[发明专利]通用方案和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性位点法

摘要

本发明涉及通用方案和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性位点法，该方法首先利用通用引物方案对目的核酸序列区段进行PCR扩增，再应用F－CSGE技术进行高通量快速检测，最后通过DNA测序技术对筛查出的位点进行最终确证。与其他检测方法比较，本发明方法通量更高，检测速度更快，成本更低，可用于检测未知SNP和致病基因的单碱基突变，用于未知单碱基多态性、基因突变、单碱基插入或缺失等单碱基改变的筛查和确认。

主权项

1.一种通用方案和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性SNP位点法，包括下列步骤：(1)样本预处理采用试剂盒抽提测试者全血或组织基因组DNA；(2)PCR反应设计一对通用荧光引物，根据样本靶序列设计N对特异性附加通用荧光序列的非荧光引物，通用引物标记HEX荧光，特异性引物无需添加荧光标记，通用引物和特异性引物于同一PCR体系里进行反应；(3)构建异源双链选取样本A作为对照样本，其余样本PCR产物分别与A样本PCR产物混合后，利用6步梯度逐次降温法于PCR扩增仪构建异源双链；(4)配制构象敏感凝胶电泳CSGE温和变性胶与荧光-构象敏感凝胶电泳法F-CSGE检测SNPs；(5)根据电泳峰型图分析判断SNP状态；(6)DNA测序：在经F-CSGE发现SNP信号后，用DNA直接测序确定具体的变异类型。