[发明专利]检测人副流感病毒的组合物、试剂盒、方法及其用途

说明书

本发明属于生物检测领域，具体地，涉及人副流感病毒的检测，更具体地，涉及一次检测中同时检测人副流感病毒2型(HPIV2)、人副流感病毒4a型(HPIV4a)、人副流感病毒4b型(HPIV4b)。与此同时，还提供了包括所述组合物的试剂盒，所述组合物的用途，以及用于检测人副流感病毒并分型的方法。本发明的组合物，其成本低，通量高。并且操作简便，结果读取过程通过Ct值即可以判定。其灵敏度低至200拷贝/mL，同时还能有效的预防漏检，进一步增加检测准确率。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体地，涉及人副流感病毒的检测，更具体地，涉及一次检测中同时检测人副流感病毒2型(HPIV2)、人副流感病毒4a型(HPIV4a)、人副流感病毒4b型(HPIV4b)。

背景技术

人副流感病毒(human parainfluenza virus)是一种单胞RNA病毒，属副粘液病毒科。人副流感病毒根据遗传学以及抗原性可分为四种血清学即HPIV1-4，它们有不同的临床和流行病学特征。有血清学流调资料证实，绝大多数6-10岁的儿童曾感染过HPIV。HPIV根据遗传学和抗原构造的不同分为1、2、3、4型。HPIV1型和HPIV3型属于副粘病毒亚科呼吸病毒属，HPIV2型和HPIV4型属于副粘病毒亚科病毒属。而HPIV4又分为a和b两个亚型。

目前国内对人副流感病毒的诊断试剂盒基本都是针对于人副流感病毒1型、3型，以往认为HPIV2、HPIV4引起的疾病轻微故临床上也很少采用其它的方法来检测，但近年有血清学流调资料显示，在所有呼吸道感染患者中HPIV4抗体阳性约占3％，而儿童和青少年却高达50-90％。

目前检测人副流感病毒的方法较多，但都存在不足，如病毒分离培养法耗时极长且假阴性较多，不能作为人副流感病毒快速诊断的方法；直接免疫荧光检测法检测速度快，但敏感性不如组织培养，结果判定需要丰富经验；酶联免疫法检测的是病毒特异性抗体但一次仅能检测一种病毒。而现在使用的荧光PCR检测副流感病毒的技术又都存在灵敏度较低的缺陷，不能满足如今灵敏检测的需求，存在漏检的可能性。

因此，存在荧光PCR检测副流感病毒的需求，其灵敏度高，特异性好。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明提供一种检测副流感病毒并分型的组合物，其特征在于，所述组合物包括：

如SEQ ID NO:1所示的人副流感病毒2型上游引物、如SEQ ID NO:2所示的人副流感病毒2型下游引物，和如SEQ ID NO:3所示的人副流感病毒2型探针；

如SEQ ID NO:4所示的人副流感病毒4a型上游引物、如SEQ ID NO:5所示的人副流感病毒4a型下游引物，和如SEQ ID NO:6所示的人副流感病毒4a型探针；以及

如SEQ ID NO:7所示的人副流感病毒4b型上游引物、如SEQ ID NO:8所示的人副流感病毒4b型下游引物，和如SEQ ID NO:9所示的人副流感病毒4b型探针。

本发明提供的检测副流感病毒并分型的组合物，主要利用多重荧光PCR方法，对不同类型副流感病毒在一管内进行检测，使得不同毒株能够得到区别对待，从而使得治疗和预防更有效。本发明的组合物，其成本低，通量高。并且操作简便，结果读取过程通过Ct值即可以判定。其灵敏度低至200拷贝/mL，同时还能有效的预防漏检，进一步增加检测准确率。

进一步地，组合物内的探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。

在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用FAM、HEX、ROX和CY5，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。

在一些具体的实施方案中，本发明组合物用于荧光PCR。