序列;至少转录具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或/和具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的mRNA;所述呈递细胞是负载有体外转录mRNA的核苷酸分子的树突状细胞,所述体外转录mRNA的核苷酸分子可以用于制备mRNA筛选或/和评估模型,或直接用于筛选或/和评估抗原表位或mRNA,本发明提供的体外转录mRNA的核苷酸分子表达的mRNA稳定度更高,持续表达时间增长,成本低,普适性广,解决了目前的肿瘤抗原疫苗只能对单一的抗原进行呈递的技术问题。