[发明专利]一种具有增肌作用的豌豆肽及其制备方法、药物和应用

说明书

本发明提供了一种具有增肌作用的豌豆肽及其制备方法、药物和应用，属于多肽技术领域。本发明通过酶解豌豆蛋白，分离得到5条具有明显增肌作用的多肽。在体外衰老骨骼肌细胞试验，通过分析对骨骼肌细胞增殖分化、细胞凋亡自噬以及蛋白质合成和降解相关的调控通路的基因表达水平的变化，同时展开动物试验对其增肌效果及其机制进行研究，表明5条多肽序列具有显著增肌效果，有望开发为新型治疗或预防肌少症的多肽类药物。

技术领域

本发明属于多肽技术领域，具体涉及一种具有增肌作用的豌豆肽及其制备方法、药物和应用。

背景技术

肌肉减少症，是指因持续骨骼肌量流失、强度和功能下降而引起的综合症。骨骼肌是人体运动系统的动力，肌肉的衰老和萎缩是人体衰老的重要标志，非常容易引起骨折以及关节损伤等问题。肌少症是一种和年龄衰老相关的疾病，随着年龄的增加，活动量的减少，人的肌肉含量和强度会逐渐的衰减，而机体的肌肉并不能够维持平衡力和敏捷度，必然会造成行动力减弱，使身体变得行动迟缓，平衡感差，更容易摔倒。因此，肌少症会增加老年人的住院率及医疗花费，严重影响老年人的生活质量，甚至缩短老年人的寿命。

目前预防和治疗肌少症主要分为以下三个方面：（1）采用运动疗法确切的可以保持甚至是增加肌肉强度和肌肉含量；（2）采用药物进行干预治疗，但是，目前国内还没有针对肌肉症的药物上市，很多所谓的具有防治极少症功能的药物大多是激素，利弊尚不能完全搞清楚。（3）营养干预治疗，大多数老年人的饮食结构都存在热量、钙质、蛋白质和维生素D等摄入不足。那么平衡的膳食，丰富的营养，尤其是蛋白质之类的食物，就应该多吃。蛋白质、碳水化合物等营养物质摄入缺乏会增加少肌症的患病率。此外，营养吸收状况差，胃肠道疾病，或者多重用药等导致少食少餐，营养过剩等都对少肌症的进展起着“推波助澜”的作用。衰老过程引发的消化系统退化致使吞入的食物中的营养物得不到有效吸收利用，长期营养物缺乏状态降低了老年人的活动供能，同时存在肌肉蛋白降解远大于合成能力，肌组织调控负平衡，肌肉负担加剧，恶性循环致使少肌症产生。补充蛋白质等营养素可有效预防和治疗少肌症带来的肌肉数量和肌肉功能方面的病理改变，改变患者临床结局。小分子低聚肽具有致敏性低、易吸收、吸收速率快等特点，且氨基酸含量丰富，可促进肌肉蛋白合成，有效防治少肌症发生进展。

豌豆中含有丰富的蛋白质，含有9种人体必须氨基酸，且支链氨基酸含量丰富，支链氨基酸可以促进胰岛素和生长激素的释放，加快肌肉对糖分的利用。然而目前，还未明确豌豆中具有增肌作用的蛋白肽的种类，限制了防治肌少症的肽类药物的开发。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有增肌作用的豌豆肽及其制备方法和应用。

本发明提供了一种具有增肌作用的豌豆肽，包括以下一种或几种多肽：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的PP1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的PP2、氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示的PP3、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的PP4和氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的PP5。

优选的，包括PP2或PP2与以下一种或几种多肽形成的混合物：PP1、PP3、PP4和PP5。

本发明提供了所述豌豆肽的制备方法，包括以下步骤：

1）将豌豆蛋白在碱性蛋白酶的作用下酶解，得到第一酶解液；

2）将所述第一酶解液在木瓜蛋白酶和纤维素酶共同作用下酶解，得到第二酶解液；

3）将所述第二酶解液灭酶后过3000Da陶瓷膜，所得透过液过1KDa有机膜，收集有机膜膜透过液，得到豌豆肽；

4）将所述豌豆肽经凝胶色谱层析，收集12~18min的组分S2；

5）将所述组分S2经制备型液相色谱分离纯化，收集55~63min的组分W5；