[发明专利]一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法在审
| 申请号： | 202210316240.7 | 申请日： | 2022-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN114561487A | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 安焱林;陶玲玲;张丰;喻仕瑞;李雪琪 | 申请（专利权）人： | 茅台学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 陈雍 |
| 地址： | 56450*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 indel 分子 标记 鉴别 茶树 小叶 品种 方法 | ||
1.一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：所述InDel分子标记的上游核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述InDel分子标记的下游核苷酸序列如SEQID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：用于检测所述InDel分子标记的引物对包括序列如SEQ ID NO.3所示的F1以及序列如SEQ ID NO.4所示的R1。
3.根据权利要求2所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：
S1：提取待测茶树样本中的总DNA，获得待扩增DNA；
S2：使用F1和R1对待扩增DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；
S3：对所述扩增产物进行电泳检测。
4.根据权利要求3所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：在S3中，所述电泳检测为毛细管电泳检测。
5.根据权利要求4所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：在S3中，电泳检测结果显示仅在700bp DNA marker附近出现条带，则待测茶树样本为纯合的大叶品种；电泳检测结果显示仅在500bp DNA marker附近出现条带，则待测茶树样本为纯合的小叶品种；电泳检测结果显示在700bp和500bp DNA marker附近出现条带，则待测茶树样本为大叶品种和小叶品种的杂合品种。
6.根据权利要求5所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：在S1中，使用CTAB法提取待测茶树样本中的总DNA。
7.根据权利要求6所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：在S2中，PCR扩增的程序为：94℃预变性5min、30个循环、72℃延伸10min、4℃保存；在30个循环中，每个循环的程序为：94℃变性30s、退火30s、72℃延伸50s；F1和R1的退火温度均为58℃。
8.根据权利要求7所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法，其特征在于：在S2中，PCR扩增的反应体系为：50ng/μL的DNA溶液1μL、10μM的F1 0.5μL、10μM的R10.5μL、2×Taq MasterMix酶5μL、双蒸水3μL。
9.一种茶树的InDel分子标记，其特征在于：所述InDel分子标记位于舒茶早基因组2号染色体的基因CSS0006562的终止密码子下游135bp处，长度为184bp。
10.根据权利要求9所述的InDel分子标记在鉴别茶树大小叶品种中的应用。
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