[发明专利]一个与玉米籽粒支链淀粉含量相关的dCAPS分子标记

权利要求书

1.一种与玉米籽粒支链淀粉含量相关的waxy1-2突变体，其特征是，相比野生型，waxy1-2突变体中waxy1基因在第10个外显子上发生了C→T单碱基突变，导致第431位氨基酸由谷氨酸Gln变为终止密码子，waxy1-2突变体的支链淀粉含量≥95％，突变位点处相关的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的waxy1-2突变体在培育玉米高支链淀粉新品种方面的应用。

3.一个与玉米籽粒支链淀粉含量相关的dCAPS分子标记，其特征是，与玉米籽粒支链淀粉含量野生型基因Waxy1-2检测相关的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；与玉米籽粒支链淀粉含量突变体基因waxy1-2检测相关的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.权利要求3所述的dCAPS分子标记在糯玉米遗传育种中的应用。

5.权利要求3所述的dCAPS分子标记的特异引物，其引物序列为：

dCAPS-F：

5’-GTCATGGCGGCCGCCATCCCGCAGCTCATGGAGATGGTGGAGGACGTC-3’；

dCAPS-R:5’-GACCACGGCGCGCACCTTGC-3’。

6.权利要求3所述的dCAPS分子标记或者权利要求5所述的特异引物在鉴定玉米籽粒支链淀粉含量waxy1-2突变基因型和野生型中的应用。

7.一种鉴定玉米籽粒支链淀粉含量waxy1-2突变基因型和野生型的方法，其特征是，

(1)以待测玉米材料的基因组DNA为模板，以SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的特异性引物进行PCR扩增；

(2)对步骤(1)得到的PCR产物进行限制性内切酶XbaI酶切，然后利用琼脂糖凝胶电泳进行分离；

若所得酶切产物仅有235bp的DNA片段，则待测玉米材料为具有Waxy1-2野生基因型且支链淀粉含量低的非糯性材料；

若所得酶切产物为大小187bp和47bp的两个DNA片段，则待测玉米材料为具有waxy1-2突变基因型且支链淀粉含量高的糯性材料；

若所得酶切产物为235bp、187bp和47bp三个DNA片段，则待测玉米材料为具有waxy1-2杂合基因型且支链淀粉含量低的非糯性材料。

8.如权利要求7所述的方法，其特征是，PCR扩增采用的PCR体系为：10μmol/L的正反向引物各1μL，基因组DNA 1μL，EasyTaq DNA聚合酶0.2μL，buffer 2.5μL，dNTPs 2μL，ddH₂O补足至25μL。

9.如权利要求8所述的方法，其特征是，PCR扩增采用的PCR反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃过度延伸5min；16℃保存。