[发明专利]用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的引物、试剂盒及鉴别方法在审
| 申请号： | 202210281844.2 | 申请日： | 2022-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN114540519A | 公开（公告）日： | 2022-05-27 |
| 发明（设计）人： | 罗爱民;王颖;吴茗花;邱勇 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/07 |
| 代理公司： | 成都中亚专利代理有限公司 51126 | 代理人： | 赵婷 |
| 地址： | 610065 四川省*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 鉴别 大曲 淀粉 芽孢 杆菌 引物 试剂盒 鉴别方法 | ||
1.用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的引物，其特征在于，为一对特异性ARMS引物：ARMS-1F和ARMS-1R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示。
2.如权利要求1所述的用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的引物，其特征在于，所述ARMS引物是使用PCR引物2-F和2-R扩增解淀粉芽孢杆菌后设计得到，所述2-F和2-R的碱基序列分别如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示。
3.用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1或2所述的用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的引物。
4.用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的方法，其特征在于，包含以下步骤：
提取待测菌株基因组DNA；
以待检测菌株基因组DNA为模板，利用权利要求1或2所述的用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的引物进行实时荧光定量PCR方法进行定性分析，根据扩增循环数差值鉴别出大曲中解淀粉芽孢杆菌。
5.如权利要求4所述的用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR方法反应程序为：95℃预变性10 min；95℃变性10 s，60℃退火30 s，75℃延伸45s，40个循环，在60℃收集荧光信号。
6.如权利要求4或5所述的用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的方法，其特征在于，实时荧光定量PCR反应体系为：总体积20μL，包括qPCR Mix 10μ L，2.5 µmol/L、0.8μL的ARMS-1F引物，2.5 µmol/L、0.8μL的ARMS-1R 引物，待测菌株基因组DNA模板1μL，ddH2O7.4uL。
7.如权利要求4所述的用于鉴别大曲中解淀粉芽孢杆菌的方法，其特征在于，所述待测菌株包含解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、嗜气芽孢杆菌、不动芽孢杆菌和人参芽孢杆菌。
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