[发明专利]一种茎环结构组合探针及其应用

摘要

本发明公开了一种茎环结构组合探针及其应用，该探针由两个具有茎环结构的DNA序列组成，探针I和探针II从5′端到3′端依次为茎环区、检测物识别区，其可用于端粒酶活性、RNA和DNA检测及端粒酶抑制剂筛选，检测物为端粒酶，探针I检测物识别区是端粒酶底物序列，探针Ⅱ检测物识别区是与端粒酶延伸序列中8～40个碱基互补的序列；检测物为RNA或DNA，探针I检测物识别区是与待测RNA或DNA的邻近3′端8～40个碱基互补的序列，探针II检测物识别区是与待测RNA或DNA的邻近5′端8～40个碱基相同的序列。本发明组合探针不需要荧光标记和放射性元素标记，其特有的颈环结构为核酸扩增反应提供了特异性的扩增模板，实现了恒温下信号快速放大，具有高的灵敏度和扩增效率。

主权项

一种采用茎环结构组合探针检测端粒酶活性的方法，其特征在于：将探针I加入待测端粒酶中进行反转录反应，反应完后加入探针II，在Bst DNA聚合酶的作用下进行环介导的等温核酸扩增反应，并加入SYBR Green I荧光染料，实时检测荧光信号，根据实时荧光曲线的最大拐点所对应的时间即可确定端粒酶的活性高低，时间越长说明端粒酶活性越低，时间越短说明端粒酶活性越高；上述的探针I和探针II从5′端到3′端依次为茎环区、检测物识别区，探针I的检测物识别区是端粒酶底物序列5′‑AATCCGTCGAGCAGAGTT‑3′，探针II的检测物识别区是与端粒酶延伸序列中8～40个碱基互补的序列，探针I和探针II的茎环区的碱基序列相同或不同；上述的茎环区的茎的长度为5～18个配对的碱基序列，茎环区的环的长度为15～35个碱基序列。