[发明专利]用于检测伴随肾综合症的出血热相关病毒的方法无效
| 申请号： | 95105462.7 | 申请日： | 1995-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN1066199C | 公开（公告）日： | 2001-05-23 |
| 发明（设计）人： | 水谷滋利;向井博之;大岛淳;浅田起代藏;竹迫一任;加藤郁之进;伊势川裕二 | 申请（专利权）人： | 宝酒造株式会社 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12P19/34;C12N15/40 |
| 代理公司： | 柳沈知识产权律师事务所 | 代理人： | 巫肖南 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 伴随 综合症 出血热 相关 病毒 方法 | ||
【说明书】：
本发明涉及一种用于检测与伴随肾综合症的出血热相关病毒的方法，具体地说，涉及一种用遗传工程的方法对病毒特定核酸区段进行检测的方法。
本发明还涉及用遗传工程方法进行检测所使用的引物。
伴随肾综合症的出血热(下文简称HFRS)是一种传染性疾病，该疾病由啮齿类动物携带，并广泛存在于人类和各种动物中。在人类中，该疾病能引起伴随有以肾脏异常为主要症状的急性感染，而在啮齿类动物中常发现的是持续性感染，该感染因此成为这种疾病的感染源。
该综合症在包括远东地区的亚洲部分，俄罗斯及欧洲国家的广大地区均被发现。据最近报道，在美国也有发现[Science，262，914-917(1993)]。世界上每年这种疾病的患者人数达数十万。在日本，有实验用鼠被感染并由此被致死事例的报道。
自从1978年Lee等人从Apodemus agrarius的肺中分离出Hanta-an品系病毒以来，十多个品系的这类病毒(下文简称HFRSV)已经从野生或实验用鼠以及HFRS患者的肺脏、血液、肿瘤、胰脏等中被分离出来，包括在日本从实验用鼠中分离出的B-1品系。
属于Hantaan Virus属的HFRSV Hantaan品系在远东地区的亚洲部分具有最强的致病性，引起的死亡率为10～15％[Anitekkusu，5(6)，273-276(1993)]。
B-1是属于Seoul属的HFRSV的一个品系。该病毒以鼠类为宿主，目前正流行于日本，并具有很强的感染性，但与Hantaan品系相比，其致病性较弱。
HFRSV是属于Bunyaviridae科的单链RNA病毒，其RNA是由被分别称为大链(L链)、中链(M链)和小链(S链)的三个片段组成的。
HFRSV RNA的复制是由RNA依赖的RNA聚合酶完成的。在含有活性病毒的被感染细胞内不仅含有基因组RNA的负链(VRNA)，也含有vRNA复制所必需的，与vRAN互补的正链RNA(cRNA)以及正链的mRNA。目前，HFRS是由血清检测结合根据临床症状的判断进行诊断的。近几年来，也有用聚合酶链式反应(PCR)方法进行其诊断的(JP-A-3-120000；Science，op.cit.)。
血清诊断法是用间接荧光抗体技术等检测方法进行的。由于抗体检测技术有很高的特异性，可以进行HFRS始发后的早期诊断。但是抗体检测技术只能间接表明病毒的情况，而不能直接表明病毒的存在。
每一个HFRSV颗粒是由四种蛋白质和基因组成的，而且HFRSV的特性是由基因决定的。
用PCR技术扩增HFRSV基因的特异核苷酸序列可在疾病的更早期，直接、快速而且高灵敏度地检测病毒的存在。
然而，迄今报道的PCR技术在检测临床采集的样品中，尤其是在以痕量存在有病毒的血液样品中的病毒的灵敏度方面还没有达到令人满意的水平。
本发明的目的是阐明一段可用PCR较高灵敏度地扩增的HFRSV核酸区域，从而提供了一种检测该区域的方法和在该方法中检测HFRSV所使用的引物。
本发明的第一方面涉及一种检测HFRSV的方法。该方法包括，通过逆转录和随后的两步PCR反应，扩增从序列表中SEQ ID NO：1至5分别所代表的核酸组成的一组核酸中选出的至少一种核酸上的一部分序列及其互补序列。
本发明的第二方面涉及一种检测HFRSV的方法，该方法包括如下步骤：
(a)从待测样品中分离出核酸；
(b)使用从序列表中SEQ ID NO：6所示的核酸片段或其变异型序列，和/或序列表中SEQ ID NO：7所示的核酸片段或其变异型序列选出的核酸片段为引物，将分离出的核酸进行逆转录，从而获得逆转录的产物DNA；
(c)用序列表中SEQ ID NO：6所示的核酸片段或其变异型序列，结合序列表中SEQ IN NO：7所示的核酸片段或其变异型序列，将逆转录的产物DNA进行第一次PCR步骤，从而使DNA得到扩增；
(d)用序列表中SEQ ID NO：8所示的核酸片段或其变异型序列结合序列表中SEQ ID NO：9所示的核酸片段或其变异型序列，将扩增的DNA进行第二次PCR步骤，从而获得再次扩增的DNA；以及
(e)检测扩增DNA。
本发明的第三方面涉及一种检测HFRSV所用的引物，该引物具有序列表中SEQ ID NO：6至9所示的核酸序列或其变异型序列。
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- 本发明公开了一种靶向检测血液中乙肝病毒前基因组RNA的检测体系和数字PCR检测方法。检测体系包括：3对引物序列：HBV基因型B的正向引物，其核苷酸序列如SEQ NO.1所示，反向引物，其核苷酸序列如SEQ NO.2所示；HBV基因型C的正向引物，其核苷酸序列如SEQ NO.3所示，反向引物，其核苷酸序列如SEQ NO.4所示'；HBV基因型D的正向引物，其核苷酸序列如SEQ NO.5所示，反向引物，其核苷酸序列如SEQ NO.6所示。通过靶向富集乙肝治疗患者的血清中游离的乙肝病毒前基因组RNA，设计针对pgRNA的特异性引物和优化扩增反应体系，开发一种更加灵敏和精确定量监测慢乙肝治疗疗效和安全停药的血液pgRNA的检测试剂盒和诊断方法。
- 一种高危型人乳头瘤病毒分型检测的引物探针组及其应用、试剂盒及检测方法-202311031128.X
- 张森;李贵喜;李三华;谢夏;郭琴;王少辉;郭曙光;霍清园;李丹阳;张鑫;齐华 - 河南赛诺特生物技术有限公司
- 2023-08-15 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明涉及一种高危型人乳头瘤病毒分型检测的引物探针组及其应用、试剂盒及检测方法。本发明提供的试剂盒中包含特异性引物探针组，并对反应体系进行合理优化，保证了对高危型人乳头瘤病毒分型检测的灵敏度和特异性，使其更加贴合对受试者尿液样本的检测。试剂盒中包含的标准品可以辅助完成对人乳头瘤病毒高危型别进行分型定量检测，搭配不受采样手法的不同而影响质量的尿液样本，能保证细胞量维持在一个相对均衡的水平，使定量检测的结果更有意义。同时，本发明提供的检测方法能够对受检者体内HPV病毒进行定量检测，从而观察受检者体内在一定时间段内病毒型别与载量的变化情况，从而给予临床医生更多帮助，有利于医生出具针对性的治疗方案。
- 一种RT-qPCR检测黄瓜花叶病毒的方法-202311143956.2
- 刘艳梅 - 南昌师范学院
- 2023-09-06 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种RT‑qPCR检测黄瓜花叶病毒的方法，涉及生物技术领域。该方法包括以下步骤：(1)提取得到待检样品的总RNA，之后反转录得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，利用特异性引物对进行RT‑qPCR反应，根据Ct值判断所述待检样品中是否含有黄瓜花叶病毒：当15Ct值35时，为阳性，即为含有所述黄瓜花叶病毒；当Ct值≥35时，为阴性，即为不含有所述黄瓜花叶病毒。本发明针对黄瓜花叶病毒基因组编码外壳蛋白的基因保守区域，设计了特异性强的RT‑qPCR检测引物，并建立了一种高效的RT‑qPCR检测方法，可为黄瓜花叶病毒的准确高效监测防控提供了技术支持。
- 适用于15种植物检疫病毒的靶向测序建库及检测方法-202210150996.9
- 毛凌峰;孙凯;尹传林;俞晓平 - 杭州柏熠科技有限公司
- 2022-02-18 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明提供一种适用于15种植物检疫病毒的靶向测序建库及检测方法，设计针对15种植物检疫病毒的特异引物池，并将特异性多重反转录技术与纳米孔技术相结合，建立针对15种植物检疫病毒的靶向捕获测序方法，具备高灵敏度、高通量、低成本的优点，可实现单次建库测序检测15种植物检疫病毒的目标，可解决目前植物病毒检疫存在的检测通量低、检测目标单一的问题。
- 检测BK病毒的方法和组合物-201910529553.9
- F·陈;L·I·孔;J·陈;M·捷纳提保 - 焦点诊断公司
- 2006-07-25 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明提供了用于快速、灵敏和高度特异性地基于核酸(例如，基于DNA)检测样品中的BK病毒的方法和组合物。一般地，所述方法涉及检测具有BK病毒基因组保守区域的靶序列的靶核酸。本发明也表征了用于本发明方法的组合物和试剂盒，所述组合物包括引物、探针。
- 猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法及应用-202310790990.2
- 朱旭;郝鹏;张燕红;王艳杰;张海宝;韩冬;李晓燕;孟书丽;赵嘉楠;赵飞飞;高晓宇;吴孟楠;李培艳;燕成义;杨晶;乌恩宝音;海丽丽;段可欣 - 金宇保灵生物药品有限公司;金宇共立动物保健有限公司
- 2023-06-29 - 2023-10-20 - C12Q1/70
- 本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法及应用。所述猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法包括如下步骤：使用灭活剂处理猫杯状病毒液，得到灭活抗原液；使用透析袋去除所述灭活抗原液中的灭活剂，得到纯化灭活抗原；所述透析袋的规格为80‑200kd；所述透析袋的透析时间为5‑12h；测定所述纯化灭活抗原的毒价。所述方法通过透析袋透析灭活剂处理后的灭活抗原，能精准的控制灭活剂的处理时间，进而缩短灭活周期。且使用透析袋可以去除灭活剂残留，在进行灭活检验时，不会因为灭活剂残留而影响灭活结果的判定。本发明所述方法无需多次抗原传代，即可获得抗原的灭活检验结果。
- 引物组和探针、试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法-202311144718.3
- 刘志成;勾红潮;沈海燕;张春红;乌日尼乐;聂晶晶;瞿云芝;张建峰 - 广东省农业科学院动物卫生研究所
- 2023-09-06 - 2023-10-20 - C12Q1/70
- 本发明属于生物技术领域，公开了一种引物组和探针，包含核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1‑6所示的FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB组成的引物组以及如SEQ ID NO：7‑8所示的荧光探针probe和淬灭探针Quencher，该引物组能够对猪流行性腹泻病毒野毒株、疫苗株均进行扩增，对于野毒株的ORF3基因保守区域开发出荧光引物，用于进行荧光的特征性反应，实现了对猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的高特异性、敏感性的快速定量检测。同时，本发明还提供了一种试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法。
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