[发明专利]一种具有增肌作用的豌豆肽及其制备方法、药物和应用

权利要求书

1.一种具有增肌作用的豌豆肽，其特征在于，包括以下一种或几种多肽：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的PP1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的PP2、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的PP3、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的PP4和氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的PP5。

2.权利要求1所述豌豆肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将豌豆蛋白在碱性蛋白酶的作用下酶解，得到第一酶解液；

2）将所述第一酶解液在木瓜蛋白酶和纤维素酶共同作用下酶解，得到第二酶解液；

3）将所述第二酶解液灭酶后过3000Da陶瓷膜，得到的透过液过1KDa有机膜，收集有机膜膜透过液，得到豌豆肽；

4）将所述豌豆肽经凝胶色谱层析，收集12~18min的组分S2；凝胶色谱层析的条件如下：洗脱液为超纯水；洗脱时间2h；洗脱速度：2.5mL/min；色谱柱规格为600 mm×25 mm，种类为Sephadex G50色谱柱；检测波长：214nm；

5）将所述组分S2经制备型液相色谱分离纯化，收集55~63min的组分W5；制备型液相色谱分离纯化的条件如下：制备型液相色谱柱的规格550mm×40μm，粒度20μm，流速为15mL/min，流动相A为体积浓度0.1%三氟乙酸水溶液，流动相B为体积浓度0.1%三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脱，洗脱程序如下：

洗脱时间0~10min，流动相A的体积百分含量为100%~90%，流动相B的体积百分含量为0~10%；

洗脱时间10~20min，流动相A的体积百分含量为90%~50%，流动相B的体积百分含量为10%~50%；

洗脱时间20min~60min，流动相A的体积百分含量为50%~10%，流动相B的体积百分含量为50%~90%；

洗脱时间60min~65min，流动相A的体积百分含量为10%~95%，流动相B的体积百分含量为90%~5%；

洗脱时间65~100min，流动相A的体积百分含量为95%，流动相B的体积百分含量为5%；

6）将所述组分W5进行分析型液相色谱分离纯化，分别在14.444min、18.110min、20.906min、22.973min、24.462min收集到5个多肽片段，依次为PP1、PP2、PP3、PP4和PP5；

分析型液相色谱分离纯化的条件为Gemini-NX 10μm C18 100A，4.6×250mm，流速为15mL/min，流动相A为体积浓度0.1%三氟乙酸的水溶液，流动相B为0.1%三氟乙酸的乙腈溶液；流速1.0mL/min，进样量10μL，吸光度220nm；梯度洗脱，洗脱程序如下：

洗脱时间0~5min，流动相A的体积百分含量由95%下降至90%，流动相B的体积百分含量由5%上升至10%；

洗脱时间5min~55 min，流动相A的体积百分含量由90%下降至15%，流动相B的体积百分含量由10%上升至85%；

洗脱时间55min~60min，流动相A的体积百分含量由15%上升至95%，流动相B的体积百分含量为85%下降至5%。

3.权利要求1所述豌豆肽或权利要求2所述制备方法制备得到的豌豆肽在制备预防和/或治疗少肌症的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述药物具有促进成肌细胞增殖、激活成肌细胞中生长和增殖信号通路、提高雄性机体睾酮水平、提高骨骼肌再生调控因子表达、提高骨骼肌线粒体中ATP酶活性和激活胰岛素信号通路的药效。

5.一种预防和/或治疗少肌症的药物，其特征在于，活性成分包括权利要求1所述豌豆肽或权利要求2所述制备方法制备得到的豌豆肽。

6.根据权利要求5所述药物，其特征在于，所述药物的剂型为口服剂。