本发明公开了一种老黄酶NemR‑PS突变体及其在制备(S)‑香茅醇中的应用，所述老黄酶NemR‑PS突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中第275位、第351位氨基酸进行单突变或双突变获得的。通过构建共表达老黄酶NemR‑PS突变体、醇脱氢酶YsADH和葡萄糖脱氢酶BmGDHM6的基因工程菌，以该基因工程菌作为催化剂，以恒速流加方式加入底物，一锅法多酶级联催化底物(E/Z)‑柠檬醛的二步还原，产物(S)‑香茅醇累积浓度达500mM，产物e.e.值99％，反应时间仅需12h，没有中间产物和副产物残留。
本发明公开了一种高效分泌表达重组人源Ⅲ型胶原蛋白α1链的毕赤酵母及其发酵工艺，属于微生物发酵技术领域。本发明首先将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列转化毕赤酵母GS115，为进一步提高表达量再将Hac1基因SEQ ID NO.3导入3拷贝胶原蛋白基因的重组毕赤酵母，并通过PTVA筛选出了COL‑C基因拷贝数为3、Hac1基因拷贝数为3的重组毕赤酵母菌株GS‑COL3‑H3。这一优化的基因拷贝数组合明显提高了胶原蛋白的分泌表达效率，本发明优化得到的高密度发酵工艺可减少重组人源Ⅲ型胶原蛋白α1链的降解，菌株GS‑COL3‑H3在5L发酵罐中应用该工艺，胶原蛋白降解率减少至10％以下。
本发明公开了一种胶原蛋白短肽突变体融合蛋白及在制备乳铁蛋白肽中的应用，所述胶原蛋白短肽突变体融合蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明通过改造胶原蛋白短肽作为载体蛋白能更好的引导牛乳铁蛋白肽的表达，增加其表达量，提高了10‑15倍，且通过合理设计的胶原蛋白短肽及连接酸解肽在后续酸解过程中能被酸降解为氨基酸，释放乳铁蛋白肽，该乳铁蛋白肽可用于医药、食品及饲料等领域。
本发明公开了一种核苷水解酶突变体、工程菌及应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第12位、190位氨基酸进行单突变或双突变获得的。本发明核苷水解酶突变体NH‑S12P、NH‑S190V酶活力达到1030U/mg、1197U/mg，相较于野生型核苷水解酶比活力提高了18.8％、38％，且两种突变体在65℃的热稳定性相较于野生型核苷水解酶分别提高了8倍和10倍。核苷水解酶热稳定性的提高有助于减少生产、运输、应用、存贮过程中酶的热失活率。这对酶法水解核苷制备嘌呤的工业化生产效率提高具有重要意义。
