[发明专利]一种由海参内脏提取ACE抑制肽的方法及应用

说明书

本发明属于生物资源综合利用领域，具体涉及一种由海参内脏提取ACE抑制肽的方法及应用。将海参内脏预处理后，加入酶酶解，灭酶后过滤收集上清；通过透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，冷冻干燥得ACE抑制肽干粉。通过本方法制备得到的海参内脏ACE抑制肽活性好，成本低，易于大量生产，可用于食品的组方生产，同时实现海参内脏的综合高值利用，具有良好的经济和社会效益。

技术领域

本发明属于生物资源综合利用领域，具体涉及一种由海参内脏提取ACE抑制肽的方法及应用。

背景技术

海参因其营养和保健价值被人们熟知，而作为海参加工副产物的海参内脏往往被丢弃，一方面造成了资源浪费，另一方面容易造成环境污染。因此探究海参内脏深加工工艺，提取和利用海参内脏中的营养成分具有良好的现实意义。

海参皮中含有丰富的胶原蛋白，同时含有海参多糖、皂甙、微量元素等营养物质，而海参内脏中的营养成分组成和含量与海参皮存在明显区别，如胶原蛋白的含量少，多糖、不饱和脂肪酸等物质含量高，并且含有多种具有不同生物活性的酶、功能蛋白等物质。因此深加工工艺存在较大差异。

血管紧张素转化酶(ACE)又称激肽酶Ⅱ，是一种血管内皮细胞膜结合酶，其可将人体中的血管紧张素I转化为血管紧张素II，导致人体血管收缩，促使血压升高，目前认为ACE与高血压症密切相关。

现阶段使用最广泛的处方合成类降压药如:阿米洛利、依那普利等，均旨在抑制血管紧张素I转化酶活性。但长期服用处方类降压药，会随之产生副作用。而天然食物来源的ACE抑制肽具有安全、易被人体吸收、产生的不良影响少等优势，已成为新药研发和替代治疗的可选择途径。如将食源性蛋白通过不同的酶酶解后，再利用多种分离纯化方法，从动植物中获得天然的ACE抑制活性肽片段，其主要来源于牛奶、大豆、鸡蛋、大蒜、玉米，同时，海洋生物来源的ACE抑制肽也有陆续报道，已从贝类、甲壳类、以及各种鱼中提取到多种类型的ACE抑制肽。

ACE抑制肽在母体蛋白中没有活性，但能通过酶水解方法从母体蛋白中释放出。由于ACE抑制肽氨基酸组成和结构差别很大，没有固定或统一氨基酸组成，且食物中蛋白酶解产物成分相当复杂，大大增加其分离提取难度。

虽然申请号为CN 201110384723.2和CN201811214660.4的中国专利均利用海参或其体壁制备ACE抑制肽，但制备产量低、成本高，不利于大批量生产，同时目前海参或其内脏中活性多肽的提取多采用商业化蛋白酶或益生菌剂进行生产，蛋白酶和菌剂的种类有限，酶酵解产物较为单一，多为活性较弱的营养类多肽产品，且操作繁琐，生产成本较高，存在物料损失严重、产物活性丧失较大等问题。

发明内容

根据上述现有技术，本发明公开一种由海参内脏提取ACE抑制肽的方法及应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种由海参内脏提取ACE抑制肽的方法：

(1)将-20--10℃冷冻储存的海参内脏置于20-30℃解冻3-5h，而后加入其5-10倍体积的处理液中浸泡20-40min，匀浆；

(2)在步骤（1）得到的匀浆液中添加其质量1-3％的酶，调节温度至30-55℃，pH为4-11，酶解1-5h，80-100℃灭酶10-20min；酶解后冷却至15-25℃，6000—10000 r/min离心10-30 min，过滤收集上清液；

(3)将步骤（2）所得的上清液装入截留分子量500-10000Da 的透析袋中，置于4-10℃的透析液中透析10-20h，得到粗溶液；

(4)将步骤（3）所得的ACE抑制肽粗溶液，通过葡聚糖凝胶柱层析进行精细纯化，用含有0 .01-0.05mol/LZn离子的PBS洗脱，测定228nm吸光度的洗脱液，将收集的洗脱液冷冻干燥，得ACE抑制肽。